RT-PCR es una variante de la PCR que utiliza una sustancia marcada con fluoruro para medir la fluorescencia después de cada ciclo de amplificación sin necesidad de usar agarosa. Consiste en calentar y enfriar las muestras en un termociclador en ciclos de 25-40 grados para separar, alinear y polimerizar el ADN en tres etapas usando moldes, cebadores, dNTPs, tampón de reacción y polimerasa. Puede ser cuantitativa usando fluorocromos o sondas moleculares para medir

1. PCR EN TIEMPO REAL GERMAN A. MOLINA MARTINEZ SEBASTIAN A. VALENCIA SANABRIA

3. Introduccion: RT-PCR variante de la PCR Uso de sustancia marcada con fluoruro Termociclador equipado para captar fluorescencia No utiliza agarosa Mediciondespues de cada ciclo de amplificacion

4. fundamento RT-PCR Realizada en un termociclador Calentar y enfriar muestras(ciclos 25-40) 3 etapas

5. materiales RT-PCR Molde de DNA Cebadores dNTPs Tampon de reaccion Polimerasa Fluoruro Termociclador

6. Etapas RT-PCR 1 separacion 95°C 2 alineamiento 50-60°C 3 polimerizacion68-72°C Reduccion de ruido “variedad de parametros”

11. SYBR green

12. (λmax = 488 nm) (λmax = 522 nm)

13. Bajoencostos

14. Usa oligonucleotido marcado fluorescentemente

15. Detecta la aparicion del producto deseado .

16. Sondas :taqman

17. : molecular beacons

22. RT-PCR Y CANCER AVANCES TECNOLOGICOS MOLECULARES PERMTEN NUEVA TAXONOMIA

23. RT-PCR Y CANCER DIVISION CELULAR REPARACION CELULAR APOPTOSIS ANGIOGENESIS

24. RT-PCR Y CANCER INFECCION VIRAL METILACION DNA ALTERACION DE LA SECUENCIA.

25. RT-PCR Y CANCER GENETICA DEL TUMOR BIOLOGIA DEL TUMOR CAUSAS DEL TUMOR PRONOSTICO RESISTENCIA TOXICIDAD DE TERAPIA

26. RT-PCR Y CANCER PROGRAMACION GENETICA DE CADA TUMOR ES UNICA CA MAMA las celulas tumorales se diferencian de linfocitos y cel del estroma

27. RT-PCR Y CANCER MUTACION P53 Características histológicas agresivas Potencial invasión Resistencia a la terapia

28. SUBTIPOS MOLECULARES CA MAMA LINFOMAS CA PULMON 4 CLASES DE CA DUCTAL INVASIVO 5 CLASES DE TUMORES DE CEL PEQUEÑAS 2 TIPOS DE CEL B