Este documento describe una práctica de laboratorio realizada para identificar bacterias mediante pruebas bioquímicas. Se prepararon medios de cultivo como agar VBB, McConkey y nutritivo que se inocularon con muestras de agua y tierra. Luego se analizaron las colonias obtenidas para determinar su morfología y tinción de Gram. Algunas bacterias Gram negativas se usaron para inocular tubos con sustancias de pruebas como MIO, LIA y VP. Los resultados mostraron que una serie contenía Citrobacter, gé

1. CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLÓ GICO INDUSTRIAL Y DE
SERVICIOS. N.128
Practica 3.Pruebas Bioquímicas
Sub-módulo 3. Ejecuta técnicas de identificación de Microorganismos con base a
las normas.
Integrantes. Barrón Arredondo Evelin, Batres Arias Viviana, Bernal Loera Alejandro, Cabral Román
Brandon Said, Cardona Barboza Adriana Fernanda, Cervantes de la Cruz Ángel, Chávez Castorena
Edna Paola, Chávez Ortega Miriam Vanessa, Chavira Teresa.
Facilitadora: Ing. Acosta Bezada Jessica Alicia.
Introducción.
Las pruebas bioquímicas son una serie de
análisis clínicos que sirven a la Medicina como
apoyo a la hora de diagnosticar infecciones
por bacterias.
El IMVIC se compone de cuatro pruebas:
Indol, Rojo de metilo, Voges-Proskauer y
Citrato. Su finalidad es identificar un
organismo del grupo de los coliformes. La
presencia de estos indica contaminación fecal.
La prueba del indol estudia la capacidad de
degradar el triptófano con producción de Indol
y metabolitos indólicos. Estudia la
fermentación ácido mixto con producción de
ácidos estables en el tiempo.
La prueba Voges-Proskauer Estudia la
fermentación butanodiólica con formación de
un metabolito intermediario neutro.
Técnica: Sembrar la muestra en el medio e
incubar de 24 a 48h a 37 °C. Según el
volumen del medio añadir a partes iguales el
volumen de los reactivos, agitar para exponer
el medio al O2. VP POSITIVO: Color rojo-rojizo
en menos de 1h. VP NEGATIVO:
Amarillo en superficie.
Estudia la capacidad de utilizar el citrato como
única fuente de carbono.
El Índice Analítico de Perfil (Analytical Profile
Index o API) son un conjunto de pruebas
bioquímicas que se concentran en muy poco
espacio mediante el uso de pocillos con el
reactivo correspondiente ya preparado para
ser usado.
Se llenan los pocillos siguiendo las
instrucciones del fabricante con la muestra
problema. Se sellan los pocillos que sean
obligatorios. Se incuba la estufa a unos 37 °C
normalmente. Posteriormente se comprueba
los resultados pasado el tiempo indicado en la
tira.
Los resultados se apuntan por cada prueba
bioquímica en el casillero correspondiente, de
manera que al final dará un número de varias
cifras. Con este número se puede buscar en el
libro de referencia de las tiras API, el tipo de
bacteria que se tiene en la muestra.
Son muy útiles, capaces de identificar en poco
tiempo la bacteria problema (actualmente unas
600 especies).
Hay varios modelos dependiendo del uso. Por
ejemplo, si la muestra es un coprocultivo se
debería usar una tira de enterobacterias.
Resumen.
Lo que se realizo en la práctica fue; preparar
los Medios de cultivo con una serie de
indicaciones muy precisas ya que de esto
dependían todas las técnicas y procesos que
conlleva el medio de cultivo. Después de
realizar el Medio, se vacío en 19 cajas Petri,
que posteriormente se metieron a incubar.
