inmunohematologia

1. INMUNOHEMATOLOGIA
BASICA

2. LAINMUNOHEMATOLOGÍA
Es la parte de la hematología que estudia procesos
inmunitarios que tienen lugar en el organismo en
relación con los elementos sanguíneos.
Uno de los aspectos más importantes de la
inmunohematología es el estudio y cuantificación de
los grupos sanguíneos eritrocitarios que son
componentes antigénicos presentes en la superficie
de los hematíes, ya que se relaciona directamente
con la terapéutica transfusional y la prevención de
accidentes hemolíticos graves.

3. ANTÍGENO
Los antígenos de los grupos
sanguíneos pueden ser proteínas o
glicoproteínas estructurales de
membrana del eritrocito.
• Llamadas también inmunoglobulinas, son
proteínas plasmáticas que se ubican en la
fracción gammaglobulinas, producidas por el
sistema inmunológico para reconocer y
unirse al antígeno para su destrucción.
• Están formados por cadenas de Aminoácidos
unidas por puentes peptídicos.
• Son Sintetizados por los linfocito B maduros
ANTICUERPO
• Inmunoglobulinas: Ig E, Ig A, Ig D, Ig G e Ig M.

4. • Constituyen alrededor del 73% de las
inmunoglobulinas totales.
• Por su tamaño, atraviesan con facilidad la
pudiendo
HEMOLITICA
causar LA
DEL RECIEN
placenta,
ENFERMEDAD
NACIDO.
• No producen aglutinación de los glóbulos
rojos antigénicos; solo los recubre y
sensibiliza.
• Constituyen alrededor un 8% de las
inmunoglobulinas totales.
• Aglutinan con facilidad a los glóbulos rojos.
Debido a su alta valencia.
• Durante las reacciones antígeno - anticuerpo ,
activan el complemento, causando hemolisis
de los eritrocitos

5. PRINCIPIOS DE LA REACCIÓN ANTÍGENO - ANTICUERPO
En las reacciones antígeno-anticuerpo se distinguen 2 fases:
• La primera consiste en la unión del antígeno con el anticuerpo .
• La segunda en las manifestaciones que resultan de dicha unión.
La clave de la unión está en la complementariedad entre Ag y Ac: si ésta es
buena, se produce la exclusión de agua, lo que permite un acercamiento
estrecho entre epitopo y paratopo, lo que determina altas fuerzas de unión.

6. Características de la reacción
antígeno anticuerpo
REVERSIBILIDAD: Dado que la reacción
se debe a fuerzas no covalentes es
reversible y por lo tanto se ve afectada
por factores como la temperatura, la
proporción ag-ac, el pH y la fuerza
iónica.
ESPONTANIEDAD: La reacción ag-ac no requiere
energía adicional para poder efectuarse.
RAPIDEZ: Es la velocidad con la que ocurre
la primera etapa de la reacción. La segunda
etapa, incluyen todas las manifestaciones
que se presentan como consecuencia de la
interacción: precipitación, aglutinación,
floculación, hemolisis, etc.
capacidad de una población
ESPECIFICIDAD: Es la capacidad de un
anticuerpo de combinarse con un solo
determinante antigénico, o la
de
anticuerpos para reaccionar con un solo
antígeno

7. La mayoría de las técnicas empleadas en banco
de sangre para detectar las reacciones
antígeno – anticuerpo se basan en :
Hemolisis Aglutinación
TIPOS DE REACCION

8. HEMOLISIS
La hemolisis de los eritrocitos mediada por inmunidad, depende de:
• La clase de Inmunoglobulina
• La capacidad del anticuerpo de unirse al complemento
• La interacción con el sistema reticuloendotelial (sistema
mononuclear fagocitico)
El mecanismo de La hemolisis inmune determina el lugar de la
hemolisis:
a. H. intravascular: característico de Ac IgM, mediada por
complemento.
b. H. extravascular: característico de Ac IgG, mediada por sistema
mononuclear fagocitico.

9. AGLUTINACIÓN
Anticuerpo
Los antígenos situados en
la membrana de los
hematíes reaccionan con
los anticuerpos y el
resultado de la reacción
produce aglutinación.
Antígeno

10. Se definen en dos fases:
1. Sensibilización: Unión de anticuerpos con antígeno, es
reversible y la fuerza de unión depende de la “exactitud de
encaje” entre el antígeno y el anticuerpo. Se ve influenciado
por los siguientes factores:
• Temperatura: IgM a 4°C e IgG a 37°C
• pH: 6 – 8
• Fuerza Iónica del medio: Baja fuerza iónica incrementa la tasa
de unión de Ac. Esta es la base de la pruebas para detección
de Ac que emplean LISS.

