1. Técnicas de Laboratorio II
Mario Ariel Aranda

2. Company Logo
La Materia
Fecha
Día
Mes Clase
N°
Unidad
N°
Contenidos
19 03 01 I Hematología y Hemostasia
26 03 02 II Química Nefrológica
02 04 03 - Feriado Nacional
09 04 04 II Química Nefrológica
16 04 05 III Análisis de Líquidos de punción
23 04 06 III Análisis de Líquidos de punción
30 04 07 III Análisis de Líquidos de punción
07 05 08 I, II y III Primer Examen parcial
14 05 09 IV Proteinograma
21 05 10 IV Proteinograma
28 05 11 V Endocrinología Clínica
04 06 12 V Endocrinología Clínica
11 06 13 VI Nociones Básicas de análisis
18 06 14 VI Nociones básicas de análisis
25 06 15 VI Nociones básicas de análisis
02 07 16 IV, V y
VI
Segundo Examen Parcial

3. Company Logo
Semana Seminario Trabajo practico
19/03 Hematología Hemostasia (seminario)
26/03 Química Nefrológica I Hematología I
02/04 Feriado nacional Feriado nacional
09/04 Química Nefrológica II Hematología II
16/04 Citología Hemostasia
23/04 Líquidos de punción I Química Nefrológica
30/04 Líquidos de Punción II Citología
07//05 Primer Examen parcial Líquidos de Punción I
14/05 Proteinograma I Líquidos de Punción II
21/05 Proteinograma II Proteinogramas
28/05 Endocrinología Clínica I Endocrinología Clínica II
04/06 Endocrinología Clinica III Inmunoserología
11/06 Parasitología Parasitología
18/06 Parasitología Parasitología
25/06 Caso Integrador (discusión) Repaso
02/07 Segundo Examen parcial Caso Integrador (exposición)
Cronograma de actividades

4. Company Logo
Contenidos para Hoy
1. Introducción1. Introducción1. Introducción1. Introducción
2. Hematología2. Hematología2. Hematología2. Hematología
3. Hemograma3. Hemograma3. Hemograma3. Hemograma
4. Hemostasia4. Hemostasia4. Hemostasia4. Hemostasia
5. Laboratorio de Hemostasia5. Laboratorio de Hemostasia5. Laboratorio de Hemostasia5. Laboratorio de Hemostasia

5. Company Logo

6. Company Logo

7. Company Logo
Si no tengo el nombre: María, Mario, Marcos, Marin…?

8. Company Logo
Si no tengo la ubicación del paciente, a quién le
entregamos el resultado? Clínica, Traumatología,
Guardia, …?

9. Company Logo
Si no tengo el diagnóstico, o no se entiende, y el suero es
lipémico o ictérico, o la glucemia es elevada, o hay
parámetros alterados, es esperado o hallazgo de
laboratorio?

10. Company Logo
Si no se entiende el pedido, qué le hacemos?

11. Company Logo

12. Company Logo

13. Company Logo

14. Company Logo
Causas de rechazo de muestras

15. Company Logo
Causas de rechazo de muestras

16. Company Logo

17. Company Logo

18. Company Logo
Salud del paciente

19. Hematología
Breves nociones teóricas y Técnicas de Análisis

20. Company Logo

21. Company Logo

22. Company Logo
Células madres
No pueden distinguirse
morfológicamente
CD34+
Stem Cells de sangre periférica
pueden recuperarse: Transplante
Estroma de la M.O: Microambiente
necesario para el crecimiento y
desarrollo de las Stem Cells.

23. Company Logo

24. Company Logo

25. Company Logo

26. Company Logo

27. Company Logo
Hematocrito H:47% M:42%
Hemoglobina H:16g% M:14 g%
Eritrocitos H:5x106
M: 4,5x106
Leucocitos H y M: 5.000-10.000
Plaquetas H y M:150.000-300.000

28. Company Logo

29. Company Logo

30. Company Logo

31. Company Logo

32. Company Logo

33. Company Logo

34. Company Logo

35. Company Logo

36. Company Logo
ADULTOS relativa
N: 45-65%
E: 0-4%
B: 0-1%
L: 20-45%
M: 1-12%
Niños promedio
N 50%
L 40%
ADULTOS absoluta
N 1,8 -7,1 x 109
/L
E 0,0-0,4 x 109
/L
B 0,0-1,0 x 109
/L
L 0,8-4,9 x 109
/L
M 0,04-1,3 x 109
/L
Niños promedio
N 0,4o x 109
/L
L 0,31 x 109
/L