Luego se inoculo con agua de drenaje y tierra
con ayuda de un asa de platino. Se regresaron
a la incubadora para después hacer la
morfología de las colonias (contar). Por último
se realizo la tinción de Gram en las bacterias
esto sirvió para clasificarlas debido al color
que mostraron en la tinción. Es de suma
importancia destacar que los medios de cultivo
permiten el crecimiento de los
microorganismos y por lo que un control en su
fabricación, preparación, conservación y uso,
asegura la exactitud, confiabilidad y de los
resultados obtenidos. Así con los tubos de
ensayo se agarro cuatro de diferentes agarres
y se hizo el mismo procedimiento pero a
diferencia de estos se Estrío con agarres
nutritivo VBB entre otros y vimos que bacterias
se hicieron en el crecimiento de tubo de
ensayo y los identificamos cada una de las
series fueron cuatro series y de esos cuatros
sería cada uno tenía cuatro tubos de ensayo
con diferente Agar así concluimos con nuestra
practica y tuvimos un buen resultado porque
seguimos los medios de seguridad.
Abstract.
This was done in practice was; prepare the
culture media with a series of very precise

2. indications already that this depended on all
the techniques and processes involved in the
culture medium. After performing the middle,
one empty in 19 Petri dishes, which are then
put to incubate. Then inoculum with drainage
water and earth, with the aid of a platinum
loop. It is returned to the incubator for after
making the morphology of the colonies (count).
Finally the Gram stain in the bacteria this
served to classify them due to the color that
showed in the staining. It is extremely
important to stress that the culture media allow
the growth of microorganisms and by what a
control in the manufacture, preparation,
preservation and use, ensures the accuracy,
reliability, and of the results obtained. As well
with the test tubes is grabbed four of different
grips and are made by the same procedure but
unlike these are grooved grips with nutritious
VBB among others and we saw that bacteria
were made in the growth of test tube, and the
identify each of the series were four series and
of these four would be each had four test tubes
with different agar as well we conclude with our
practice and we had a good result for which we
continue the means of security.
Materiales y Metodos
 24 Tubos de ensayo
 Asas de platino
 Gradilla
 Matraz Erlenmeyer 500ml
 20 Cajas Petri
 Mechero de Bunsen
 Mangueras de látex
 Agar VBB
 Agar Mc Conkey
 Agar nutritivo
 Cubre objetos
 Porta objetos
 Microscopio
 Rojo de metilo
 MIO
 LIA
 KLIGGER
 UREA
 VP
 SIM
 H2O del baño
 Tierra húmeda que esté contaminada
 Papel astrosa
 Vidrio de reloj
.
Procedimiento.
1. Principalmente por mesa se repartió
el preparar las pruebas bioquímicas
que se verterían en tubos de ensayo
las sustancias MIO, LIA, KLIGGER,
UREA, VP y SIM para luego llevarlos a
esterilizar y tiempo después se
utilizarían ya por ultimo.
2. En un matraz Erlenmeyer se
producían los agares VBB, Mc Conkey
y Nutritivo para poder vaciarlos en
cajas Petri para las muestras.
3. Una vez que se tenia el vaciado en
cajas Petri, se inoculan las muestras
que eran H2O del sanitario y tierra
húmeda contaminada, con una asa de
platino se tomaba un poco de muestra
de agua de sanitario y se estriaba de
manera continua e igualmente con la
tierra mezclada con un poco de agua
para poder estriar fácilmente, luego de
unos días aparecen las tipo de
colonias en los agares.
4. Se obtienen las colonias que se
producen en los agares, se hace una
morfología de colonias donde tomas
en cuenta cuantas colonias crecieron
en cada agar y que tipo son al igual
que le número de ellas, borde, forma,
color, superficie, etc.
5. Cuando se haya realizado la
morfología con una asa de platino se
toma una muestra de una de las
colonias de cada agar para luego en
un porta objetos colocar una gota de
agua destilada y sobre ello se pone la
muestra y se mezcla, se deja secar
por un momento luego de esto se fija
sobre un mechero de Bunsen, se le
agrega 1 gota de cristal violeta y se
deja por 1 min luego se enjuaga, luego
de enjuagarse se vierte 1 gota de
Iodo-Lugol por 1min y se enjuaga, 1
gota de alcohol-cetona por 30
segundos y se enjuaga, 1 gota de
safranina por 30 segundos y se
enjuaga ya por ultimo se le agrega 1
gota de aceite de inmersión y se le
pone un cubre objetos y se pone al
microscopio para así observar que tipo
de Gram son negativas o positivas, en
este caso solo se usarían las que
serian negativas.