11. 2. Aglutinación:
Se debe al entrecruzamiento que los Ac facilitan
entre las células.
La aglutinación de GR cubiertos tanto por IgM e IgG
aumenta por centrifugación.

12. • La aglutinación de glóbulos rojos en suspensiones
fisiológicas puede ocurrir por dos mecanismos
básicos:
Aglutinación
especifica
Aglutinación
inespecífica

13. Aglutinación especifica
Partiendo del concepto que una suspensión de glóbulos rojos en
soluc. Salina fisiológica constituye un sistema estable; entonces
diremos que:
• Cuando la estabilidad es cambiada por la introducción de
anticuerpos específicos que se fijan con antígenos de
membrana eritrocitaria, produciendo la aglutinación de estas
células.

14. Aglutinación inespecífica
• Llamado fenómeno de panaglutinación
• Los glóbulos rojos (no sensibilizados por los anticuerpos) son
aglutinados
suspensión.
Como:
por sustancias presentes en el medio de la
- Detergentes
- Iones metálicos: Cr
, Al,Fe
- Macromoléculas: albumina, polibreno, dextran, etc.

15. Proceso físico - químico de la aglutinación
El factor mas importante en este proceso es:
“La distancia media que separa los glóbulos rojos en
suspensión”
Esta distancia puede ser disminuida por la adición de anticuerpos u otras
sustancias al medio, hasta un punto critico en que ocurre la AGLUTINACION.

16. D: constante dieléctrica del medio
U: fuerzo ionica del medio de suspension
Y : carga eléctrica del G.R.
POTENCIAL ZETA
La diferencia del potencial eléctrico creado entre la doble capa de iones
positivos cerca del glóbulo y el medio con iones de sodio y cloruro se denomina
potencial Z.
La fuerza de repulsión entre glóbulo rojo,
del Potencial Z
en un medio salino depende del valor

17. Por ello, al considerar la aglutinación especifica de los hematíes hay que tener en cuenta, como
mínimo tres variables:
🞅 La carga eléctrica de la superficie del hematíe (y)
🞅 La constante dieléctrica del medio (que constituye una determinación
relativa del estado de ionización) (D)
🞅 Fuerza iónica del medio de suspensión ( u)

18. Fuerza de repulsión: debida a los escudos de cargas positiva (capa doble) creados
alrededor de los glóbulos rojos.
En la ausencia de agentes
aglutinantes, la fuerza de
repulsión predomina y mantienen
la suspensión globular estable en
medio salino.
Desde el punto de vista físico - químico la aglutinación ocurre por la agregación de los
glóbulos rojos, cuando la distancia entre ellos se reduce hasta un valor mínimo.
Esta distancia depende de los valores de dos fuerzas antagónicas:
Fuerza de cohesión: Es la tensión interfacial que tiende agregar a los glóbulos rojos

19. El potencial zeta de un sistema puede ser cambiado de dos maneras:
1. Por la reducción de la carga eléctrica de la membrana
del hematíe (debidos al tto de GR con enzimas
proteolíticas - tripsina, bromelina, ficina, papaína - y
efecto de fijación de Ac)
2.Cambios en la composición del medio (cambios de la
fuerza iónica y de constante dieléctrica del sistema -
macromoleculas)
Los parámetros utilizados para
comprender las reacciones de
aglutinación son:
• Si la carga eléctrica del
glóbulo rojo disminuye
• Si la constante dieléctrica
del sistema aumenta
• Si la fuerza iónica del medio aumenta
El potencial zeta
puede bajar o aumentar
la aglutinabilidad del
sistema, o hasta puede
promover la aglutinación
de los GR en suspensión

20. Factores que intervienen en la reacción
antígeno - anticuerpo
• Disminución del potencial Z.
• Tipo de inmunoglobulina.
• Numero de antígenos
• Ubicación de los antígenos
• Temperatura
• Proporción de Ag/Ac
• pH
• Cambios en la fuerza Iónica del medio
SENSIBILIZACION
AGLUTINACION

21. TEMPERATURA
La temperatura ideal para promover la reacción antígeno
anticuerpo depende de la naturaleza del anticuerpo.
• Los anticuerpos fríos: Ig M, reaccionan a 4°C
• Los anticuerpos calientes: Ig G, reaccionan a 37 ºC.
PH
• La mejor sensibilización se logra a un pH entre 6 – 8
• Fuera de estos limites se puede observar hemolisis de los
G.R. para valores extremos del ph o una inhibición de la
aglutinación.
Factores que afectan la sensibilización

22. PROPORCIÓN Ag/Ac
⚫La sensibilidad del test se incrementa
cuando la concentración del anticuerpo
es más alta que la del antígeno.

