Evaluación de Calidad a Base de patrones aplicando la estadística: Fenoles

1. “La ciencia moderna aún no ha producido un medicamento tranquilizador tan
eficaz como lo son unas pocas palabras bondadosas” Sigmund Freud
UNIVERSIDAD TÉCNICA DE MACHALA
“Calidad Pertinencia y Calidez”
D.L. N° 69-04, DE 14 DE ABRIL DE 1969
PROV. DE EL ORO-REP. DEL ECUADOR
UNIDAD ACADÉMICA DE CIENCIAS QUÍMICAS Y DE LA SALUD
CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA
LABORATORIO DE TECNOLOGÍA FARMACÉUTICA
PRÁCTICA BF.9.01-08
1. DATOS INFORMATIVOS
Carrera: Bioquímica y Farmacia
Docente: Bioq. Carlos García González, Ms.
Estudiante: María Belén Ayala González
Ciclo/Nivel: Noveno Semestre “A”.
Fecha de Elaboración de la Práctica: Jueves 25 de Enero del 2018.
Fecha de Presentación de la Práctica: Martes 30 de Enero del 2018.
Tema de la práctica: Evaluación de calidad a base de Patrones Aplicando la Estadistica
(FENOLES)
DATOS DEL MEDICAMENTO
 Laboratorio: Tecnoquímicas
 Principio activo: Diosmina y Flavonoides
 Concentración: 500 mg
 Cantidad de comprimidos: 30 tabletas
 Forma farmacéutica: Sólida
 Nombre del medicamento: Diosmina MK
2. OBJETIVOS
 Determinar el contenido de fenoles en medicamentos y en plantas.
 Validar la calidad de un principio activo a base de patrones.
 Minimizar el uso de reactivos en la cuantificación de fenoles.
3. FUNDAMENTACIÓN
Los fenoles son compuestos químicos llamados aromáticos. Las sustancias provienen de
los alcoholes aromáticos. Existen varios tipos de fenoles: los ácido-fenoles, las flavonas,
los taninos y los antocianos. Si una sustancia posee más de un fenol la denominamos
polifenol.
Su Fórmula química es C6H5OH, y tiene un Punto de fusión de 43 °C y un Punto de
ebullición de 182 °C. El fenol no es un alcohol, debido a que el grupo funcional de los
alcoholes es R-OH,y en el caso del fenol es Ph-OH. El fenol es conocido también como
ácido fénico o ácido carbólico, cuya Ka es de 1,3 • 10-10. Se puede detectar el sabor y el
olor del fenol a niveles más bajos que los asociados con efectos nocivos. El fenol se
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2. “La ciencia moderna aún no ha producido un medicamento tranquilizador tan
eficaz como lo son unas pocas palabras bondadosas” Sigmund Freud
evapora más lentamente que el agua y una pequeña cantidad puede formar una solución
con agua. El fenol se inflama fácilmente, es corrosivo y sus gases son explosivos en
contacto con la llama. El producto comercial es un líquido. Tiene un olor
repugnantemente dulce y alquitranado
Los fenoles están presentes en numerosos medicamentos, sobre todo en los medicamentos
de la familia de los analgésicos y de los antiinflamatorios pero también en ciertas drogas
como el cannabis. (CCM, 2014)
4. INSTRUCCIONES
 Trabajar con orden, limpieza y sin prisa.
 Mantener las mesas de trabajo limpias y sin productos, libros, cajas o accesorios
innecesarios para el trabajo que se esté realizando.
 Llenar ropa adecuada para la realización de la práctica: bata, guantes, mascarilla,
gorro, zapatones.
 Utilizar la campana extractora de gases siempre que sea necesario.
5. MATERIALES, EQUIPOS, REACTIVOS Y SUSTANCIAS:
Materiales Equipos Reactivos y
sustancias
Muestras
Vaso de precipitación Espectrofotómetro Ácido gálico Cúrcuma
Moringa
Jenjibre
Balón volumétrico 10, 25,
5 y 100ml.
Reactivo de Folin
Ciocalteu 20%
Cód. 4
Cód. 8
Pipetas Carbonato de
sodio 10%
Guayusa
Tubos de ensayo Ají M
Cód. 60
Micropipetas Metanol Cód. 24
Rocoto amarillo
Puntas azules y amarillas
para micropipetas
Agua destilada Cód. 36
Cód. 19
Cód. 48
Guantes Medicamento
Diosmina MK
500mg
Mascarilla
Cofia
Mandil
Zapatones
6. PROCEDIMIENTO
PREPARACIÓN DE CURVA DE CALIBRACIÓN DE ÁCIDO GÁLICO
1. Preparación de Folin 20% (V/V)