6. Como en un principio se mencionaron
tubos de ensaye con diferentes
sustancias, se inocularían con las
Gram negativas que se obtuvieron
anteriormente, con una asa de platino
recta se tomaba la muestra y en cada
tubo se introducía. Luego de un día se
observaron cambios en los tubos
como cambios de coloración tales los
casos donde al principio era morado y

3. se convirtió en morado con amarillo,
rojo con amarillo entre otros
7. Ya habiendo resultados de cada tipo
de muestra se tiene que completar la
lectura de cada uno de ellos atreves
de esta:
A/A (acido/acido) (-) negativo
K/A (base/acido) (+) positivo
K/K (base/base) +++ muy positivo
V variable
Resultados.
Con base a todos los procesos ya
mencionados anteriormente los resultados
fueron los siguientes (anexos 1 .1, 1.2 y 2):
Se observo crecimiento solo en 2 de las 4
series bioquímicas, puesto que las otras 2 no
estaban completas (por completa se entiende
prueba SIM, MIO, LIA, VP y Kligger), dejando
de lado las series incompletas, se llego al
objetivo esperado ya que las 2 series
completas mostraron un resultado
satisfactorio.
A grandes rasgos:
 Serie1:Citrobacter.
Citrobacter: El género Citrobacter es
un grupo de bacilos gramnegativos
aerobios que se encuentran
frecuentemente en el agua, suelo,
comida y el tracto intestinal de
animales y humanos. Se sabe que
estos microorganismos pueden
producir infecciones importantes,
especialmente en huéspedes
inmunodepresivos. Son organismos
ubicuos y son causa frecuente de
infecciones en el hombre. Destruyen
las microvellosidades, formando
lesiones muy características
denominadas de adherencia y
eliminación.
Citrobacter freundii: la resistencia
natural a beta-lactámicos está dada
por la presencia de cefalosporinasas
inducibles de clase C. De esta
manera, estas bacterias (como la
enviada en el control de calidad)
normalmente presentan resistencia a
ampicilina y cefalosporinas de primera
generación (corte del halo de
cefalosporinas de tercera generación
en la proximidad de un disco de
cefoxitina).
Citrobacter koseri: es una bacteria
oportunista, no reconocida como
patógeno de las vías respiratorias y no
reportada previamente como causa de
enfermedad en otorrinolaringología; es
causa de meningitis en pacientes
neonatales e inmunodeprimidos como
una infección aguda severa; se ha
descrito que en otros sitios anatómicos
destruye las microvellosidades.
 Serie 2: Escherichia Coli.
Escherichia Coli: La E. coli es una
bacteria que integra parte de la flora
intestinal del hombre y de los
animales. La mayoría de las E. coli
son inofensivas. Sin embargo, algunas
pueden producir enfermedades. Estas
bacterias tienen su reservorio en
animales sanos, para quienes las
variantes más patogénicas para el
humano, no representan peligro. Estos
animales, a través de sus heces
pueden contaminar diversos
alimentos, ya sea por transmisión de
los mismos durante la faena, como
producto de una mala manipulación
(de las heces a la carne), o por
utilización de aguas contaminadas con
heces de estos animales para el riego
de huertas, continuando así a lo largo
de toda la cadena de producción que
toma a estos alimentos como materia
prima.
Conclusiones.
Barron Arredondo Evelin.
Personalmente puedo concluir en que esta es
de las prácticas de un proceso amplio que
sirve de mucho, puesto que se pone en
práctica todos los métodos y las técnicas que
este mismo conlleva.
Por medio de las pruebas bioquímicas se
puede hacer una infinita identificación de
distintos microorganismos presentes. Estas
constan en inocular microorganismos en
medios de cultivo, que como ya bien sabemos
estos son sustancias alimenticias preparadas
artificialmente, y con una preparación
adecuada y los medios necesarios poder
observar su grandioso crecimiento.

