Este documento describe un método para determinar el número y tipo de microorganismos presentes en una muestra de agua de proceso mediante la filtración de la muestra a través de una membrana con poros de 0,45 μm, la retención de los microorganismos en la membrana, y el cultivo de los mismos en diferentes agares según el tipo de microorganismo, incluyendo agar ENDO para coliformes, agar PCA para bacterias aerobias mesófilas, agar Sabouraud para mohos y levaduras, y agar cetrimide para Pseudomonas aeruginosa.
2. FUNDAMENTO.- Este método se fundamenta en determinar el numero y tipo de microorganismos
presentes en una muestra de agua de proceso, por medio de la filtración de la misma a través de
una membrana filtrante con poros de tamaño adecuado (0,45 μm de diámetro), la consiguiente
retención de los microorganismos sobre dicha membrana y el cultivo de los mismos en diferentes
agares de acuerdo al tipo de microorganismo.
MATERIALES .- Muestra de agua de proceso Agua peptonada al 0,1 % Placas
estériles con medio ENDO Placas estériles con agar Sabouraud Placas estériles con
agar Cetrimide Placas estériles con agar MacConkey Placas estériles con agar para
Recuento en Placa (Agar Standard Methods) Equipo de filtración (Millipore)
Membranas filtrantes estériles Bomba de vacío Pinzas estériles Estufa .
3.
4. PROCEDIMIENTO
Una vez armado el equipo, se procede a filtrar 100ml de la muestra líquida. Remover la parte superior del porta filtro,
y con una pinza estéril transferir la membrana a la placa de Petri que contiene el medio de cultivo correspondiente al
microorganismo que se va a identificar: Coliformes en agar endo, bacterias aerobias mesófilas en agar para recuento
en placas, mohos y levaduras en agar Sabouraud y Pseudomonas aeruginosa en agar cetrimide.
Al colocar la membrana, evitar la formación de burbujas entre ésta y el medio de cultivo. Esperar
aproximadamente 20 minutos para permitir la adhesión de la membrana al medio
Con excepción de las placas de agar Sabouraud, incubar las placas en forma invertida, a las diferentes temperaturas y
tiempos, de acuerdo al microorganismo investigado
5. PROCEDIMIENTO
Coliformes: Agar ENDO Incubación 35ºC ± 2ºC x 24-48 h
2. Mohos y Levaduras: Agar Sabouraud Incubación 25ºC ± 2ºC x 5-7 días
3. Bacterias aerobias mesófilas: Agar PCA Incubación 35ºC ± 2ºC x 24-48 h
4. Pseudomonas aeruginosa Agar cetrimide Incubación 35ºC ± 2ºC x 24-48 h
