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1 CONGRESO ARGENTINO Y LATINOAMERICANO DE
            CIRUGÍA HEPATO-PANCREATO-BILIAR

  Comparación del efecto protector de Preacondicionamiento
isquémico hepático y Simvastatina en la lesión hepátocitica por
                isquemia reperfusión en ratas

                Estudio prospectivo, aleatorizado y ciego.



             Dr. Juan Manuel Sanguinetti, Dr. Diego Muguruza,
        Br. Valeria Mejias, Br. Diego Mainti ,Dr. Manuel Sanguinetii,
                                Dr. Juan Cossa.

                    Departamento Básico de Cirugía
                          Facultad de Medicina.
                   Prof. Dr. Gonzalo Fernández Naone
                       Universidad de la República
                          Montevideo - Uruguay
INTRODUCCION
LESION POR ISQUEMIA REPERFUSION (LIR):

• En la isquemia se produce un estado proinflamatorio .
• En la reperfusión se producen sustancias citotóxicas.
  Puede llevar a la necrosis celular o a la apoptosis.

Existe una etapa temprana y otra tardía en la LIR.


    En diversos procedimientos el hígado es expuesto a la LIR.
   Cirugía.
   Shock.
   Transplante.
   Trauma.
INTRODUCCION
Estrategias de Protección :

• Fármacos
(corticoides, antioxidantes, anticuerpos anticitocinas, proteínas recombinantes,etc).

• Terapias génicas.
• Quirúrgicas.
• Terapias basadas en el “Shock térmico”.
INTRODUCCION
• PREACONDICIONAMIENTO ISQUEMICO (PI).

     • Proceso en el cual se realizan episodios de isquemia
      reperfusión breves y repetitivos antes de una isquemia
                           prolongada.


Se ha estudiado su valor en diferentes órganos.

A nivel hepático existen escasas publicaciones.
INTRODUCCION
• ESTATINAS.
• Son poderosos hipolipemiantes .
• Beneficios en la LIR dependen de la capacidad de preservar y mejorar
  la función endotelial.

• Se ha comunicado que la simvastatina disminuye los niveles de :
  TNF alfa y de las transaminasas hepáticas durante la LIR.

• Propiedades anti oxidantes .

• Escasas comunicaciones al respecto.
INTRODUCCION

Son escasos trabajos que comparen el PIH con las estatinas en la
               lesión isquemia reperfusión hepática.


Comparamos dos modelos diferentes de protección frente LIR.

               Quirúrgico vs Farmacológico.
OBJETIVO


   Comparar el efecto de la Simvastatina con el del
preacondicionamiento isquémico hepático mediante una
       lesión por isquemia reperfusión hepática.
MATERIAL Y MÉTODO
• Estudio experimental prospectivo, aleatorizado y pareado.
• 24 ratas machos, de la cepa Wistar, de la misma edad y
  peso (entre 300 y 350 gr).
• Por protocolo marcado, se dividió a los animales en tres
  grupos: A (simvastatina) ,B (PIH) y C (control).
•
        MATERIAL Y MÉTODO
    Grupo A : Simvastatina.
     •   3 días 10 mg-kg de simvastatina , sonda orogástrica.
     •   30 minutos de isquemia total del hígado.
     •   Sobrevida de 24 hs.
     •   Hepatectomía y extracción de sangre para enzimograma hepático.

•   Grupo B : Preacondicionamiento.
      PIH: 5 minutos de isquemia y 5 minutos de reperfusión hepática.
     • 30 minutos de isquemia total del hígado.
     • Sobrevida de 24 hs.
     • Hepatectomía y extracción de sangre para enzimograma hepático.

•   Grupo C : Control.
     • 30 minutos de isquemia total del hígado.
     • Sobrevida de 24 hs.
     • Hepatectomía y extracción de sangre para enzimograma hepático.
MATERIAL Y MÉTODO
MATERIAL Y MÉTODO
MATERIAL Y MÉTODO
• Se seleccionaron los lóbulos medio izquierdo para hacer los
  estudios histológicos, en todos los grupos.
• Seleccionamos siempre el mismo cuadrante dentro de la lámina.
• Referencia: vena centrolobulillar.
• Número de hepatocitos alterados.
MATERIAL Y MÉTODO
  Variables Histológicas            Variables Humorales

• Núcleo:                           • Transaminasas hepáticas
       • Morfología alterada.
       • Bordes irregulares y
                                    • TGO y TGP
         festoneados.
       • Aumento del tamaño.           – Como parámetros de lesión
       • Cromatina desorganizada.        hepátocitica.
• Citoplasma:
       • Vacuolización.
       • Hiperclaridad.
       • Balonamiento.
• Histoarquitectura:
       • Desorganización peri
         vena centrolobulillar.
MATERIAL Y MÉTODO