3. “La ciencia moderna aún no ha producido un medicamento tranquilizador tan
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Se toma un volumen de 1ml de Reactivo de Folin 2N y enrazamos con agua destilada en
un balón de 5ml y se homogeniza. (1:5)
2. Preparación de Na2CO3 10%
Se pesan 2,5g de Carbonato de Sodio, disolvemos con agua destilada y se lo lleva a un
balón de 25ml. Enrazar con agua destilada y homogenizar.
3. Preparación de Ácido Gálico 0,5%
Se pesan 0,125g de Ácido gálico y se disuelven con 2,5ml de Metanol, se lleva a un balón
de 25ml y enrazamos con agua destilada. Homogenizar.
4. Preparación de las diluciones de la solución madre.
De la solución madre de ácido gálico que tiene una concentración de 5mg/ml llevar a las
siguientes concentraciones 0,05; 0,1; 0,2; 0,3; 0,4 mg/ml
Cálculos para las diluciones:
C1= Concentración inicial
C2= Concentración final
V1= Volumen inicial
V2= Volumen final
1. Para una concentración 0,05
C1 x V1= C2 x V2
V1= C2 x V2
C1
V1= 0,05 mg/ml x 5ml
5 mg/ml
V1= 0,05 ml = 50uL
2. Para una concentración 0,1
C1 x V1= C2 x V2
V1= C2 x V2
C1
V1= 0,1 mg/ml x 5ml
5 mg/ml
V1= 0,1 ml = 100uL

4. “La ciencia moderna aún no ha producido un medicamento tranquilizador tan
eficaz como lo son unas pocas palabras bondadosas” Sigmund Freud
3. Para una concentración 0,2
C1 x V1= C2 x V2
V1= C2 x V2
C1
V1= 0,2 mg/ml x 5ml
5 mg/ml
V1= 0.2 ml = 200uL
4. Para una concentración 0,3
C1 x V1= C2 x V2
V1= C2 x V2
C1
V1= 0,3 mg/ml x 5ml
5 mg/ml
V1= 0,3 ml = 300uL
5. Para una concentración 0,4
C1 x V1= C2 x V2
V1= C2 x V2
C1
V1= 0,4 mg/ml x 5ml
5 mg/ml
V1= 0,4 ml = 400uL
Nota: Se toma el volumen requerido de la solución madre y se deposita en un tubo de
ensayo protegido de la luz, luego completar volumen con agua destilada hasta 5ml.
ELABORACIÓN DE LOS EXTRACTOS DE PLANTAS Y DEL
MEDICAMENTOS.
Concentración Volumen Sol. Madre
0.05 50uL
0,1 100uL
0,2 200uL
0,3 300uL
0,4 400uL

5. “La ciencia moderna aún no ha producido un medicamento tranquilizador tan
eficaz como lo son unas pocas palabras bondadosas” Sigmund Freud
1. Preparación de las muestras vegetales.
Pesar 0,025g de polvo de las plantas y disolver con 5ml de Metanol.
2. Preparación del medicamentos de Diosmina.
Pesar 1,75g de Diosmina y disolver con 5ml de Metanol, llevar a un balón de 50ml y
enrazar con agua destilada.
CUANTIFICACÓN DE FENOLES
1. Desinfectar el área de trabajo.
2. Prepara los materiales y reactivos de trabajo.
3. Pesar 0,025 g de polvo del material vegetal y traspasar al tubo de vidrio tapa rosca
4. Añadir 5 ml de metanol puro y homogenizar.
5. Con la ayuda de una jeringa de 1 ml y con el filtro de aguja, debemos obtener el
sobrenadante (muestra).
6. En un tubo Eppendorfs protegidos de la luz le adicionamos 50 uL de solución del
medicamento o del extracto vegetal.
7. Luego añadir a cada tubo 200 uL de la dilución de Folin – Ciocalteu (1:4).
8. Adicionamos 50 uL de agua destilada y esperamos de 4 – 5 minutos para que se
dé la reacción.
9. Luego añadir 100 uL de la dilución de carbonato de sodio al 10%.
10. Finalmente preparar un blanco en las mismas proporciones, es decir: 100uL de
Agua destilada, 200uL de Folin diluido (1:4), agitar y esperar 4-5min y luego
añadir 1000uL de la dilución de Carbonato de Sodio 10%.
11. Agitar y esperar 2h para realizar la lectura en el espectrofotómetro a 760nm.
12. Después realizar la primera lectura con el blanco y encerar para realizar las
siguientes lecturas.
Nota: Se realiza el ensayo por triplicado.
7. GRÁFICOS
Pesar 0,025 g de
muestra
Añadir 5 ml de
metanol.
Filtrar con ayuda de los
filtros de aguja.

