El documento describe el método de Sanger para la secuenciación de ADN automática. Este método involucra cuatro reacciones simultáneas que utilizan ADN polimerasa y didesoxinucleótidos marcados con fluoróforos para generar fragmentos de diferentes longitudes que luego son separados por electroforesis capilar y leídos para determinar la secuencia de nucleótidos. El método de Sanger ha sido ampliamente utilizado y automatizado, lo que ha facilitado el análisis de la estructura del ADN y su papel en la expresión g

1. UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA
ESCUELA PROFESIONAL
DE INGENIERIA AMBIENTAL
CURSO:BIOTECNOLOGÍA
INTEGRANTE:
 MORALES QUISPE,LETICIA INES
DOCENTE:
 Dr. SOTO GONZALES,HEBERT HERNAN
SECUENCIACION DE ADN AUTOMATICO
(METODO DE SANGER)

2. ¿Qué es ?
Secuenciación del ADN
Es un conjunto de técnicas bioquímicas cuya
finalidad es la determinación de nucleótidos de
adenina, citosina guanina y timina.
En un Oligonucleótido de ADN, También
constituye la información genética heredable de
los seres vivos.
Existen varios métodos de secuenciación de
ADN. Las cuales cumplen diversas funciones,
desde conocer cómo ocurren los procesos
biológicos fundamentales, Investigar las
mutaciones somáticas, hasta Identificar y
cartografiar hasta aproximadamente 20 a 25 mil
genes que compone el genoma humano.

3. Sistema integrado para generación automática de clusters de ADN por amplificación en puente, secuenciación y análisis primario y secundario de
secuencias. Posee un servidor para almacenamiento de datos, sistema con pantalla táctil y computadora integrada (para análisis de datos en el
equipo).
Capacidad de generación de datos hasta 15 Gb. Análisis de secuencias (on-instrument) en menos de 2 hs, excepto para la aplicación de
Metagenómica del 16S. Lectura paired end con calidad esperada de Q30 para más del 70% de las bases llamadas en la secuenciación de
fragmentos de 600pb, 75% para fragmentos de 250pb, 85% para fragmentos de 75 bp, 80 % para fragmentos de 150 bp, 90% para fragmentos
menores (25, 36 y 100 pb).
APLICACIONES:
 Secuenciación de genomas pequeños
 Secuenciación de novo. Re-secuenciación
 Plásmidos. Re-secuenciación dirigida: Secuenciación de amplicones
(centenas de blancos).
 Captura de regiones de interés Metagenómica del 16S Chequeo de
clones.
 Secuenciación de ARN: RNA-Seq Secuanciación de smRNA.
 Secuenciación de paneles prediseñados
 Control de calidad de bibliotecas genómicas: Control de calidad para
secuenciación en HiSeq Regulación: ChIP-Seq.
 Otras: Genotipificación por secuenciación (reducción de complejidad
de genomas de mayor tamaño)

4.  Cartones
 Plumones
 Temperas
 Laptop
 Cartulina
 Caja de metal
 Velitas de vidrio
 Tijeras
 Silicona
 Lapicero negro
 Cinta negra
 Cinta
 Cinta de agua
 Tecnopor
 Sorbetes

6.  Se realizó el molde del secuenciador
automático (sistema Miseq-15 Gb) de 40 cm de
altura y 60 de ancho.
 Seguidamente se pegó los lados con silicona dándole forma al equipo

7.  Se le pega encima del molde con cartulina negra, se le
añade los detalles del equipo (pantalla ,etc)
 Sus partes del equipo se isieron de una caja de reloj la
cual se le pinto de color negro y después de secar se le
paso con blanco, pero de forma de líneas.

8.  Utilicé lata de reloj de color negra puse
dentro de ella tecnopor, alrededor deje
una franja de 5*2 cm para colocar los
sorbetes y el velero.
 Seguidamente desarrolle el método de sanger mediante dibujos
(paso a paso), así mismos se pintó con temperas cada dibujo.

9.  Se pega todos los dibujos en una
cartulina para poder explicarlo y se
enumera cada paso con hojas celestes.
 Diseñe un cuadrado de 15 * 15 que será nuestra Pc que recibirá los
resultados del secuenciador.
 Se le pinto sus lados de color
negro y seguidamente se dibujó
secuencias de ADN.