4. Creo que las pruebas bioquímicas son de
suma importancia en el laboratorio ya que
prácticamente y a grandes rasgos nos ayudan
a identificar fácilmente, aunque con un
proceso tardado y duro, que tipo de bacteria o
microorganismo se encuentra presente en
nuestro medio.
También cabe destacar que al realizar este
tipo de pruebas se tiene que tener mucho
cuidado, ya que de eso depende toda la
identificación, puesto que si alguna serie está
incompleta o por alguna razón no está junto
con su serie correspondiente no se podrá
saber con certeza si el microorganismo
resultado será el correcto por lo tanto pasaría
a un resultado incierto o con poco porcentaje
de credibilidad.
Batres Arias Viviana
mi conclusión general de la práctica es que
debemos saber los tipos de estriado que
existen en los tubos de ensaye, como también
en las cagas Petri como lo vimos en prácticas
pasadas ya que general mente usaremos cada
uno de ellos, también es importante aprender
cuales son y el uso década una de tipo de
asas ya que no para todos los estriados
usaremos las mismas. También es importante
conocer y saber cómo hacer las series de
agares en los tubos de ensaye ya que si no
sabemos estaremos contando puras mentiras
(aprender el tipo, forma, acides, etc.) para así
identificar su serie.
También debemos estriar bien ya que si no lo
asemos nuestros agares no saldrán bien y no
tendrán cambio ninguno y debemos
identificarlas al momento de estriar ya que si
no nos confundiremos y no sabremos que
asemos y será una práctica mal hecha y
tendremos que hacer todo de nuevo.
Bernal Loera Alejandro.
A partir de las pruebas bioquímicas se pudo
determinar que la muestra incógnita podría
pertenecer al género Citrobacter. Para
determinar con mayor certeza que este es el
género bacteriano; asimismo como para
identificar la especie de la muestra incógnita
se deberían realizar más pruebas bioquímicas.
Por medio del uso del antibiograma, se logró
determinar la sensibilidad de la muestra
incógnita frente a algunos antibióticos. Para la
sulfonamida no pudo determinarse la
sensibilidad, ya que no se contaba con la
información necesaria.
Las pruebas bioquímicas convencionales,
generalmente determina la actividad de una
via a partir de un sustrato que se incorpora en
un medio de cultivo y que la bacteria al crecer
transforma o no.
A partir de las pruebas bioquímicas de
identificación bacteriana, mediante estándares
establecidos, podemos conocer de bacteria
tenemos en una muestra problema
basándonos en sus reacciones metabólicas
las cuales son característica de cada
microorganismo.
 Sus funciones especificas del
metabolismo
 Obtención de energía para los
procesos celulares.
 Conversión de los compuestos
nutritivos en precursores de los
componentes celulares.
Cabral Roman Brandon Said.
Podemos concluir que se pueden analizar las
bacterias y contarlas, usando los métodos de
estriado y vaciado hacia un porta objetos o
tubo de ensaye y trabajar estriando. Y conocer
qué tipo de bacteria han crecido en nuestro
cultivo.
Cardona Barboza Adriana Fernanda.
En conclusion, las pruebas bioquimicas, son
procesos sencillos, un poco tardados pero muy
utiles, ya que gracias a estos se puede
identificar los tipos de bacterias que tenemos
en nuestros medios. de igual manera son
procesos que deben realizarse con mucho
cuidado.
se sabe que hay diferentes tipos de pruebas
bioquimicas, y todas con el fin de identificar las
diferentes bacterias que podemos tener de
una muestra.
Cervantes de la Cruz Jose Angel
La identificación por distintos métodos de las
bacterias ha resultado en un sinfín de
ocasiones un tema de controversia pero en
verdad muy interesante, ya que en formas
para distinguir las Gram positivas y negativas,
con la práctica de la Tinción de Gram, esto
resulta de una forma más práctica, pero con la
incertidumbre de conocer exactamente de qué
tipo de bacteria se está tratando.