0   Ausencia de Lesiones



1   Cambios Histológicos Leves       Área de LESION < 30%, del total del campo visual
                                     (aumento X10)


2   Cambios Histológicos Moderados   Área de LESION 30 – 70% del total del campo visual
                                     (aumento X10)


3   Cambios Histológicos Severos     Área de LESION > 70%, del total del campo visual
                                     (aumento X10)
RESULTADOS
                          HISTOARQ     NUCLEO       CITOPLAS.
A: Simvastatina
LEVE
                               3            4             5
MOD.
                               4            3             3
SEVERO
                               1            1             0
B: Preacondicionamiento   HISTOARQ     NUCLEO       CITOPLAS.
LEVE
                                   1            2             0
MOD.
                                   5            3             5
SEVERO
                                   2            3             3
CONTROL                   HISTOARQ     NUCLEO       CITOPLAS.
LEVE
                                   0            0             0
MOD.
                                   1            1             1
SEVERO
                                   7            7             7
RESULTADOS
Variables histológicas.
• Grupo (Simvastatina): Leves
   – 50% leves
   – 40% moderadas
   – 8% severas
• Grupo B (PI): Moderadas
   – 12% leves
   – 54% moderadas
   – 33% severas
• Grupo C: Severas          Con diferencias significativas para
   – 0% leves               todos los grupos entre ellos y con el
   – 12%moderadas           grupo control y para las 3 variables
   – 87%severas             p menor a 0.05

                                Test de Kruskal– Wallis.
Control




  Simvastatina   Preacondicionado
RESULTADOS
Grupo A:         GPT    GOT    Grupo B:   GPT    GOT
Simvastatina                   PI
                               Rata1      341    543
Rata1            265    525    Rata2      373    316
Rata2            160    685
                               Rata3      435    758
Rata3            253    545
                               Rata4      210    686
Rata4            130    497
                               Rata5      1469   688
Rata5            126    821
Rata6            115    559    Rata6      176    428
Rata7            114    821    Rata7      534    398
Rata8            115    559    Rata8      287    790

Grupo C:       GPT      GOT
Control
Rata1          401      721
Rata2          1087     847
Rata3          1432     1090
Rata4          460      1108
Rata5          455      658
Rata6          1079     1867
Rata7          2345     623
Rata8          1833     1095
RESULTADOS
• Variables humorales.

VariableTGP:
                           1200
• Grupo A : 159.8
                           1000
• Grupo B: 478.1
                            800
• Grupo C: 1136.5
                                                                TGP   .
p = 0.002.                  600
                                                                TGO

                            400

Variable TGO:               200

• Grupo A: 626.5
                              0
• Grupo B: 575.9                  Grupo A   Grupo B   Grupo C


• Grupo C: 1001.1
p = 0.008.
             Análisis de varianzas (ANOVA).
DISCUSION
• Comparamos dos formas de protección hepática frente a la LIR
  quirúrgica (PI) y la farmacológica (simvastatina).

• Seleccionamos la dosis de simvastatina, el tiempo de PI y de
  reperfusión en base a comunicaciones previas .

• Analizamos diferentes variables histológicas que son poco
  detalladas por otros autores .

• Agregamos al estudio histológico el análisis Humoral.
DISCUSION

• No esta del todo aclarado el efecto protector del
  preacondicionamiento isquémico ni de las estatinas a nivel
  hepático .

• Hemos comunicado el beneficio del PI en la fase de isquemia
  sin reperfusión , durante la LIR y estudiamos las estatinas en la
  LIR hepática.

• Son escasos los trabajos que comparen estos dos modelos de
  protección.
• Existe beneficio en la sumatoria de ambas estrategias?
CONCLUSIONES
   Luego de una LIR hepática de 30 minutos de isquemia y 24 horas de
   reperfusión en ratas:

• 1: La administración en el preoperatorio de Simvastatina vía oral por 3
  días, determino una reducción significativa de la lesión morfoestructural y
  de los parámetros humorales de lesión hepatocítica en comparación con el
  grupo control.

• 2: Un preacondicionamiento de 5 minutos de isquemia hepática y 5
  minutos de reperfusión determino una reducción significativa de la lesión
  morfoestructural y de los parámetros humorales de lesión hepátocitica en
  comparación con el grupo control.

