1. Leishmaniasis: lo profundo se oculta en la superficie Felix J. Tapia Instituto de Biomedicina Facultad de Medicina Universidad Central de Venezuela

3. Importancia de la Leishmaniasis

4. Leishmaniasis Tegumentaria en la América precolombina Nazca 200 AC – 600 DC Mochica Siglos I-VIII DC

5. Leishmaniasis en el Mundo

6. Coinfección Leishmaniasis y VIH

11. Promastigotes: (procíclicos y metacíclicos) Multiplicación en el intestino de flebótomos Amastigotes: Multiplicación intracelular en fagocitos, liberados al torrente sanguíneo por lisis celular Picadura del mosquito

13. Kamhawi 2006

14. Clasificación del Género Leishmania Complejo donovani tropica mexicana hertigi braziliensis Especie L.(L.) donovani L.(L.) tropica L.(L.) mexicana L.(L.) hertigi L.(V.) braziliensis L.(L.) infantum L.(L.) aethiopica L.(L.) amazonensis L.(L.) deani L.(V.) peruviana L.(L.) chagasi L.(L.) major L.(L.) pifanoi L.(V.) panamensis L.(L.) archibaldi L.(L.) gerbilli L.(L.) garhami L.(V.) guyanensis L.(L.) venezuelensis L.(V.) lainsoni L.(L.) aristidesi L.(V.) naiffi L.(L.) enrietti L.(V.) shawi L.(V.) equatorensis L.(V.) colombiensis Género SubGénero Mendoza, Shaw, Tapia, 1996

15. Desarrollo de la infección por Leishmania sp. Leishmaniasis cutánea críptica asintomática Reacción cutánea sin lesión Sitio primario de infección Reacción cutánea menor o ausente Leishmaniasis visceral críptica asintomática Lesión cutánea única Leishmaniasis visceral Kala-Azar L.donovani L. infantum/L. chagasi metástasis Leishmaniasis mucocutánea (LMC) L. (V.) braziliensis L. (V.) panamensis Leishmaniasis cutánea difusa (LCD) L. (L.) amazonensis L. (L.) aethiopica Leishmaniasis cutánea localizada (LCL) L. (L.) mexicana L. (V.) braziliensis L. (V.) guyanensis MUERTE Cura terapéutica PKDL Cura expóntanea o terapéutica L. (L.) mexicana L. (V.) braziliensis L. major L. tropica Douglas Barker

16. Leishmaniasis Tegumentaria C57BL/6 IFN-  BALB/c IL-4 LCL Formas Intermedias LCM LCI LCD DBA IFN  / IL-4

17. Modelo múrido de Leishmaniasis Cutánea Americana C57BL/6 BALB/c Th1 IFN-  Th2 IL-4 L. mexicana MHOM/BZ/82/BEL21 Sánchez et al. Acta Micros 1993, 2: 180-187 Aguilar-Torrentera et al. Am J Trop Med Hyg 2002, 66: 273–279 Díaz et al. Clin Exp Dermatol 2003, 28: 288-293

18. Díaz et al. Clin Exp Dermatol 2003, 28: 288-293

19. Fases de la Regulación Cutánea

20. Fases de la Regulación Cutánea Activación Inmunoestimulación Fase Efectora Desafío Captura de antígeno Migración Presentación de antígeno Expansión clonal Reclutamiento Retención Proliferación Supresión

22. Respuesta Inmunitaria en Leishmaniasis LCL LCD Th1 Th1 + Th2 Th2 LMC MHC-II ICAM-1 LFA-1

23. epidermis dermis Mo ag Mo ganglio linfático endotelio vascular QC CL IL-1 TNF-  CCL27 QC ftapia E-selectina CLA+ CCR10 TNF- α IFN- γ CCL27 CCR10 CLA+CCR10 CCL20 CLA+CCR4 CCL17 CCL22 .. . granuloma IL-4 mastocito IFN-  NK Mo IL-12 T memoria CLA+

24. Patogénesis e Hipótesis de Trabajo

25. LCL LCD Th1 Th1 + Th2 Th2 LMC MHC-II ICAM-1 LFA-1

27. Nuestros resultados en el contexto de la Regulación Cutánea

29. Densidad de Células Dendríticas que expresan CD1a, CD83 y IL-10 en lesiones de leishmaniaisis cutánea americana Díaz et al., 2002 CD1a CD83 IL-10 0 250 500 750 LCL ICL DCL células/mm 2

30. Citocinas en LCL IFN-  LCI IL-10 LCI

31. Clin Exp Dermatol 2003, 28: 288-293

32. Densidad de células iNOS positivas en ratones BALB/c y C57BL/6 infectados con L. mexicana Díaz et al., 2003 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 0 1500 3000 4500 6000 7500 C57BL/6 Control sano C57BL/6 infectado BALB/c Control sano BALB/c infectado Semanas post infección células/mm 2

34. iNOS en granulomas de LCL, ICL y LCD LCL ICL DCL 0 500 1000 1500 iNOS + cells/mm 2

35. iNOS en queratinocitos de LCL

36. D2SC-1 + a mastigotes 3 hr

37. Interacción Célula Dendrítica y Leishmania D2SC-1 + promastigotes L . (V.) panamensis 0 5 10 15 20 25 1hr 3hr 6hr 24hr 1p 2p 3p +3p total % células infectadas tiempo de incubación