6. “La ciencia moderna aún no ha producido un medicamento tranquilizador tan
eficaz como lo son unas pocas palabras bondadosas” Sigmund Freud
8. CÁLCULOS
Absorbancia Diosmina= 1,469
y = 3,7223x -0,0037
𝐶𝑜𝑛𝑐. Á𝑐𝑖𝑑𝑜 𝐺á𝑙𝑖𝑐𝑜 = 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 + 0,0037
3,7223
Conc.= 1,469 + 0,0037
3,7223
Conc. = 0,3956mg/ml
0,3956 𝑚𝑔
𝑚𝑙
x
5𝑚𝑙
0.125𝑔
= 15,824mg/g Hesperina
9. RESULTADOS OBTENIDOS
Absorbancia Diosmina
De los 700mg que pesa cada tableta de Diosmina se específica como derivados fenólicos
la Hesperina en cantidades de 50mg, de acuerdo con esto en el análisis por
espectrofotometria resulto una concentracion de 15,82mg de Hesperina.
CURVA DE CALIBRACIÓN DEL ÁCIDO GÁLICO
Pipetear todos los
reactivos y las
diferentes muestras.
LLevar a la oscuridad
durante 2 horas.
Llevar al Espectrofotómetro
y leera 760nm las
respectivas absorbacnias.
Concentración
(mg/ml)
Absorbancia
0 0
0 0
0 0
0,025 0,078

7. “La ciencia moderna aún no ha producido un medicamento tranquilizador tan
eficaz como lo son unas pocas palabras bondadosas” Sigmund Freud
ANÁLISIS DE LAS MUESTRAS RESPECTO A LA CURVA DEL ÁCIDO
GÁLICO.
Código Absorbancias Ẍ Absorbancia
Concentración
mg/ml
Fenoles mg
EAG/g PS
Curcuma
0,472 0,576 0,565 0,538 0,135 26,92
Moringa
0,081 0,085 0,084 0,083 0,025 4,93
Jengibre
0,253 0,272 0,275 0,267 0,069 13,80
Codigo 4
0,351 0,442 0,499 0,431 0,109 21,74
Codigo 8
0,180 0,249 0,256 0,228 0,060 11,94
Aji M
0,243 0,280 0,283 0,269 0,069 13,90
Codigo 60
0,341 0,421 0,450 0,404 0,102 20,45
Guayusa
0,630 0,665 0,669 0,655 0,163 32,58
Codigo 24
0,260 0,348 0,348 0,319 0,082 16,32
Rocoto
amarillo
0,212 0,242 0,242 0,232 0,061 12,12
Codigo 36
0,181 0,224 0,227 0,211 0,055 11,09
Codigo 19
0,266 0,299 0,287 0,284 0,073 14,64
Codigo 48
0,211 0,179 0,171 0,187 0,050 9,94
0,025 0,085
0,025 0,072
0,050 0,224
0,050 0,220
0,050 0,214
0,100 0,366
0,100 0,371
0,100 0,371
0,150 0,594
0,150 0,597
0,150 0,599
0,200 0,790
0,200 0,804
0,200 0,801
0,250 1,042
0,250 1,057
0,250 0,990
y = 4.093x - 0.0115
R² = 0.9964
-0.5
0
0.5
1
1.5
0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3
Absorbancia
Concentración (mg/ml)
Curva de Calibración del
Acido Gálico 760nm