• 3: La administración en el preoperatorio de Simvastatina vía oral por 3
  días, determino una reducción de la lesión morfoestructural
  significativamente mayor que el preacondicionamiento isquémico hepático.
1 CONGRESO ARGENTINO Y
LATINOAMERICANO DE CIRUGÍA
  HEPATO-PANCREATO-BILIAR




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congreso cirugia Argentino 2012 preacondicionamiento hepatico vs simvastatina, Dr Sanguinetti Juan

  • 1. 1 CONGRESO ARGENTINO Y LATINOAMERICANO DE CIRUGÍA HEPATO-PANCREATO-BILIAR Comparación del efecto protector de Preacondicionamiento isquémico hepático y Simvastatina en la lesión hepátocitica por isquemia reperfusión en ratas Estudio prospectivo, aleatorizado y ciego. Dr. Juan Manuel Sanguinetti, Dr. Diego Muguruza, Br. Valeria Mejias, Br. Diego Mainti ,Dr. Manuel Sanguinetii, Dr. Juan Cossa. Departamento Básico de Cirugía Facultad de Medicina. Prof. Dr. Gonzalo Fernández Naone Universidad de la República Montevideo - Uruguay
  • 2. INTRODUCCION LESION POR ISQUEMIA REPERFUSION (LIR): • En la isquemia se produce un estado proinflamatorio . • En la reperfusión se producen sustancias citotóxicas. Puede llevar a la necrosis celular o a la apoptosis. Existe una etapa temprana y otra tardía en la LIR. En diversos procedimientos el hígado es expuesto a la LIR.  Cirugía.  Shock.  Transplante.  Trauma.
  • 3. INTRODUCCION Estrategias de Protección : • Fármacos (corticoides, antioxidantes, anticuerpos anticitocinas, proteínas recombinantes,etc). • Terapias génicas. • Quirúrgicas. • Terapias basadas en el “Shock térmico”.
  • 4. INTRODUCCION • PREACONDICIONAMIENTO ISQUEMICO (PI). • Proceso en el cual se realizan episodios de isquemia reperfusión breves y repetitivos antes de una isquemia prolongada. Se ha estudiado su valor en diferentes órganos. A nivel hepático existen escasas publicaciones.
  • 5. INTRODUCCION • ESTATINAS. • Son poderosos hipolipemiantes . • Beneficios en la LIR dependen de la capacidad de preservar y mejorar la función endotelial. • Se ha comunicado que la simvastatina disminuye los niveles de : TNF alfa y de las transaminasas hepáticas durante la LIR. • Propiedades anti oxidantes . • Escasas comunicaciones al respecto.
  • 6. INTRODUCCION Son escasos trabajos que comparen el PIH con las estatinas en la lesión isquemia reperfusión hepática. Comparamos dos modelos diferentes de protección frente LIR. Quirúrgico vs Farmacológico.
  • 7. OBJETIVO Comparar el efecto de la Simvastatina con el del preacondicionamiento isquémico hepático mediante una lesión por isquemia reperfusión hepática.
  • 8. MATERIAL Y MÉTODO • Estudio experimental prospectivo, aleatorizado y pareado. • 24 ratas machos, de la cepa Wistar, de la misma edad y peso (entre 300 y 350 gr). • Por protocolo marcado, se dividió a los animales en tres grupos: A (simvastatina) ,B (PIH) y C (control).
  • 9. MATERIAL Y MÉTODO Grupo A : Simvastatina. • 3 días 10 mg-kg de simvastatina , sonda orogástrica. • 30 minutos de isquemia total del hígado. • Sobrevida de 24 hs. • Hepatectomía y extracción de sangre para enzimograma hepático. • Grupo B : Preacondicionamiento. PIH: 5 minutos de isquemia y 5 minutos de reperfusión hepática. • 30 minutos de isquemia total del hígado. • Sobrevida de 24 hs. • Hepatectomía y extracción de sangre para enzimograma hepático. • Grupo C : Control. • 30 minutos de isquemia total del hígado. • Sobrevida de 24 hs. • Hepatectomía y extracción de sangre para enzimograma hepático.
  • 12.
  • 13. MATERIAL Y MÉTODO • Se seleccionaron los lóbulos medio izquierdo para hacer los estudios histológicos, en todos los grupos. • Seleccionamos siempre el mismo cuadrante dentro de la lámina. • Referencia: vena centrolobulillar. • Número de hepatocitos alterados.