23. CAMBIOS EN LA FUERZA IONICA DEL MEDIO
• Es determinado por la cantidad de iones Na+ y Cl-. El plasma
tiene alta concentración en cloruro de sodio.
• La presencia de estos iones en el medio bloquea las cargas
superficiales de los glóbulos rojos y los anticuerpos. Una capa
de Na+ es formada alrededor de ellos es por ello que su unión
es más difícil.
• Pero si la concentración de los cationes alrededor de los
glóbulos rojos disminuye, este permite a las moléculas de
anticuerpos tener más fácil acceso a los lugares antigénicos de
la membrana eritrocitaria aumentando así la sensibilización.
• “ De acuerdo a la ecuación del potencial Z: donde hay un
aumento de la fuerza iónica (u) lleva a una disminución del
potencial zeta de la suspensión de glóbulos rojo lo que
favorece la aparición de aglutinación.”

24. Factores que interviene en la aglutinación
Puede
variación
ser alterado
de la carga
por la
de los
hematíes o por la variación en la
concentración de cationes libres
en el medio de suspensión.
Cuando la unión de antígeno-
anticuerpo sobre la superficie de
la célula, rompe el potencial Z
hace más fácil la unión de un
eritrocito con otro.

25. TÉCNICAS SEROLÓGICAS
Esenciales para la detección e
identificación de aloanticuerpos,
antianticuerpos, fenotipaje de GR,
diagnostico de anemias hemolíticas
diagnostico de
hemolíticas del RN
(AHAI) y
enfermedades
(EHRN).

26. Técnicas de producción artificial de la aglutinación de. G.R
Los principales elementos para producir aglutinación son:
LISS: Refuerza la interacción Ag – Ac durante la incubación,
aumentando la velocidad de asociación y permitiendo acortar el
tiempo de incubación de 60 minutos a 10 – 15 minutos sin
sacrificar la sensibilidad
SUSTANCIAS MACROMOLECULARES: Albumina al 20 – 30%, y el
polietilenoglicol (PEG), aumenta su constante dieléctrica de la
suspensión, disminuyendo el escudo de cargas positivas, debido
a esto, baja el valor del potencial y disminuye la fuerza de
repulsión interglobular; favoreciendo la aglutinación.
Posee una extremidad positiva(amínica) y otra negativa(carboxilica) y
se polarizan en el campo eléctrico de los G.R.

27. Enzimas proteolíticas:
La tripsina, la papaína, la bromelina y ficina son las
principales enzimas proteolíticas, capaces de sacar de la
membrana eritrocitaria fragmentos peptídicos de
glucoproteínas de membrana conteniendo moléculas de
acido sialico, disminuyendo la carga negativa de los GR.
“Potencial z es directamente proporcional a la
electronegatividad del glóbulo rojo”
Técnicas de producción artificial de la
aglutinación de G.R.

28. TRATAMIENTO DE HEMATIES POR
ENZIMAS PROTEOLITICAS
Hematies Potencial Zeta(mv) Reduccion del
potencial Z(%)
No tratados - 19.6 0.0
Tripsina - 15.6 24.4
Bromelina - 14.1 28.1
Papaina - 10.1 48.0
Ficina - 9.0 53.9

29. PRUEBAS SEROLOGICAS PARA
ESTUDIOS INMUNOHEMATOLOGICOS
SEROLOGIA EN TUBO

30. TECNICADE GEL - CENTRIFUGACIÓN

31. PRUEBA DE ANTIGLOBULINA
HUMANA
PRUEBA DE COOMBS

32. INMUNOLOGÍA DEL GLÓBULO ROJO

34. REACCIÓN ANTÍGENO – ANTICUERPO
Influida por
• Tamaño del anticuerpo
• Repulsión eléctrica entre glóbulos rojos
• Efecto del número de moléculas del
anticuerpo
• Número de sitios antigénicos
• Proyección de la membrana celular
• Efecto de dosis
• Efecto de las enzimas (tripsina, ficina,
bromelina o papaína)
• Efecto de coloides
• Efecto de fuerza iónica
• Efecto de la temperatura
• Centrifugación y efecto del tiempo

