Práctica 8

Nohay unmedicamento comola esperanza, ningúnincentivo tan grande,yningún
tónicotan poderosocomola expectativa de quealgoocurra mañana. Orison
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UNIVERSIDAD TÉCNICA DE MACHALA
“Calidad Pertinencia y Calidez”
D.L. N° 69-04, DE 14 DE ABRIL DE 1969
PROV. DE EL ORO-REP. DEL ECUADOR
UNIDAD ACADÉMICA DE CIENCIAS QUÍMICAS Y DE LA SALUD
CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA
LABORATORIO DE TECNOLOGÍA FARMACÉUTICA
PRÁCTICA BF.9.01-08
1. DATOS INFORMATIVOS
Carrera: Bioquímica y Farmacia
Docente: Bioq. Carlos García González, Ms.
Estudiante: Cinthia Mabel Cruz Alvia
Ciclo/Nivel: Noveno semestre “A”.
Fecha de Elaboración de la Práctica: Jueves 25 de Enero del 2018.
Fecha de Presentación de la Práctica: Martes 30 de Enero del 2018.
Tema de la práctica: Evaluación de calidad a base de patrones aplicando la estadística.
DATOS DEL MEDICAMENTO
 Laboratorio: Tecnofar
 Principio activo: Diosmina micronizada y
Flavonoides expresados como Hesperidina
 Concentración: 500 mg
 Forma farmacéutica: Sólida
 Nombre del producto: Diosmina
2. OBJETIVOS
 Determinar las cantidades de fenoles que contiene el medicamento y las plantas
mediante la absorción del espectrofotómetro.
 Aplicar las bases estadísticas en el control de calidad.
3. FUNDAMENTACIÓN
Los fenoles son compuestos orgánicos aromáticos que contienen el grupo hidroxilo como
su grupo funcional. Están presentes en las aguas naturales, como resultado de la
contaminación ambiental y de procesos naturales de descomposición de la materia
orgánica. La débil acidez del grupo fenólico ha determinado que se los agrupe
químicamente junto a los ácidos carboxílicos y a los taninos, conformando así el grupo de
los ácidos orgánicos.
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Las concentraciones naturales de compuestos fenólicos son usualmente inferiores a 1 µg/l y
los compuestos más frecuentemente identificados son fenol, cresol y los ácidos siríngico,
vainíllico y p-hidroxibenzoico.
El fenol se presenta en la Naturaleza en la madera y en las agujas de pino, en la orina de los
herbívoros (fenolsulfato) y en el alquitrán de hulla. Puede sintetizarse mediante la
oxidación parcial del benceno. El fenol se obtiene a partir de la destilación del alquitrán de
hulla. Según RÖMPP 1983, con 1 tonelada de hulla se obtiene aproximadamente 0,25 kg de
fenol Actualmente, predomina la producción sintética por disociación del Hidroperóxido de
cumeno, obteniéndose acetona como producto secundario (Depetris, 2014)
Los fenoles o compuestos fenólicos constituyen uno de los grandes grupos de
micronutrientes presentes en el reino vegetal; siendo parte importante tanto de la dieta
humana como de la animal. Se trata de sustancias químicas considerados metabolitos
secundarios de las plantas con diferentes estructuras químicas y actividad.
Los fenoles o compuestos fenólicos se oxidan con mucha facilidad, experimentando la
oxidación mucho antes que otras sustancias también muy oxidables. Esto les confiere
una cualidad especialmente antioxidante a fin de contrarrestar la oxidación producida por
radicales libres; productos químicos; la luz; etc. Por todo esto, la implicación de
los compuestos fenólicos en la defensa de las plantas es primordial. (Lineaysalud, 2016)
4. INSTRUCCIONES
 Trabajar con orden, limpieza y sin prisa.
 Mantener las mesas de trabajo limpias y sin productos, libros, cajas o accesorios
innecesarios para el trabajo que se esté realizando.
 Llenar ropa adecuada para la realización de la práctica: bata, guantes, mascarilla,
gorro, zapatones.
 Utilizar la campana extractora de gases siempre que sea necesario.
5. MATERIALES, EQUIPOS, REACTIVOS Y SUSTANCIAS:
a) Determinación de fenoles en medicamentos
MATERIALES EQUIPOS SUSTANCIAS MEDICAMENTO
 Vaso de
precipitación
 Balón
volumétrico 10,
25, 5 y 100ml
 Pipetas
 Tubos de ensayo
 Micropipetas
 Puntas azules y
amarillas para
micropipetas
 Eppendorf
 Guantes
 Espectrofotómetro  Ácido gálico
 Reactivo de
Folin
Ciocalteu
20%
 Carbonato de
sodio 10%
 Metanol
 Agua destilada
 Diosmina
MK 500mg