El uso de las pruebas bioquímicas
corresponde a lo que en lo personal, ocurre
como un gran avance al llevar a cabo medidas
más precisas de identificación por medio de
varias series de tubos que se identifican
mediante su propia simbología sobre el
crecimiento bacteriano en tubo, y la lectura de
bioquímicas.

5. Cuando realizamos ambas lecturas tomamos
en cuenta las diferencias, entre lecturas en
tubo y en Placa Petri, así como las diferencias
que en estas, su Morfología presenta.
Chavez Castorena Edna Paola.
Mi conclusión es que aprendimos a cómo
hacer agares y que es trabajar con seres vivos
y tener cuidado con ellos, aprendimos a como
trabajar con medidas de seguridad y técnicas
de estriado trabajamos con eses fecales de
perro para poder hacer nuestro estriado
supimos esterilizar y saber identificar nuestras
bacterias si son gram positivas o gram
negativas
Chavez Ortega Miriam Vanessa
Comprobamos la distinción de pruebas
bioquímicas y la determinación de cada una de
ellas atreves de los resultados observamos
cuales son las bacterias que crecerían y sus
cambios.
Atreves de esto podemos conocer cada una
de las bacterias que tenemos en una muestra
basándonos en las reacciones metabólicas las
cuales las caracterizan y el cambio de
tonalidad de cada muestra. Es muy importante
tener conocimiento de cuál es el resultado de
una prueba bioquímica a base de resultados
establecidos.
Chavira Teresa Edith NO PRESENTO
Discusión.
La identificación bioquímica de las especies de
Aeromonas es extremadamente compleja,
habiéndose propuesto numerosos protocolos
bioquímicos para la identificación de las cepas
a nivel de especie o GH. No obstante estos
protocolos involucran un elevado número de
pruebas bioquímicas y no garantizan una
identificación fiable de las especies.
Bibliografias APA.
ING. Pablo Martinez. (2009). Medios de
Cultivo y Pruebas Bioquímicas. 18 de
Septiembre, de Alfa Sitio web:
http://es.slideshare.net/roberchavez/medios-de-
cultivo-y-pruebas-bioquimica-presentation
Anexos.
Anexo 1.1(DIA UNO)
COLONIA FORMA COLOR SUPERFICIE BORDE No
McConkey 1 umbilicado
Contorno
amarillo y
naranja
Plana Entero 36
McConkey 2 Regular
Contorno
amarillo y
naranja
Plana Ondulado 16
McConkey 3 Umbilicado amarillo Plana Entero 46
McConkey 4 ----------------- --------------- ---------------- ------------ 10
Nutritivo 1.1 Irregular Amarillo Convexa Entero 118
Nutritivo 1.2 Irregular Amarillo pando Convexa Ondulado Masivo
Nutritivo 1.3 Sol Amarillo pando Convexa Entero 6
Nutritivo 2 Regular Amarillo Convexo Entero 109
VBB 1 ---------------- -------------- -------------- ------------ -----------------
VBB 2 --------------- ---------------- --------------- -------------- ------------
VBB 3 Regular Verde brillante Plana Entero
Crecimiento
masivo
VBB 4 -------------- ----------------- ----------------- -------------- ---------------
VBB 5 ------------- ------------------ ------------------ ------------- -----------------
Nutritivo 3.1 Irregular Amarillo pálido Plana Entero 96
Nutritivo 3.2 Irregular Amarillo Convexa Entero masivo

6. Anexo 1.2(DIA DOS)
Agar Forma Colonia Superficie Borde No
VBB Redonda Blanco Filamentoso Entero 1
VBB 2.1 --------- verde ------- Regular Masivo
VBB 2.2 Irregular Rosa Cóncavo Irregular 3
VBB 3.1 Redondo Morados Planas Entero 24
VBB 3.2 Redondos Rosas Convexa Entero 7
Anexo 2
SERIES DE AGARES EN TUBOS DE ESALLO
1 SERIE CITROBACTERIA
2 SERIE E. COLI
3 SERIE ---------------------------------------------
4 SERIE -------------------------------------------