Trabajo realizado por los alumnos Paola Cantero, Deborah Cardenuto y Micaela Mirson para la asignatura Química Orgánica I del Profesorado en Química del Inst Sup del Prof Joaquin V González. Agosto 2013

1. Trabajo Práctico N°3
Cromatografía.
Profesora: Alejandra Salerno
Jefa de Trabajos Prácticos: Claudia Elalle
Profesorado en Química
Alumnas:
Cantero, Paola
Cardenuto, Deborah
Mirson, Micaela

2. Cromatografía.
Técnica que permite la separación de los compuestos de una mezcla a partir
de una fase móvil y una fase estacionaria.
• Capa fina
La cromatografía en capa fina (en inglés Thin Layer Chromatography o TLC) es una técnica analítica
rápida y sencilla donde la fase estacionaria es una capa delgada de un material depositado sobre un soporte,
denominado placa. La fase móvil es disolvente o mezcla de disolventes llamada eluyente que se mueve por la
fase estacionario por capilaridad. Generalmente las placas están formadas por una capa de gel de sílice u otro
material adsorbente.
• Columna
La cromatografía en columna se lleva a cabo en una columna de vidrio vertical que se llena con la fase
estacionaria, colocándose la muestra que se quiere separar en su la parte superior. El resto de la columna se
llena con la fase móvil, que por efecto de la gravedad hace mover la muestra a través de la columna. Luego se
establece un equilibrio entre el soluto adsorbido en la fase estacionaria y la fase móvil, y como cada uno de
los componentes de una mezcla establecerá interacciones diferentes con ellas serán transportados a diferentes
velocidades y se conseguirá su separación .

3. Objetivos.
 Separar una mezcla por cromatografía de placa delgada
(TLC), para determinar la fase móvil adecuada.
 Separar una mezcla por cromatografía en columna.

4. Materiales y Reactivos.
• Reactivos: Rojo de metilo.
Azul de metileno.
Cloruro de metileno
Silicagel.
Metanol.
Acido acético.
• Materiales: Pipeta.
Probeta
Vaso de precipitados.
Vidrio de reloj.
Capilares.
Bureta.

5. Procedimiento.
Primera parte: elección de la fase móvil por TLC
• Preparar cuatro fases móviles de 4ml en vasos de precipitados con:
1° diclorometano.
2° metanol.
3° diclorometano, metanol 3:1
4° diclorometano, metanol 30:1

6. • Preparar los capilares para la siembra.
• Reservar los mismos y descartar en un envase adecuado.

7. • Preparar cuatro placas para la siembra, delimitando el punto de siembra y un extremo
superior.
• Llenar los capilares con la mezcla de colorantes y proceder a la siembra de las cuatro
placas.
Mezcla de colorantes

8. • Eluir una placa sembrada en cada una de las fases móviles preparadas y observar la
cromatografía.

9. • Retirar las placas, determinar el RF de cada una y elegir la fase móvil mas adecuada
para la separación de los componentes de la mezcla.

10. Resultados Obtenidos
Determinación de RF
RF = Distancia recorrida por la muestra
Distancia recorrida por la fase móvil
Placa 1 (FM: Diclorometano) Placa 3 (FM: Diclorometano/Metanol 3:1)
Distancia muestra: 0,1cm Distancia muestra: 3,1 cm
Distancia FM: 4,4 cm Distancia FM: 4 cm
RF: 0,022 RF: 0,775
Placa 2 (FM: Metanol) Placa 4 (FM: Diclorometano /Metanol 30:1)
Distancia de muestra: 0,3 cm Distancia muestra: 1,9 cm
Distancia FM: 4,9 cm Distancia FM: 4,1cm
RF: 0,061 RF: 0,46

11. Conclusión
A partir de los resultados obtenidos en las placas
TLC, se dedujo que la fase móvil mas eficiente para
la cromatografía de esta mezcla de colorantes es la
solución 3 (Diclorometano – Metanol 3:1). Esto se
debe a que con esta FM, la mezcla recorre una
distancia mayor desde el punto de siembra que en
las otras placas y los componentes se separan con
una distancia cercana, que permite realizar una
cromatografía en columna con mayor rendimiento.

12. Segunda Parte: Cromatografía en Columna
• Preparar el equipo de laboratorio adecuado con bureta,
pie universal y agarradera.
• Colocar un algodón en el extremo de la bureta y llenarla con la fase
estacionaria (medida en una tapa de gaseosa)

13. • Agregar fase móvil para generar la suspensión de la fase estacionaria, con el robinete
cerrado.
• Proceder al sembrado de la mezcla en la parte superior por medio de un gotero.

14. • Colocar un algodón en la parte superior de la bureta
• Ubicar recipiente debajo de la bureta, abrir el robinete y eluir con mas FM.

15. • Observar el comienzo de la cromatografía y recoger en un tubo de ensayo las
fracciones de un mismo componente.
Eluato 1 : Rojo de Metilo

16. • Polarizar la FM con Acido Acético para obtener un aumento de velocidad de la
cromatografía.
• Recoger en otro tubo la fracción del eluato 2, azul de metileno.

17. • Comparar los eluatos obtenidos con el testigo correspondiente,
a través de una TLC.. FM: Diclorometano – Metanol 3:1, FE: Placa Silicagel ,
Siembra de: testigo, mezcla de testigo – eluato, eluato.

18. Conclusión
Teniendo en cuenta los resultados obtenidos en la cromatografía en columna, se
determinó que para separar dos compuestos con una diferencia de polaridad notable es
necesario polarizar la fase móvil. Esta polarización debe hacerse luego de obtener el
primer eluato, es decir, la fracción del compuesto menos polar (en este caso luego de
retirar el rojo de metilo)
También se observó que la cromatografía resultó exitosa, ya que al comparar el testigo
de cada componente con el eluato obtenido, la TLC y el RF de cada una fue similar.