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 Mascarilla
 Gorro
 Mandil
b) Determinación de fenoles en plantas
MATERIALES EQUIPOS SUSTANCIAS MEDICAMENTO
 Vaso de
precipitación
 Balón
volumétrico 10,
25, 5 y 100ml
 Pipetas
 Tubos de ensayo
 Micropipetas
 Puntas azules y
amarillas para
micropipetas
 Eppendorf
 Guantes
 Mascarilla
 Gorro
 Mandil
 Espectrofotómetro  Ácido gálico
 Reactivo de
Folin
Ciocalteu
20%
 Carbonato de
sodio 10%
 Metanol
 Agua destilada
 Cúrcuma
 Moringa
 Jenjibre
 Cód. 4
 Cód. 8
 Guayusa
 Ají M
 Cód. 60
 Cód. 24
 Rocoto
amarillo
 Cód. 36
 Cód. 19
 Cód. 48
6. PROCEDIMIENTO
PREPARACIÓN DE CURVA DE CALIBRACIÓN DE ÁCIDO GÁLICO
1) Preparación de Folin 20% (V/V)
Se toma un volumen de 1ml de Reactivo de Folin 2N y enrazamos con agua destilada en un
balón de 5ml y se homogeniza. (1:5)
2) Preparación de Na2CO3 10%
Se pesan 2,5g de Carbonato de Sodio, disolvemos con agua destilada y se lo lleva a un
balón de 25ml. Enrazar con agua destilada y homogenizar.
3) Preparación de Ácido Gálico 0,5%
Se pesan 0,125g de Ácido gálico y se disuelven con 2,5ml de Metanol, se lleva a un balón
de 25ml y enrazamos con agua destilada. Homogenizar.
4) Preparación de Muestra Diosmina

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Pesar 1,75g de Diosmina y disolver con 5ml de Metanol, llevar a un balón de 50ml y
enrazar con agua destilada.
Peso Promedio = 700mg
700mg Polvo 50mg Hesperidina
X 0,125mg Hesperidina
X= 1750mg Polvo
1g 1000mg
X 1750mg
X= 1,75g
5) Preparación de las muestras vegetales
Pesar 0,025g de polvo de las plantas y disolver con 5ml de Metanol
6) Preparación de las diluciones de la solución madre
De la solución madre de ácido gálico que tiene una concentración de 5mg/ml llevar a las
siguientes concentraciones 0,05; 0,1; 0,2; 0,3; 0,4 mg/ml
Cálculos para las diluciones:
C1= Concentración inicial
C2= Concentración final
V1= Volumen inicial
V2= Volumen final
1. Para una concentración 0,05
C1 x V1= C2 x V2
V1= C2 x V2
C1
V1= 0,05 mg/ml x 5ml
5 mg/ml
V1= 0,05 ml = 50uL
C1 x V1= C2 x V2
V1= C2 x V2
C1
V1= 0,1 mg/ml x 5ml
5 mg/ml
V1= 0,1 ml = 100uL
C1 x V1= C2 x V2
V1= C2 x V2
C1
V1= 0,2 mg/ml x 5ml
5 mg/ml
V1= 0.2 ml = 200uL