10. SECUENCIACION DE ADN AUTOMATICO
(METODO DE SANGER)

12. Proceso biológico de la replicación del ADN junto
con el empleo de diodeoxi de nucleótidos.
Esta técnica emplea didesoxinucleótidos (ddATP,
ddGTP, ddCTP, ddTTP) que carecen del grupo
hidroxilode carbono 3, que al unirse una cadena
de DNA en crecimiento impiden que esta se
continúe elogando.
En la reacción normal se usan los
desoxinucleótidos dATP-dGTP- dCTP- dTTP.
En 1975, Frederick Sanger desarrolló el
método de secuención del ADN.
Esto ocurre por que la cadena polimerasa
necesita un grupo terminal 3 OH . Sin
embargo a la deslilición que se incorpora
carece de ese grupo.

13. Copiamos una PCR, se tiene una plantilla
de ADN, en el que se le agrega un primer
y ese primer ayudara que la nueva
cadena se alongué.
Estos dideoxi nucleótidos
(ddNTP) tienen 2
características muy
importantes:
 Terminan la cadena
 Tienen floroforos
Como cualquier reacción de PCR( necesita nucleótidos).
1-2
3

14. Cuando la cadena siga alongándose,
se pega un nucleótido especifico.
Se pega un nucleótido especifico y
nos da un color diferente,
terminando en la cadena para que
no pueda alongarse.
Este proceso ocurrirá para para
todos los demás.
4

15. Todos los fragmentos que resultaron de la PCR van a pasar atreves de un capilar.
Detecta los
florofolos
Que al final nos va a dar una cromatografía,
dándonos picos de diferentes colores.(que
corresponden a cada uno de los nucleótidos que
se fueron pegando en las cadenas que fueron
amplificadas.
5
6

16. Se populariza el método de secuenciación en la: automatización mediante varias
modificaciones una de ellas la
Se tiene un capilar (muestra) diluida en un búfer que va ah migrar a otro
diferente (+), esto se va ah dar de acuerdo al tamaño de molécula de ADN.
Solo es un H en el carbono
Es por ello que no se
puede adicionar otra ribosa
o ningún nucleótido.
En el carbono 3 tiene el grupo
hidroxilo y es donde se va ir
pegando otro nucleotido y asi se
va elongando la cadena.
Fosfatos FosfatosRibosa Ribosa

17. 17
Como conclusión es importante mencionar que el análisis de la
estructura del ADN y de su papel en la expresión genética se ha visto
facilitado por el desarrollo de poderosas técnicas para la secuenciación de
moléculas de ADN.
La clave para la secuenciación del ADN es la generación de fragmentos
de ADN cuya longitud depende de la última base de la secuencia.

18. Se puede generar conjuntos de fragmentos de
este tipo mediante la interrupción controlada
de replicación lo cual se lo conoce como método de
sanger, debido qué es un método desarrollado por el
bioquímico Frederick sanger y sus colaboradores este
método se basa en el empleo de dióxido nucleótidos
que carecen del grupo hidroxilo del carbono 3 de
manera que cuando uno es nucleótidos se incorpora a
una cadena de ADN en crecimiento, la cadena ya no
puede estar alongando.
Este es un método que ha sido utilizado como método alternativo a otros métodos debido a su
utilil procedimiento el cual se lleva a cabo a través de 4 mezclas simultáneas. En cada mezcla se
utiliza un ADN polimerasa para sintetizar la hebra complementaria a una secuencia concreta
perteneciente a una molécula de ADN de hebra sencilla.

19. APLICACIONES
una muestra de excremento se puede utilizar para identificar la dieta del animal que la
defecó (análisis de dieta) o para identificar al propio animal que la defecó. En este último
caso, identificar a las especies puede servir para contribuir a la conservación de unas o,
por el contrario, para evitar en la medida de lo posible el establecimiento de otras no
deseadas.
Ecosistemas antiguos
Conocer cómo fueron los ecosistemas en tiempos pasados y compararlos los
actuales resulta de utilidad para la gestión y conservación de la biodiversidad.
Estas aplicaciones cobran especial interés en el marco de un mundo afectado por
el cambio global y la amenaza de introducción de especies invasoras (Ruppert et
al., 2019).
Las especies invasoras son aquellas que se encuentran fuera de su área de
distribución natural y que pueden causar alteraciones en los ecosistemas. Se
consideran, además, “exóticas” si han sido introducidas por el ser humano y
suponen una de las mayores amenazas para los ecosistemas y biodiversidad
(Ruppert et al., 2019).
Detección de especies invasoras