37. Company Logo
Neutrófilo
Cayado

38. Company Logo

39. Company Logo

40. Company Logo

41. Company Logo

42. Company Logo

43. Company Logo

44. Company Logo
SE REFIERE A ALTERACIONES POR CANTIDAD
DE LOS DISTINTOS LEUCOCITOS

45. Company Logo

46. Company Logo
Compartimientos medulares
A) Células germinales o Stem Cells
B) Células germinales comprometidas: CFU
C) Compartimento mitótico o Proliferativo
D) Compartimento post-mitótico, de reserva o
depósito.
Células con gran capacidad de dividirse y
duplicarse
Mieloblastos y Promielocitos
PMN cumplen sus funciones
Apoptosis
Vida 1/2 del PMN en tejidos: hasta 2 dias.
En los tejidos

47. Company Logo
En sangre periférica
Vida 1/2 del PMN: 6-10 hs.
Factores que afectan la concentración
de PMN en sangre periférica:
a) Rapidez de salida desde el
compartimento de reserva
b) Equilibrio entre el pool circulante y
marginal
c) Rapidez con que los granulocitos
abandonan la sangre periférica

48. Company Logo
Cinética de una infección
 Liberación de PMN maduros del pool de
almacenamiento o reserva medular.
 Proliferación del pool mitótico para
compensar y/o amplificar la carga de PMN
maduros.
 PMN maduros salen a circulación, excepto
que por el tenor del proceso infeccioso, la
demanda produzca la salida de elementos
inmaduros: Reacción leucemoide: Permite
evaluar la severidad del proceso infeccioso.
 Proliferación del Pool mitótico: ↑ en los CSF

49. Company Logo
PMN
Provenientes
de la MO
PMN
Circulantes
POOL
Marginal
PMN
Tisulares
(sangre)

50. Company Logo

51. Company Logo
1.-Leucocitosis Aumento del nº de leucocitos.
 Infecciones bacterianas piógenas.
 Inflamaciones.
 Cánceres.
 Quemaduras.
 Infarto al miocardio.
2.-Leucopenias Reducción del nº de leucocitos.
 Aplasia medular.
 Enfermedades virales.
 Tuberculosis.
 Fiebre tifoidea.
 SIDA
 Hepatitis.
 Por drogas
 Sepsis

52. Company Logo
-Neutrofilia Aumento de neutrófilos.
 Infecciones Bacterianas Agudas.
 Comienzo de infecciones virales.
 Quemaduras.
 Drogas (prednisona 40 mg).
-Neutropenia Disminución de neutrófilos.
 Pueden darse por menor producción o maduración,
ó por mayor destrucción o secuestro.
 Anemia perniciosa o aplásicas

53. Company Logo
Leucocitos
Parasitosis
Alergias
Infección Bacteriana
Infección Viral
Leucemia M./Inf. ViralesLeucemias

54. Company Logo
ALTERACIONES NUCLEARES
O
ALTERACIONES CITOPLASMÁTICAS

55. Company Logo

56. Company Logo

57. Company Logo

58. Company Logo
CON ALTERACIÓN
MORFOLÓGICA
CITOPLASMÁTICA
- Granulación gruesa

59. Company Logo
Recuerdan cuál es su función
Y Cuál es su vida media?

60. Company Logo
,
Concentración de
hemoglobina corpuscular
media
(CMHG)
Hemoglobina x 100
Hematocrito
32-36
µ3
Volumen globular medio
(VCM)
Hematocrito x 10
millones de eritrocitos.
85-95
fL
Hemoglobina Corpuscular
media (HCM)
Hemoglobina x 10
millones de eritrocito
29-32
pg

61. Company Logo
Del tamaño:
 Anisocitosis Diferentes tamaños.
 Microcitosis Menor tamaño.
 Macrocitosis Mayor tamaño.
De la coloración:
 Hipocromía C.H.C.M. disminuida ↓ 30%

62. Company Logo
 De la forma:
 PoiquilocitosisDistintas formas
 Ovalocitosis Forma ovalada
 Eliptocitosis Forma elíptica
 Esferocitosis Forma esférica
 Esquizocitosis Fragmentos de G.R.
PolicromatofiliaPolicromatofilia
Inclusiones citoplasmáticas:Inclusiones citoplasmáticas: PB, CHJ, Anillos dePB, CHJ, Anillos de
CabotCabot

63. Company Logo
Calcular el VCM y el CHCM de un sujeto con un recuento de eritrocitos
de 4000000/ mm3
, un hematocrito de 40% y una concentración de
hemoglobina de 12 g/dl. Describe los glóbulos rojos del individuo:
son normocitos?, normocrómicos?