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C1 x V1= C2 x V2
V1= C2 x V2
C1
V1= 0,3 mg/ml x 5ml
5 mg/ml
V1= 0,3 ml = 300uL
C1 x V1= C2 x V2
V1= C2 x V2
C1
V1= 0,4 mg/ml x 5ml
5 mg/ml
V1= 0,4 ml = 400uL
Nota: Se toma el volumen requerido de la solución madre y se deposita en un tubo de
ensayo protegido de la luz, luego completar volumen con agua destilada hasta 5ml.
CUANTIFICACÓN DE FENOLES
 Pesar 0,025 g de polvo del material vegetal y traspasar al tubo de vidrio tapa rosca
 Añadir 5 ml de metanol puro y homogenizar.
 Con la ayuda de una jeringa de 1 ml y con el filtro de aguja, debemos obtener el
sobrenadante (muestra).
 En un tubo Eppendorfs protegidos de la luz le adicionamos 50 uL de solución del
medicamento o del extracto vegetal.
 Luego añadir a cada tubo 200 uL de la dilución de Folin – Ciocalteu (1:4).
 Adicionamos 50 uL de agua destilada y esperamos de 4 – 5 minutos para que se dé
la reacción.
 Luego añadir 100 uL de la dilución de carbonato de sodio al 10%.
 Finalmente preparar un blanco en las mismas proporciones, es decir: 100uL de
Agua destilada, 200uL de Folin diluido (1:4), agitar y esperar 4-5min y luego añadir
1000uL de la dilución de Carbonato de Sodio 10%.
 Agitar y esperar 2h para realizar la lectura en el espectrofotómetro a 760nm.
 Después realizar la primera lectura con el blanco y encerar para realizar las
siguientes lecturas.
Concentración Volumen Sol. Madre
0.05 50uL
0,1 100uL
0,2 200uL
0,3 300uL
0,4 400uL

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Nota: Se realiza el ensayo por triplicado.

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7. GRÁFICOS
8. CÁLCULOS
Absorbancia Diosmina= 1,469
y = 3,7223x -0,0037
𝐶𝑜𝑛𝑐. Á 𝑐𝑖𝑑𝑜 𝐺á 𝑙𝑖𝑐𝑜 = 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 + 0,0037
3,7223
Conc.= 1,469 + 0,0037
3,7223
Conc. = 0,3956mg/ml
0,3956 𝑚𝑔
𝑚𝑙
x
5𝑚𝑙
0.125𝑔
= 15,824mg/g Hesperina

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9. RESULTADOS OBTENIDOS
CURVA DE CALIBRACIÓN DEL ÁCIDO GÁLICO
ANÁLISIS DE LAS MUESTRAS RESPECTO A LA CURVA DEL ÁCIDO
GÁLICO.
Código Absorbancias
Ẍ
Absorbancia
Concentración
mg/ml
Fenoles mg
EAG/g PS
Curcuma 0,472 0,576 0,565 0,538 0,135 26,92
Moringa 0,081 0,085 0,084 0,083 0,025 4,93
Jengibre 0,253 0,272 0,275 0,267 0,069 13,80
Cód. 4 0,351 0,442 0,499 0,431 0,109 21,74
Cód.8 0,180 0,249 0,256 0,228 0,060 11,94
Ají M. 0,243 0,280 0,283 0,269 0,069 13,90
Concentración
(mg/ml)
Absorbancia
0 0
0 0
0 0
0,025 0,078
0,025 0,085
0,025 0,072
0,050 0,224
0,050 0,220
0,050 0,214
0,100 0,366
0,100 0,371
0,100 0,371
0,150 0,594
0,150 0,597
0,150 0,599
0,200 0,790
0,200 0,804
0,200 0,801
0,250 1,042
0,250 1,057
0,250 0,990
y = 4.093x - 0.0115
R² = 0.9964
-0.2
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1
1.2
0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3
Absorbancia
Concentración (mg/ml)
Curva de Calibración del Ácido
Gálico 760nm

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Cód. 60 0,341 0,421 0,450 0,404 0,102 20,45
Guayusa 0,630 0,665 0,669 0,655 0,163 32,58
Cód. 24 0,260 0,348 0,348 0,319 0,082 16,32
Rocoto amarillo 0,212 0,242 0,242 0,232 0,061 12,12
Cód. 36 0,181 0,224 0,227 0,211 0,055 11,09
Cód. 19 0,266 0,299 0,287 0,284 0,073 14,64
Cód. 48 0,211 0,179 0,171 0,187 0,050 9,94
10. OBSERVACIONES
Se debe de verificar el extracto o algún otro factor que haya influido en el contenido de
fenoles de la Moringa ya que según los diferentes artículos esta es una planta que contiene
gran contenido de fenoles.
11. CONCLUSIÓN
Mediante la práctica realizada se puedo conocer que de los 700mg que pesa cada tableta de
Diosmina se específica como derivados fenólicos la Hesperina en cantidades de 50mg, de
acuerdo con esto en el análisis por espectrofotometría resulto una concentración de
15,82mg de Hesperina. Así mismo de todas las muestras vegetales analizadas las que más
contienen fenoles son la Guayusa,Curcuma, Código 4 y 60.
12. RECOMENDACIONES
 Usar siempre el equipo de protección adecuado para minimizar algún tipo de
accidente que ponga en riesgo nuestra salud.
 Aplicar las normas de bioseguridad en el laboratorio.
 Utilizar la cámara de gases para evitar intoxicaciones.
0.00
5.00
10.00
15.00
20.00
25.00
30.00
35.00
Fenoles mg EAG/g PS