38. Gallo et al. 2005 Péptidos Antimicrobianos

39. Eucariotes Péptidos catiónicos Cecropinas Defensinas Thioninas Clase Aminoácidos enriquecida Derivados de Histonas Beta Hairspin Proteínas estructurales y funcionales Cathelicidinas Thrombocidinas Péptidos aniónicos Derivados de Neuropéptidos Ricos en Ácido Aspártico Dipéptidos Aromáticos Proteínas unidas a Oxigeno Péptidos Antimicrobianos

40. Péptido LL-37 en leishmaniasis cutánea difusa

41. CD de médula ósea infectadas con L.mexicana y el péptido LL-37 sin LL-37 con LL-37

42. Alteraciones ultraestructurales de promastigotes de Leishmania (L.) mexicana inducidas por el péptido antimicrobiano LL-37

43. Alteraciones ultraestructúrales de promastigotes de Leishmania (L.) mexicana inducidas por el péptido antimicrobiano LL-37 acidocalcisomas (asterisco) mitocondrias (flecha fina) flagelo (cabeza de flecha) envoltura nuclear (flecha gruesa) envoltura del cinetopato (triángulo)

44. Células Dendríticas infectadas con L.mexicana y el péptido LL-37 . Ensayo de linfoproliferación con CFSE 0 1 2 3 4 5 0 10 20 30 40 LL  37 (5  g/ml) Ag + LL-37 (5  g/ml) Mitosis Células (%)

45. Fases de la Regulación Cutánea Activación Inmunoestimulación Fase Efectora Desafío Captura de antígeno Migración Presentación de antígeno Expansión clonal Reclutamiento Retención Proliferación Supresión

46. Kinetoplastid Biol Dis, 2005 4:2

47. Progresión de la infección por L (L) mexicana en ratones BALB/c neonatos receptores de células dendríticas de los diferentes grupos experimentales 0 1 2 3 4 5 6 7 8 0 1 2 3 4 5 - 5x10 5 promastigotes 1x10 6 CDs adulto infect adulto 1x10 6 CDs adulto infect neonato 1x10 6 CDs adulto sano 1x10 6 CDs neonato sano Semanas de infección Grosor almohadilla plantar (mm)

48. Densidad de células positivas para IL-4 e IFN-  en ratones BALB/c neonatos receptores de células dendríticas de los diferentes grupos experimentales AS NS AIEN 0 500 1000 1500 2000 2500 3000 IL-4 IFN-  células/mm 2 semana 7

49. Fases de la Regulación Cutánea Activación Inmunoestimulación Fase Efectora Desafío Captura de antígeno Migración Presentación de antígeno Expansión clonal Reclutamiento Retención Proliferación Supresión

51. 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 1 2 3 4 5 6 weeks of infec tion footpad thickness ( mm ) 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 1 2 3 4 5 6 Progresión de la infección por L. (L.) mexicana en ratones BALB/c y C57BL/6 sometidos a estrés agudo 2hr stress & healthy 2hr stress & infect 8hr stress & infect infec t without stress

52. 0.0 4.0 8.0 12.0 0 250 500 750 1000 0 1000 2000 0 sem 4 sem 8 sem weeks of infection 2hr estrés sanos 2hr estrés infectados 8hr estrés infectados Sin estrés infectados Densidad de células de Langerhans en grupos experimentales de BALB/c y C57BL/6 c ells /mm 2

53. Células de Langerhans Ia d + en epidermis separada de ratones BALB/c infectados con L. (L.) mexicana No estresado Estresado por 2 hr

54. 1 3 5 9 11 0 100 200 BALB/c estresado & infectado BALB/c infectado Weeks of infection Densidad de células DC-SIGN positivasen lesiones de ratones BALB/c estresados e infectados con L.mexicana c ells /mm 2

55. 1 3 5 9 11 0 1000 2000 3000 BALB/c infectado y estresado BALB/c infectado * * * * Densidad de macrófagos MOMA-2 positivos en lesiones de ratones BALB/c infectados con L.mexicana * p  0.05 Weeks of infection c ells /mm 2

56. 1 3 5 9 11 0 100 200 Células TLR- 9 positivas en lesiones de ratones BALB/c infectados con L.mexicana 5 semanas Weeks of infection BALB/c stressed & infect BALB/c infect c ells /mm 2

57. Leishmaniasis vesceral cutánea

58. Leishmaniasis Visceral Canina sintomático asintomático onicogrifosis alopecia

59. Hígado Bazo Hígado Bazo 0 250 500 750 1000 S intomático - Hígado S intomático - Bazo As intomático - Hígado As intomático - Bazo LDU (par á sit o s/1000nuclei) Carga parasitaria en perros con infección natural por L. infantum/L. chagasi

60. MHC II CD11c 0 1000 2000 3000 c élulas /mm 2 Células MHC II+ y células dendríticas en hígado y bazo de perros con infección natural por L. infantum/L. chagasi MHC II CD11c 0 1000 2000 3000 hígado bazo as in tom á tic o s s in tom á tic o s sanos

61. Laboratorio de Biología Molecular Instituto de Biomedicina Estudiantes: Ysamar Chirinos Alba Quiñones María del Rosario Ruiz Fabiola Cabrera María Alejandra Sarabia Eliana Figueira Mónica Fernández Adriana Arbeláez Celsy Hernández Alejandra Da Almeida Pedro Salazar María C. García Laboratorio: Nilka L. Díaz Richard Ramírez Izaskun Urdanibia Iraima B. Monsalve Mónica Suárez Miguel Marzal Luis González Colaboradores: Martín A. Sánchez Zelandia Fermín Ladys Sarmiento

62. Laboratorio de Biología Molecular [email_address]