64. Company Logo

65. Company Logo

66. Company Logo

67. Company Logo

68. Company Logo

69. Company Logo

70. Company Logo

71. Company Logo

72. Company Logo
Hemoglobina Hematocrito
Recién nacido
19.5 ± 5.0 54 ± 10
Mujeres
14.0 ± 2.0 42 ± 5
Hombres 16.0 ± 2.0 47 ± 7

73. Company Logo

74. Company Logo
n x 20 x 10
= nº GBl.
4

75. Company Logo
Mide indirectamente la concentración de proteínas
en plasma. Se altera cuando cambia la proporción
entre albúmina y globulinas
Aumenta con la edad,
menstruación, embarazo,
lactancia. Se modifica
con alteraciones hemáticas,
presencia
de Ig, o aumento de fibrinógeno

76. Company Logo
 Sugiere:
 Intensidad de la respuesta inflamatoria
 Actividad
 Generalización
 Organicidad
 Utilidad:
 Ayuda al diagnóstico
 Control evolutivo (múltiples enfermedades reumáticas)
 Valor pronóstico
 Factible en laboratorio y económico

77. Company Logo
Características:
INESPECÍFICA: no sirve para realizar un diagnóstico
etiológico y se eleva en gran número de procesos
NO ES CONSTANTE: la ausencia de elevación no
supone ausencia de patología orgánica
Varía lentamente
Ambigüedad pronóstica
Se modifica por otros factores

78. Company Logo

79. Company Logo

80. Hemostasia

81. Company Logo
Hemostasia

82. Company Logo
Coagulación Fibrinolisis
Hemostasia
Plaquetas Endotelio vascular

83. Company Logo
Trombina Plaquetas
Endotelio
TROMBOTROMBO
Sistema
fibrinolítico
Lesión

84. Company Logo
LESION
Adhesividad Plaquetaria
Agregacion Plaquetaria
Relación
Endotelio Vascular/Plaquetas
SISTEMA DE FLUJO MEDIO

85. Company Logo
LESION
Adhesividad Plaquetaria
Agregacion Plaquetaria
Relación
Endotelio Vascular/Plaquetas
SISTEMA DE ALTO FLUJO

86. Company Logo
SUBENDOTELIO
ADHESIVIDAD PLAQUETARIA
Von Willebrand
GP Ib-IX-V
GP IIb-IIIa
(αIIb
β3
)Plaqueta
Alto Flujo >>>

87. Company Logo
Celula Endotelial
fosfolipidos
Fosfolipasa A2
Acido araquidonico
Ciclo-oxigenasa
Prostaciclina
Prostaciclina
sintetasa
PG G2 PGH2
Plaqueta
fosfolipidos
Fosfolipasa A2
Acido araquidonico
Ciclo-oxigenasa
Tromboxano A2
Tromboxano
sintetasa
PG G2 PGH2
ASPIRINA
AINE

88. Company Logo
• INHIBIDORES DE LA CICLO-OXIGENASA (COX-1)
• INHIBIDORES DE LA TROMBOXANO SINTETASA
• BLOQUEADORES DE LOS RECEPTORES DEL
TROMBOXANO A2
• INHIBIDORES DE LA FOSFODIESTERASA
• INHIBIDORES DEL ACOPLE AL ADP
• INHIBIDORES DE LOS RECEPTORES PLAQUETARIOS
NIVEL DE ACCION DE LOS
ANTIAGREGANTES PLAQUETARIOS

89. Company Logo
TROMBINA
COAGULAC. INTRINSECA COAGULAC. EXTRINSECA
ENDOTELIO FACTOR TISULAR

90. Company Logo
Serino
Proteasa
1
Zimógen
o
Serino
Proteasa
2
Péptido de
activación
MECANISMO DE ACTIVACIÓN EN
CASCADA

91. Company Logo
Cal PreCal=QAPM
XII XIIa
QAPM=XI XIa
IX
VIIIa Calcio
Fosfolipidos
X Va Calcio
Fosfolipido
s
XIIIa
XIII
FIBRINOGENO
VII
F.Tisular
Calcio
VIIa
IXa
X
a
Lesión Vascular
F. Tisular
TROMBINAII
FIBRINA S FIBRINA I