  • 14. MATERIAL Y MÉTODO Variables Histológicas Variables Humorales • Núcleo: • Transaminasas hepáticas • Morfología alterada. • Bordes irregulares y • TGO y TGP festoneados. • Aumento del tamaño. – Como parámetros de lesión • Cromatina desorganizada. hepátocitica. • Citoplasma: • Vacuolización. • Hiperclaridad. • Balonamiento. • Histoarquitectura: • Desorganización peri vena centrolobulillar.
  • 15. MATERIAL Y MÉTODO 0 Ausencia de Lesiones 1 Cambios Histológicos Leves Área de LESION < 30%, del total del campo visual (aumento X10) 2 Cambios Histológicos Moderados Área de LESION 30 – 70% del total del campo visual (aumento X10) 3 Cambios Histológicos Severos Área de LESION > 70%, del total del campo visual (aumento X10)
  • 16. RESULTADOS HISTOARQ NUCLEO CITOPLAS. A: Simvastatina LEVE 3 4 5 MOD. 4 3 3 SEVERO 1 1 0 B: Preacondicionamiento HISTOARQ NUCLEO CITOPLAS. LEVE 1 2 0 MOD. 5 3 5 SEVERO 2 3 3 CONTROL HISTOARQ NUCLEO CITOPLAS. LEVE 0 0 0 MOD. 1 1 1 SEVERO 7 7 7
  • 17. RESULTADOS Variables histológicas. • Grupo (Simvastatina): Leves – 50% leves – 40% moderadas – 8% severas • Grupo B (PI): Moderadas – 12% leves – 54% moderadas – 33% severas • Grupo C: Severas Con diferencias significativas para – 0% leves todos los grupos entre ellos y con el – 12%moderadas grupo control y para las 3 variables – 87%severas p menor a 0.05 Test de Kruskal– Wallis.
  • 18. Control Simvastatina Preacondicionado
  • 19. RESULTADOS Grupo A: GPT GOT Grupo B: GPT GOT Simvastatina PI Rata1 341 543 Rata1 265 525 Rata2 373 316 Rata2 160 685 Rata3 435 758 Rata3 253 545 Rata4 210 686 Rata4 130 497 Rata5 1469 688 Rata5 126 821 Rata6 115 559 Rata6 176 428 Rata7 114 821 Rata7 534 398 Rata8 115 559 Rata8 287 790 Grupo C: GPT GOT Control Rata1 401 721 Rata2 1087 847 Rata3 1432 1090 Rata4 460 1108 Rata5 455 658 Rata6 1079 1867 Rata7 2345 623 Rata8 1833 1095
  • 20. RESULTADOS • Variables humorales. VariableTGP: 1200 • Grupo A : 159.8 1000 • Grupo B: 478.1 800 • Grupo C: 1136.5 TGP . p = 0.002. 600 TGO 400 Variable TGO: 200 • Grupo A: 626.5 0 • Grupo B: 575.9 Grupo A Grupo B Grupo C • Grupo C: 1001.1 p = 0.008. Análisis de varianzas (ANOVA).
  • 21. DISCUSION • Comparamos dos formas de protección hepática frente a la LIR quirúrgica (PI) y la farmacológica (simvastatina). • Seleccionamos la dosis de simvastatina, el tiempo de PI y de reperfusión en base a comunicaciones previas . • Analizamos diferentes variables histológicas que son poco detalladas por otros autores . • Agregamos al estudio histológico el análisis Humoral.
  • 22. DISCUSION • No esta del todo aclarado el efecto protector del preacondicionamiento isquémico ni de las estatinas a nivel hepático . • Hemos comunicado el beneficio del PI en la fase de isquemia sin reperfusión , durante la LIR y estudiamos las estatinas en la LIR hepática. • Son escasos los trabajos que comparen estos dos modelos de protección. • Existe beneficio en la sumatoria de ambas estrategias?
  • 23. CONCLUSIONES Luego de una LIR hepática de 30 minutos de isquemia y 24 horas de reperfusión en ratas: • 1: La administración en el preoperatorio de Simvastatina vía oral por 3 días, determino una reducción significativa de la lesión morfoestructural y de los parámetros humorales de lesión hepatocítica en comparación con el grupo control. • 2: Un preacondicionamiento de 5 minutos de isquemia hepática y 5 minutos de reperfusión determino una reducción significativa de la lesión morfoestructural y de los parámetros humorales de lesión hepátocitica en comparación con el grupo control. • 3: La administración en el preoperatorio de Simvastatina vía oral por 3 días, determino una reducción de la lesión morfoestructural significativamente mayor que el preacondicionamiento isquémico hepático.
  • 24. 1 CONGRESO ARGENTINO Y LATINOAMERICANO DE CIRUGÍA HEPATO-PANCREATO-BILIAR Muchas Gracias