Este estudio analizó 48,345 casos de infección por salmonela no tífica en Israel y encontró que el 2.2% resultaron en infecciones persistentes que duraron más de 30 días. Algunos pacientes portaron la misma cepa por hasta 8.3 años. El análisis genético reveló la ganancia y pérdida de elementos genéticos móviles y mutaciones de nucleótidos únicos en genes de virulencia entre las muestras iniciales y finales de 11 pacientes, lo que podría afectar la patogenicidad. Este estudio pro
La teoría de formación de Patricia Benner es una explicación acerca de cómo e...
Seminario biologia molecular
1.
2. Introduction
0 The Typhoidal Salmonella infection has been studied
intensively, but nontyphoidal salmonella are much less
studied. And to study this disease is important
because it could be a reservoir of human infections.
3. 0 Salmonella enteric is a
- Gram negative pathogen
- Lives in the intestines of
both cold and warm
blooded animals.
- Can be found throughout
the natural environment,
including soil and water.
6. Typhoidal or
enteric fever
Life-threatening
systemic disease
Hepatosplenomegaly,
intestinal hemorrhage,
septicaemia, peritonitis,
encephalitis,
cholecystitis.
Non- typhoidal
serovars (NTS)
self-limited
gastroenteritis,
associated with
intestinal inflammation
and diarrhea that lasts
for 5–7 days, in
immunocompetent
individuals,
fever,
hepatosplenomegaly,
and respiratory
symptoms
Enterica (I)
7. While you are sick and in convalescence
1%–4% of individuals infected with S. Typhi become
asymptomatic chronic carriers that continue to excrete
the pathogen for more than 12 months.
8.
9. General aim
Study the persistent
NTS infections and the
prevalece of the NTS
carriers because these
aspects are poorly
studied and
understood.
10. Población de estudio
Todos los laboratorios enviaban los cultivos de
los pacientes a la NSRC para ser estudiado.
Estudiaron pacientes que presentaban NTS en
Israel desde 1995-2012.
11. En el estudio se calculo la mínima duración de la infección entre el primer cultivo y
el ultimo cultivo enviado si la muestra del paciente era del mismo serotipo.
En el estudio se analizaron 48.345 casos de NTS que fueron reportados al centro
de referencia nacional de Salmonella NSRC.
Es un sistema que clasifica el género Salmonella en serotipos , basado en los
antígenos de superficie.
La NSRC hacia una identificación serológica teniendo en cuenta el esquema
Kauffmann–White-Le-Minor
13. Ética
0 El estudio fue aprobado
por el centro medico Sheva
y su oficina de revisión
institucional.
0 Hubo consentimientos de
los pacientes.
0 También el experimento de
los ratones se realizó
siguiendo las guías éticas y
fue aprobado por la oficina
de revisiones
institucionales.
15. 103 pacientes con
2 o mas muestras
de un mismo
serotipo en
intervalo de 30
días.
135 que enviaron
solo una
muestra(controles)
Entrevista
16. Información demográfica
Condición de salud
Enfermedades padecidas.
Desarrollo de la enfermedad
Tratamiento recibido
Si presentaba otros patógenos
Entrevista
17.
18. El PFGE con los
estándares de pulsenet
es un procedimiento
detallado con la forma en
como se debe hacer el
análisis de tal manera
que éste se haga de la
misma forma en todo el
mundo y así se puedan
comparar los resultados.
19. Los protocolos PFGE se usan en los
laboratorios de pulsenet para realizar
estudios de las bacterias patógenas para
investigaciones de vigilancias y
epidemias. El desarrollo de estos
protocolos consiste en la optimización de
reactivos y reacciones para asegurar
resultados consistentes y de alta calidad
en los laboratorios que participan en el
pulsenet. El uso de estos protocolos
permite tipificar patógenos en
aproximadamente 24 horas permitiendo
la detección temprana de enfermedades y
en la identificación de la fuente
responsable de la infección.
20. 0 XbaI: Es una enzima de restricción que reconoce
0 5'...T↓C T A G A...3'
0 3'...A G A T C↑T...5'
0 Proviene de la bacteria Xanthomonas Badrii.
21. Secuenciación
0 Es el proceso que determina
el orden de los nucleótidos de
un fragmento de ADN, que
contienen la información
para la supervivencia y la
reproducción. Esto es
importante porque es útil
para identificar, diagnosticar
y desarrollar potenciales
tratamientos para
enfermedades genéticas.
22. 0 La secuenciación Shotgun, es un tipo de secuenciación
de largas cadenas de ADN
23. Comparación de la virulencia
asociada a fenotipos
0 Los autores estudiaron las
diferencias fenotípicas entre los
aislados primeros y últimos
obtenidos de los 11 pacientes. Esta
comparación se hizo con los
siguientes ensayos:
0 - Crecimiento en un medio mínimo
0 - Formación de biofilm
0 - Motilidad
0 - Replicación dentro de macrófagos.
24. 0 Un medio mínimo es: un medio de cultivo que me
contiene los nutrientes mínimos indispensables para
el crecimiento de una colonia también puede ser
utilizada para seleccionar las bacterias que pueden
ser utilizadas como recombinantes o como
conjurantes.
25. 0 Una biopelícula o biofilm es un ecosistema microbiano organizado,
conformado por uno o varios microorganismos asociados a una
superficie viva o inerte, con características funcionales y estructuras
complejas. se caracteriza por la excreción de una matriz extracelular
adhesiva protectora.