92. Company Logo
Cal PreCal=QAPM
XII XIIa
QAPM=XI XIa
IX
VIIIa Calcio
Fosfolipidos
X
Va Calcio
Fosfolipidos
XIIIa
XIII
FIBRINOGENO
VII
F.Tisular
Calcio
VIIa
IXa
Xa
Lesión Vascular
F. Tisular
TROMBINAII
FIBRINA S FIBRINA I
Ca
ANTITROMBINA
PROTEINA
C
PROTEINA
S

93. Company Logo
Cal PreCal=QAPM
XII XIIa
QAPM=XI XIa
IX
VIIIa Calcio
Fosfolip.
X
Va Calcio
Fosfolip.
XIIIa
XIII
FIBRINOGENO
VII
F.Tisular
Calcio
VIIa
IXa
Xa
Lesión Vascular
F. Tisular
TROMBINAII
FIBRINA S FIBRINA I
TFPI
ANTITROMBINA
PROTEINA C
PROTEINA S

94. Company Logo
TROMBINA
ACCION ACCION ACCION
COAGULANTE INHIBIDORA ANTIFIBRINOLITICA
PLAQUETAS
FIBRINOGENO
FIBRINA
F V F Va
F VIII F VIIIa
F XIII F XIIIa
PROTEINA C
PROTEINA Ca
TAFI
INHIBE
ACTIVA
TRANSFORMA
Trombomodulina
EPCR
Factor V

95. Company Logo
Factores Vitamina K dependientes

96. Company Logo
Información
Genetica
Aminoacidos Sintesis Proteica
Pro-Factores
II, VII, IX, X, PC, PS, etc.
Carboxilasa FACTORES K
DEPENDIENTES
VITAMINA K
DICUMARINICOS
inhibe

97. Company Logo
VIDA MEDIA DE LOS FACTORES
K DEPENDIENTES
Factor VII
Proteina C
Factor X
Factor IX
Factor II
Proteina S
6 horas
6 horas
48 horas
30 horas
72 horas
50 horas

98. Company Logo
TIEMPO DE PROTROMBINA
Expresion
A. CONCENTRACION
B. TASA
C. INR (Razon Internacional
Normatizada)

99. Company Logo
Intensidad de la AnticoagulacionIntensidad de la Anticoagulacion
EventosClinicosEventosClinicos
Ventana
Terapeutica
Hem
orragias
Trom
boem
bolias
5050

100. Company Logo
PLASMINATROMBINA
AUMENTA
DISMINUYE
TROMBOSI
S
TROMBOSI
S
HEMORRAGI
A
HEMORRAGIA

101. Company Logo
t-PA
PLASMINÓGENO PLASMINA
Prouroquinasa
Uroquinasa
pdfFIBRINA
PK KK
XII
PAI-1
PAI-1
α2AP
HRG
t-PA
Uroquinasa
XII
SK
α2macroglobulina

102. Company Logo
MALLA DE FIBRINA
FIBRINÓGENO
PLASMINA
lisislisis
DÍMERO - D PDF

103. Company Logo
E
D
E
E
D
E
DD
E
DD
E DD
ED
D
E
E DD
ED
D
E
D DD
E
D
D
D D
D
plasmina
plasmina
plasmina
trombina
A + B
F XIIIa
Xfp
Yfp
X0
Y0
DIMERO D

104. Company Logo
ENFERMEDADES HEMORRAGICAS
Mecanismos de
Hemostasia
Interacción
Endotelio-Plaquetas
Mecanismo
Fibrinolítico
Extrínseca (Explosión)
Intrínseca (Ampliación)
Lesión
Adhesión
Agregación

105. Company Logo
Laboratorio de Hemostasia

106. Company Logo
Tiempo de Protrombina

107. Company Logo
Equipamiento y Muestra

108. Company Logo
Técnica
 Se utiliza plasma pobre en plaquetas (PPP) y tromboplastina
cálcica
 En un baño a 37ºC se coloca un tubo de vidrio de Khan o hemólisis
 Agregar 50 µ de PPP
 Incubar 30 segundos
 Agregar 100 µ de Reactivo y disparar el cronometro
 Detener el cronometro cuando se visualiza la formación del
coagulo.
Para obtener los resultados en % de actividad es necesario realizar
la curva de calibrado donde se interpolan los resultados obtenidos
en segundos

109. Company Logo
Curva de Calibración
Pool Buffer Porcentaje Tiempo
0,100 ml 0 100
0,70 ml 0,30 ml 70
0,50 ml 0,50 ml 50
0,25 ml 0,75 ml 25
Log de cc (%)
Tpo. (seg)