35. FACTORES QUE INFLUYEN EN LA SENSIBILIZACIÓN
DE LOS HEMATÍES:
• Proporción relativa de antígeno / anticuerpo
• Ph del medio donde se produce la reacción
• Temperatura 37 °c
• Potencial iónico del medio

36. FACTORES QUE INFUYEN EN LA
AGLUTINACIÓN:
• Potencial iónico del medio
• Presencia de albumina en le medio
• Temperatura
• Densidad del antígeno
• Agrupación y movilidad de los antígenos
• Características del anticuerpo
SENSIBILIZACION AGLUTINACION
Separación del
acido siálico por
enzimas
Albumina -
Aumento del
potencial iónico
Disminución del
potencial iónico

37. PRUEBA DE LA
ANTIGLOBULINA
ROBERT RUSSELL RACE,
ARTHUR MORANT, ROBIN
COOMBS 1945
DIRECTO INDIRECTO
I g G-Ac incompletos
Ig M - Completos

38. ANTIGLOBULINA
Suero de origen monoclonal carente de anticuerpos heterofilos
Se une por su porción Fab a porció Fc de cadenas pesadas

39. ANTIGLOBULINA
- Poliespecífica IgG,
C3d
- Monoespecífica

40. Kappa , lamnda
Ig M, I gA
C3b, c4d, c4b

41. INDICACIONES DEL TEST COOMBS
DIRECTO:
Diagnostico de :
• Enfermedad hemolítica del RN
• Anemia Hemolítica autoinmune
• Anemia hemolítica por causa de
fármacos
• Reacciones Transfusionales
In vivo

42. FUNDAMENTO
Se hace lavado de hematíes
Se enfrentan los hematíes a antiglobulina
Si hay inmunoglobulinas o fracciones de complemeto …. > Aglutinación = POSITIVO

43. MÉTODO
Tubo
Reactivo Poliespecífico de inicio ----si positivo--- re repite con monoespecífico
Si negativo: verificar
CONTROL DE COOMBS
Que usa hematíes
Sensibilizados con I g G

44. MÉTODO DEL GEL- MICROCOLUMNA
Centrifuga
Positivo por Complemento
• 10-20 % AHAI Por anticuerpos calientes
• Sindrome de aglutininas frias, reaccionan < 32°c
• Inmunocomplejos
c3
Reacciones positivas
1. Adsorción inespecífica de proteínas
2. Farmacos (cefalosporinas)
3. Inmunocomplejos (Farmacos)
4. Transferencia pasiva (transfusiones)
5. Poliaglutinidad . Exposi. Antig T por infección
6. Contaminantes (sílice, suciedad, iones metálicos)

45. TÉCNICA EN TUBO
TARJETA
SOLIDO

46. INDICACIONES PARA EL TEST INDIRECTO
• Detección de anticuerpos irregulares
• Detección de fenotipos
• Pruebas Cruzadas

47. FUNDAMENTO:
Se ponen en contacto anticuerpos
y antígenos incubados a 37°C, el
tipo de muestra y reactivo variaran
según la prueba:
• Prueba cruzada hematíes
donante/plasma paciente
• Anticuerpos irregulares
hematíes comerciales / plasma
del paciente}
• Estudio fenotipo hematíes del
paciente / antisueros
comerciales

48. MÉTODOS:
TUBO
Incubación a 37°C por 7 min
Centrifugacion
Lectura

49. METODO DE GEL – MICROCOLUMNA
Se utiliza una gota de hematíes y otra de plasma
reactivo comercial a 37°C, se centrifuga y lee

51. FALSOS POSITIVOS
• Autoanticuerpo frio------ Fijación de complemento in vitro y autoaglutinacion
• Defecto de técnica ------ Tubos sucios, sílice coloidal
• Anticuerpo Heteroespecifico ..> Anticuerpo heterólogo en el reactivo antiglobulina
• Hematíes poliaglutinables- Presencia de anti T o anti Tn en el reactivo antiglobulina
FALSOS NEGATIVOS:
Problemas técnicos :
• Olvidarse añadir el reactivo antiglobulina
• Neutralizacion del reactivo antiglobulina por lavado
insuficiente de los hematíes
• Contaminacion o neutralización del reactivo antiglobulina