8. “La ciencia moderna aún no ha producido un medicamento tranquilizador tan
eficaz como lo son unas pocas palabras bondadosas” Sigmund Freud
10. OBSERVACIONES
Se debe de verificar el extracto o algún otro factor que haya influido en el contenido de
fenoles de la Moringa ya que según los diferentes artículos esta es una planta que contiene
gran contenido de fenoles.
11. CONCLUSIÓN
De todas las muestras analizadas de guayusa, pimiento, ají, moringa, entre otros; las que
más contenido de fenoles tienen son la Guayusa, Cúrcuma, Cód. 4 y Cód. 8.
12. RECOMENDACIONES
 Preparar todos los extractos de acuerdo a lo establecido ya que cualquier error
puedan influenciar en el resultado.
 De acuerdo a lo establecido siempre realizar la lectura de las muestras a 760nm.
 Es de vital importancia preparar el blanco ya que caso contrario vamos a obtener
resultados erróneos.
13. CUESTIONARIO
1. ¿Defina qué son los fenoles?
Los fenoles son compuestos orgánicos aromáticos que contienen el grupo hidroxilo como
su grupo funcional. Están presentes en las aguas naturales, como resultado de la
contaminación ambiental y de procesos naturales de descomposición de la materia
orgánica. La débil acidez del grupo fenólico ha determinado que se los agrupe
químicamente junto a los ácidos carboxílicos y a los taninos, conformando así el grupo
de los ácidos orgánicos. (Fenol, s.f.)
2. ¿Cómo se obtiene fenoles?
0.00
5.00
10.00
15.00
20.00
25.00
30.00
35.00
Fenoles mg EAG/g PS

9. “La ciencia moderna aún no ha producido un medicamento tranquilizador tan
eficaz como lo son unas pocas palabras bondadosas” Sigmund Freud
El fenol se presenta en la Naturaleza en la madera y en las agujas de pino, en la orina de
los herbívoros (fenolsulfato) y en el alquitrán de hulla. Puede sintetizarse mediante
la Oxidación parcial del Benceno. El fenol se obtiene a partir de la destilación del
alquitrán de hulla. (EcuRed, s.f.)
3. En una mandala, coloque los efectos adversos que tienen administrarse fenol
5% inyectable.
(Vademecum Drug, 2013)
14. ANEXOS
Fascitis
necrosante
Hepatitis
Úlcera
anorrecta
Fiebre

10. “La ciencia moderna aún no ha producido un medicamento tranquilizador tan
eficaz como lo son unas pocas palabras bondadosas” Sigmund Freud
15. BIBLIOGRAFÍA
CCM. (Agosto de 2014). Fenol. Recuperado el 26 de Enero de 2018, de
http://salud.ccm.net/faq/15537-fenol-grupo-definicion
EcuRed. (s.f.). Fenol. Recuperado el 26 de Enero de 2018, de https://www.ecured.cu/Fenol
Fenol. (s.f.). Recuperado el 26 de Enero de 2018, de https://www.mendoza-
conicet.gob.ar/portal/enciclopedia/terminos/Fenoles.htm
Vademecum Drug. (12 de Diciembre de 2013). fenol * 5 % ; vía parenteral ; solución inyectable.
Recuperado el 26 de Enero de 2018, de http://standalone-preprod-
mx.vademecum.es/html_docs/hp/HTML_VMP/vmp_4391.html

11. “La ciencia moderna aún no ha producido un medicamento tranquilizador tan
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16. EJERCICIO DE APLICACIÓN
La UTMACH desea investigar la cantidad de fenoles que posee el ají denominado con el
Rocoto Amarillo, para lo cual realizó un estudio usando diversos reactivos y un
espectrofotómetro, en donde su absorbancia fue de 0,232 y con concentración de
0,061mg/ml, y dio un contenido de fenoles de 12,12mg, pero se desea comprobar de
manera manual y se procedió a realizar los cálculos pertinentes y se obtuvo lo siguiente:
DATOS
Absorbancia: 0,232abs
Concentración: 0,061mg/ml
Cantidad de Fenoles: 12,12mg
𝒚 = 𝒂𝒙 + 𝒃
𝑏 = 𝑦 − 𝑎𝑥
𝑏 = 0,232 − ((0,061 × 12,12)
𝒃 = −𝟎, 𝟓𝟎𝟕𝟑𝟐
𝒚 = 𝒂𝒙 + 𝒃
𝑥 =
𝑦 − 𝑏
𝑎
𝑥 =
0,232 − (−0,50732)
0,061
𝒙 = 𝟏𝟐, 𝟏𝟐𝒎𝒈 𝑭𝒆𝒏𝒐𝒍𝒆𝒔
Mediante los calculos de manera manual se pudo comprobar que la cantidad de fenole es
12,12mg es decir la misma cantidad que fue calculada por el equipo.
17. FIRMA DE RESPONSABILIDAD
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María Belén Ayala González
C.I. 0704558535