110. Company Logo
RIN
 RIN = Fórmula para expresar el TQuick en
pacientes anticoagulados con ACO que nos
independiza de la tromboplastina de trabajo
• RIN = ( PT pac/ MNPT) ISI
• MNPT: Media Geométrica del tiempo de
Quick de 20 normales del día de la
calibración de la tromboplastina de trabajo
• PT pac: Tiempo de Quick del paciente

111. Company Logo
TP prolongado
CAUSAS MÁS FRECUENTES DE
DÉFICIT
• Avitaminosis K: adquirida, iatrogénica
sindromes de mala absorción, etc.
• Hepatopatías: Obstructiva,funcional.
• Inhibidores.
La anticoagulación con ACO se controla
con el RIN

112. Company Logo
TP. prolongado
TP Prolongado
Corrección
c/plasma Normal
Corrige No corrige
Déficit de factores Inhibidores
Dosar
Factores
Repetir
Secuencia de Trabajo

113. Company Logo
Corrección con Plasma Normal
 El TQuick se puede prolongar por déficit de los
factores o por presencia de inhibidores.
 Se hace una mezcla de partes iguales del plasma
problema y de un normal de concentración conocida,
 se hace el TQuick de la mezcla
 Corrige si el valor en % es igual o mayor que el
promedio de los TQuick del paciente y el normal
 TQuick teórico (%paciente +% normal)
2
 Ejemplo de corrección
• Plasma problema (P) TQuick de 50%
• Plasma normal (N) TQuick de 80%
• Mezcla P + N TQuick de 65% o más

114. Company Logo
KPTT o APTT
 Es la prueba más sensible
 Es la prueba más reproducible
 Es sensible a los déficit de factores de
fase de contacto, IX y VIII
 Es sensible a inhibidores neutralizantes
 Es sensible a inhibidores de
interferencia
 Es sensible a la heparina

115. Company Logo
Fundamento
Se incuba el PPP
del paciente con
una mezcla de
fosfolípidos y un
activador de
contacto entre 2
a 4 minutos y se
recalcifica con
CL2Ca 25mM

116. Company Logo
Técnica
 En baño termostatizado a 37ºC
Colocar un tubo de hémolisis o Khan de vidrio
Agregar 100µl de PPP y 100µl de Reactivo de
aPTT
 Incubar según indicación del fabricante
 Agregar 100µl de CL2Ca 25mM y disparar el
cronómetro
 Detener el cronómetro cuando aparece el
coágulo

117. Company Logo
Utilidad
El aPTT se utiliza para el
seguimiento de pacientes
heparinizados con heparina
regular

118. Company Logo
Algoritmo de corrección
Índice de Rosner
(aPTT mezcla + aPTT normal/aPTT
paciente).100
< de 10% corrige
≥ de 10% no corrige

119. Company Logo
Aplicación del Índice de Rosner
CORRIGE
 Dédicit de factores de la vía intrínseca
NO CORRIGE
 Inhibidor contra factor
 Inhibidor de interferencia
 Heparina

120. Company Logo
DOSAJE DE FACTORES DE LA VÍA
INTRÍNSECA
Es un aPTT modificado
 En un baño termostatizado colocar un tubos de
vidrio
 Agregar 50µl de plasma diluido
 50µl de plasma deficiente
 50µl de reactivo de aPTT
 Incubar según indicación del fabricante
 Recalcificar con 50µl de CL2Ca 25mM
 Cronometrar
 Interpolar en la curva de calibración

121. Company Logo
DOSAJE DE FACTORES DE LA VÍA
INTRÍNSECA
PPP de un pool normal o
calibrador normal, diluir 1/5 en
buffer Imidazol
1/5 100%
1/10 50%
1/20 25%
1/40 12,5%
Proceder igual que con el dosaje

122. Company Logo
Graficar en papel log-log tiempo vs
concentración

123. Company Logo
Evaluación de la Vía final común

124. Company Logo
Tiempo de Trombina
 Mide el tiempo que tarda en coagular una
alícuota (100µl) de PPP por el agregado
de una alícuota (100µl) de trombina de
a 37ºC.
 Se informa tiempo del paciente/normal
 TT prolongado
•Afibrinogenemia
•Hipofibrinogenemia
•Disfibrinogenemia
•PDF/pdf muy elevados
•Paraproteínas
•Heparina

125. Company Logo
Criterio de Corrección del TT
TT de normal al medio N/2
TT de la mezcla P+N
Corrige si el TT de P+N es ≤ TT de
N/2
Ejemplo:
TT paciente TT P+N > N/2↑
TT cálcica Normal 18seg
TT cálcica Paciente 19seg

126. Company Logo
Dimero D

127. Company Logo
Dimero D