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 Lavar siempre el material con agua destilada antes de utilizar ya que puede contener
sustancias que pueden interferir en su control.
 Tratar de ser precisos en el momento de medir los volúmenes requeridos ya que de
lo contrario tendremos inconvenientes tanto en la práctica como en los resultados.
 Preparar todos los extractos de acuerdo a lo establecido ya que cualquier error
puedan influenciar en el resultado.
 De acuerdo a lo establecido siempre realizar la lectura de las muestras a 760nm.
 Es de vital importancia preparar el blanco ya que caso contrario vamos a obtener
resultados erróneos.
13. CUESTIONARIO
a) Indique las propiedades de los fenoles
 Es un sólido que cristaliza como agujas incoloras de olor particular
 Su temperatura de fusión es de 38°C y su punto de ebullición de 181°C
 Poco soluble en agua. Muy soluble en éter y alcohol
 El fenol al ser un ácido débil, reacciona con facilidad con una base fuerte como la
del sodio, litio o potasio (Macias , 2011)
b) ¿Cuáles son los usos de los fenoles?
El fenol es una sustancia con enorme valor industrial, directamente o en derivados, se usa
como desinfectante, anestésicos tópicos y germicidas. Grandes cantidades de fenol se usan
para la producción de formaldehido, resinas y plásticos. (Sabelotodo, 2015)
c) ¿Cómo estánagrupados los compuestos fenólicos secundarios de las
plantas?
 Los terpenos: clase de fenoles en la que se encuentran pigmentos, aceites esenciales
y hormonas
 Los polifenoles: taninos, cumarinas, flavonoides, lignina y taninos
 Los glicósicos: glicósidos y glucosinolatos y saponinas
 Los alcaloides (Lineaysalud, 2016)
14. ANEXO
15. BIBLIOGRAFÍA

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Depetris, P. (2014). Fenoles. Obtenido de https://www.mendoza-
conicet.gob.ar/portal/enciclopedia/terminos/Fenoles.htm
Lineaysalud. (2016). Obtenido de http://www.lineaysalud.com/nutricion/compuestos-
fenolicos
Macias , P. (23 de Mayo de 2011). Química y algo más. Obtenido de
https://quimicayalgomas.com/quimica-organica/alcoholes-aldehidos-
cetonas/alcoholes-parte-4/
Sabelotodo. (Diciembre de 2015). Obtenido de
http://www.sabelotodo.org/quimica/fenoles.html
16. EJERCICIO DE APLICACIÓN
En el Laboratorio de la UTMACH se quiere conocer que cantidad de fenoles contiene el
Ají cód.4, para lo cual se le realizó análisis mediante el espectrofotómetro, en donde se
realizó el ensayo por triplicado y la absorbancia es de 0,431. Además la concentración de
este ají es de 0,109 mg/ml y con un contenido de fenoles de 21,74 mg EAG/g. El
bioquímico farmacéutico desea comprobar realizando los cálculos si se realizó de manera
correcta la lectura del ají cód.4 y los resultados fueron los siguientes:
DATOS
Absorbancia 0,431
Concentración 0,109 mg/ml
Fenoles mg EAG/g PS
21,74
𝒚 = 𝒂𝒙 + 𝒃
𝒃 = 𝑦 − 𝑎𝑥
𝒃 = 0,431 − (0,109 × 21,74)
𝒃 = 0,431 − 2,36966
𝒃 = 0,431 − 2,36966
𝒃 = −1,93866
𝒚 = 𝒂𝒙 + 𝒃
𝒙 =
𝑦 − 𝑏
𝑎
𝒙 =
0,431 − (−1,93866)
0,109
𝒙 =
2,36966
0,109
𝒙 =21,74 mg Fenoles

SwettMarden
Después de realizar los cálculos del ají cód.4 se pudo comprobar que este contiene 21,74
mg de fenoles, entonces se puede decir que se realizó la práctica de manera correcta
siguiendo los procedimientos pertinentes.
17. FIRMA DE RESPONSABILIDAD
_____________________________
Cinthia Cruz Alvia
C.I. 0950365700

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