Este documento describe los pasos para cultivar microorganismos y realizar un antibiograma. Explica cómo esterilizar los medios de cultivo y materiales, tomar muestras, sembrar en placas de Petri, incubar a 37°C durante 48 horas, y observar el crecimiento de colonias de diferentes formas y colores. También detalla cómo realizar un antibiograma usando discos impregnados con sustancias antibacterianas para evaluar la sensibilidad de las cepas aisladas.
3. Introducción
El objetivo de la práctica es el cultivo de
microorganismos en medios de cultivo
preparados.
Si hubiera tiempo, los prepararíamos
nosotros mismos.
Hay que asegurarse de tenerun medio
estéril y una superficie de trabajo limpia.
La superficie de trabajo se limpiará con
agua y jabón.
Después de secarla se pasará un paño con
una solución de etanol al 70%.
4. Introducción
Los medios de cultivo y material de vidrio
se esterilizan en autoclave o en olla a
presión, a 120 ºC durante 20-30 minutos.
Los medios con nutriente sólido,
gelificante, se disuelven a la temperatura
de esterilización, pero solidifican al
enfriar(42 ºC)
Habrá que procurarpasarlos utensilios
(asas de siembra, objetos de vidrio, bocas
de frascos) porla llama siempre que se
5. Medios de cultivo
Se preparan disolviendo en agua (a poderser
destilada) una cantidad de extracto nutritivo
en polvo (el fabricante indica en el envase la
cantidad porlitro de agua)
Se utilizan extractos de proteína digerida
enriquecida con vitaminas u otros nutrientes.
Cada tipo de bacteria requiere una dieta por
lo que utilizaremos medios ricos en
nutrientes energéticos, estructurales,
vitaminas, oligoelementos, etc que sirvan
para un gran número de bacterias.
7. Placas Petri preparadas con agary
nutrientes.
Matraces con líquido nutritivo, (nosotros,
no).
Asas de siembra y/o bastoncitos.
Papel de filtro.
Mecheros.
Estufa.
Sustancias antibacterianas.
Distintos medios para
Materiales generales
Mechero de alcohol
Mechero de bombona
Mechero Bunsen
9. Toma de muestras
Se tomarán muestras de diferentes
lugares:
Sarro dental con bastoncillo.
Huella dactilarsobre el medio de
cultivo sólido.
De un pomo de puerta con bastoncillo.
De cualquiersuperficie o sustancia
(yogur, mucosa bucal, bolígrafo sobre
cultivo, etc.)
Cada grupo de alumnos elegirá el lugarde
10. Siembra
Para realizarla siembra, se ha de poneren
contacto el algodón del bastoncillo (o la
punta del bolígrafo o la huella dactilar, etc.)
con el medio de cultivo (superficie
gelatinosa de la placa Petri en nuestro caso;
si el medio fuera líquido, se sumergiría el
bastoncito en él)
La siembra se hace moviendo el bastoncito
(o lo que sea) sobre el medio de cultivo
sólido en espiral o en zigzag.
En cualquiercaso, se debe trabajarcerca de
una llama de mechero para evitaren lo
12. Incubación
Una vez hechas las siembras, se introducen las
placas, cerradas y boca abajo, en una estufa, a
37 ºC durante 48 horas.
Si el cultivo es líquido hay que teneren cuenta
que los matraces deberán estaraireados para
bacterias aerobias y sin aireación, para bacterias
anaerobias.
Si las bacterias son aerobias y no se posee
mecanismo de aireación, el crecimiento será
más lento y la biomasa obtenida, menor.
Si las muestras son del ambiente (pomo puerta,
huella dactilar, etc.) en placa Petri, aparecerán
distintas cepas de color, forma y textura
13. Crecimiento
Después de la incubación el resultado
será:
En medio sólido en placa Petri, se
verán unas protuberancias o granitos
de diferentes formas, texturas y
colores, dependiendo de donde sea la
muestra.
En medio líquido en matraz aparecerá
turbidez.
Si se ha obtenido un policultivo, se
pueden extraerde él monocultivos
17. Mecanismo
Se coge un poco de la cepa que queremos
estudiarcon un bastoncito o asa de
siembra.
Se diluye en un poco de agua.
Se toma una gota y se distribuye portoda
la superficie de una placa Petri con medio
de cultivo.
Sobre la superficie sembrada se ponen
unos discos de papel de filtro, de unos 0,5
cmde diámetro, impregnados de distintas
18. Mecanismo
Se incuba a 37 ºC y al cabo de 18-21 horas
(si son 24, no pasa nada) se observan las
muestras.
Si la cepa es sensible a la sustancia
antibacteriana, aparecerá un halo sin
crecimiento alrededordel papel de filtro
con esa sustancia.
Cuanto mayores el halo, mayor
sensibilidad.
Si no aparece halo, no hay sensibilidad a
20. Tinción Gram
Con los cultivos obtenidos
vamos a realizaruna práctica
de tinción Gram.
La tenéis en otra presentación
porseruna práctica que se
hace en otra sesión.