26. Motilidad: El propósito de este es
ver si las bacterias se pueden mover
por si solas por medio de flagelos.
Replicación dentro de macrófagos: la
estudian debido a que la Salmonella
reside dentro de los macrófagos en una
vacuola especializada. Y al parecer la
replicación de esta bacteria se da
mucho al interior de los macrófagos. El
que la Salmonella yazca dentro del
macrófago la protege de ser atacada por
lo componentes humorales y celulares
del sistema inmune.
27. Los investigadores realizaron un experimento con
animales llamado el índice de interacción para
comparar los resultados del experimento con el de
los pacientes.
28. Infección del ratón
Infectaron ratones
hembra de 7-8 semanas
Les dieron estreptomicina por sonda
oral, 24 horas antes de infectarlos.
Primera muestra + Pwsk129
última muestra + Pwsk29
Se pone en medio de cultivo: Luria Broth
con antibióticos apropiados por 16 horas y
diluido en solución salina.
0,2 ml que contenían números iguales
de Unidades de Formación de Colonias
se administraron oralmente.
Cuatro días después de iniciar la
infección los ratones fueron
sacrificados y la carga bacterial fue
medida.
31. Tabla 1
Casos analizados de salmonelosis
48.345
Casos de infecciones persistentes
1.047
2.2% de todos los casos de
salmonelosis en Israel son las
infecciones a largo plazo que
persisten 30 días o más.
32. - Periodo mínimo de
persistencia mediano
55 días
- Período máximo de
persistencia de NTS
8,3 años
Causado por una infección
por S. Newport de un varón
de 75 años de edad.
Aislamiento de
Salmonella persistente
94,2% muestras de heces
2,2% sitios extra
intestinales
3,6% tanto en las heces y
sitios extra- intestinales
durante persistencia.
33. Figura 1 (PFGE)
- OBJETIVO explicar la naturaleza de los
aislamientos de NTS recurrente y excluir la
reinfección del mismo paciente con diferentes
cepas del mismo serotipo.
- Analizaron similitud genética de 42 aislamientos
recurrentes, obtenidos a partir de 16 pacientes
diferentes
34.
35. Secuenciación
Objetivo caracterizar
mejor, posibles cambios
genéticos en una
resolución mas alta.
Genoma de Typhymurium
obtenido a partir de 11
pacientes de infecciones
persistentes en dos
momentos durante la
infección.
Elementos genéticos
móviles (MGEs) 5 de los
11 casos en aislamientos
relacionados del mísmo
paciente.
Pacientes B, D, I y K presentaron
ganancia y/o perdida de varios
plásmidos entre aislamientos
iniciales y finales.
Paciente E carecía de
profago en aislamiento final
que estaba presente en
aislamiento inicial.
36. 0 En la secuenciación también se encontraron múltiples
polimorfismos de nucleótidos únicos (SNPs) en genes
reguladores de virulencia global
0 dksA, rpoS, hilD, meIR…
37. Figura 2
- Todos los 3 aislamientos del
paciente K no albergaron el
plásmido pSLT de 95 kb de S.
Typhimurium.
- Esto indicó que el plásmido
de virulencia no se requiere
para mantener una infección
persistente en humanos.
38. Discussion
0 This study provides important clinical and public
health insights, indicating that a small fraction (at
least 2.2%) of NTS-infected patients continue to shed
Salmonella for an extended period of time (months
and even years). These individuals possibly serve as a
human reservoir for NTS transmission.
39. Author What he/she said Yes/ Not
- Buchwald DS, Blaser MJ.
- Sirinavin S, Garner P.
“Our study suggests that antibiotic
treatment and young age are associated
with prolonged symptomatic infection”. Y
- Octavia S, Wang Q,
Tanaka MM, Sintchenko V,
Lan R.
Reported a low SNPs rate in S.
Typhimurium associated with
short and long-term carriage. Y
- Ellermeier CD, Ellermeier
JR, Slauch JM.
- Rychlik I, Barrow PA
“Multiple nonsynonymous SNPs were
found in key virulence regulators including
DksA, RpoS, HilD, MelR, and BarA.
Mutations in these regulators have the
potential to affect virulence and host-
pathogen interactions”
Y
40. Author What he/she said Yes/ Not
- Koskiniemi S, Gibbons
HS, Sandegren L, et al.
“It is possible that these regulatory
mutations increase Salmonella in-host
fitness and are being subjected to a positive
selection leading to the emergence of
specific pathoadaptive variants”.
Y
41. The researchers were able to demonstrate that at least
2% of the reported NTS infections in Israel result in a
persistent infection with the same strain for months or
even years.
- Identified the contribution of both human and
pathogen-related risk factors to this manifestation and
exhibited the gain of genetic and phenotypic differences
between related isolates and their potential to affect
Salmonella pathogenicity in vivo.
42. Conclusions
0 It is important to expand studies about persistent diseases such
as in the case of Salmonella, because it is a public health risk for
the population.
0 The presence of mobile genetic elements and different SNPs can
generate both genetic and phenotypic changes in virulence and
host-pathogen interaction.
0 This study expanded the knowledge about Nontyphoidal
Salmonella, which has been little studied, generating great
advances in the pathogenesis and characterization of this
disease.
43. 0 In the case of Nontyphoidal Salmonella, factors such as the use
of antibiotics, age, hospitalization or other infection with
different pathogens can influence the persistence of a
symptomatic or non-symptomatic disease.