1. CROMATOGRAFIA EN RADIAL, CROMATOGRAFIA DE BANDA, SEPARACION DE
CATIONES
Carlos Álvarez Betin – José Beltrán Gonzales
Universidad de Sucre, Facultad de Educación y Ciencias, Departamento de
Biología, Línea Productos Naturales, Análisis Instrumental
Abstract
Paper chromatography is a technique of separation and identification of chemical
substances in which the stationary phase is absorbed water and adsorbed there on
paper (filter paper made from cellulose) and the support is the same role. The mobile
phase is a solution consisting of a solvent or a mixture of several liquids containing
water.
Keywords: Chromatography, solvents, Mobile phase.
Resumen
La cromatografía en papel es la técnica de separación e identificación de sustancias
químicas en la cual la fase estacionaria es el agua absorbida y adsorbida que hay en el
papel (papel filtro hecho de celulosa) y el soporte es el mismo papel. La fase móvil es
una solución que consiste en un disolvente o de una mezcla de varios líquidos que
contiene agua.
Palabras Claves: Cromatografía, disolventes, Fase móvil.
INTRODUCCION
La cromatografía es una técnica que
permite la separación de los
componentes de una mezcla debido a la
influencia de dos efectos contrapuestos.
Retención efecto producido sobre los
componentes de la mezcla por una fase
estacionaria, que puede ser un sólido o
un líquido anclado a un soporte sólido.
Desplazamiento con efecto ejercido
sobre los componentes de la mezcla por
una fase móvil, que puede ser un líquido
o un gas. El fenómeno de migración de
los componentes de una mezcla a lo
largo de la fase estacionaria, impulsados
por la fase móvil, recibe el nombre de
elución. La mezcla a separar se deposita
sobre la fase estacionaría, mientras que
la móvil atraviesa el sistema
desplazando a los componentes de la
mezcla a distinta velocidad,
dependiendo de la magnitud de sus
interacciones relativas con ambas fases.
Las dos fases se eligen de forma que los
componentes de la muestra se
distribuyan de modo distinto entre la
fase móvil y la fase estacionaria.
Aquellos componentes que son
fuertemente retenidos por la fase
estacionaria se mueven lentamente con
el flujo de la fase móvil; por el contrario
los componentes que se unen
2. débilmente a la fase estacionaria, se
mueven con rapidez. Como
consecuencia de la distinta movilidad,
los componentes de la muestra se
separan en bandas o zonas discretas que
pueden analizarse cualitativa y/o
cuantitativamente.
Hay varios factores de los cuales
depende una cromatografía eficaz: la
elección del disolvente y la del papel de
filtro. Con los objetivos de Separar los
componentes de una tinta a través de la
cromatografía en papel, separación
pigmentos de una hoja a través de la
cromatografía en papel y separar
cationes por cromatografía en papel.
PROCEDIMIENTOS
Cromatografia Radial:
Inicialmente se adiciono una gota de
una tinta en el centro de un papel filtro.
Luego en el centro del papel se hizo un
orificio en donde se colocó una mecha
del mismo material del papel, de modo
que una de las puntas quedara
impregnada dentro de una caja de petri
que contenía disolventes preparados a
diferentes concentraciones. Por otro
lado se macero una muestra de hoja
para adicionar una gota del extracto
obtenido y se sembró en el centro del
papel filtro. Luego se procedió como en
el caso anterior.
Separación de cationes
Se adiciono una gota de la muestra
(sales de níquel, cobre, hierro en violeta
de metilo) en el centro de un papel
filtro. Luego en el centro del papel se
hizo un orificio en donde se colocó una
mecha del mismo material del papel, de
modo que una de las puntas quedaran
impregnadas dentro de una caja de Petri
que contenía como fase móvil: etanol-
agua a concentraciones 7:3 y después
agregándole 1mL ácido clorhídrico
concentrado.
Después que la muestra hubo corrido se
continuo con la revelación, la cual se
hizo con dimetilglioxima, ferrocianuro
de potasio y amonio. Para la revelación
se impregnó algodón en los reveladores
y se frotó sobre el pedazo de papel filtro
anteriormente dividido.
Cromatografia de Banda
Un cartón cartulina con medidas 20x20,
se impregnaron puntos seguidos de la
tinta con el capilar y en dos cámaras se
adicionaran los solventes etanol-agua a
concentraciones 7:3 y etanol-agua 1:1
respectivamente. se dejó la muestra
hasta el dia siguiente hay para que
corriera la muestra adicionada en el
carton cartulina.
RESULTADOS Y DISCUSION
En lo referente a la separación de los
componentes de la tinta, se observó la
separación de tres colores entre los
cuales se destacaban el rojo, verde y el
azul, nombrándolos desde el centro del
papel hacia el borde, observaron todos
los colores que esperados tal como se
muestra en la siguiente imagen:
3. Imagen # 1: separación de los
componentes (colores presentes) en la
tinta
A medida que el etanol-agua en
concentración 7:3 va avanzando por el
papel filtro (medio poroso), arrastra
consigo los pigmentos que contiene la
mancha de tinta. Como no todos son
arrastrados a la misma velocidad, al
cabo de un tiempo se forman unas
franjas de colores que corresponden a
los componentes de la tinta
Siempre hemos pensado que las tintas
son de un solo color, pera la realidad es
muy distinta, ya que al observar los
resultados notamos que cada uno de los
colores está formado por una mezcla de
varios pigmentos diferentes.
Para el caso de la separación de los
pigmentos de la flor, las manchas en el
papel filtro eran poco visibles de tal
manera que los colores no se
diferenciaban.
Imagen # 2: separación de los
pigmentos flor. No se diferenciaron
correctamente.
Para el caso de la separación de los
pigmentos de la hoja, la separación no
se diferenció fácilmente, el fundamento
de este ensayo consiste en la separación
de los pigmentos por diferencia de
polaridades. Como en nuestro ensayo
utilizamos etanol-agua a concentración
7:3 que fue la que mostro mejor
resultado, el etanol y el agua arrastran
con un tiempo determinado esos
pigmentos polares. Un mismo color
puede estar dado por distintos tipos de
pigmentos, e incluso cambiar acorde a
las condiciones del entorno.
Separación de cationes
Con base a la separación de los cationes,
al instante de realizar la revelación con
dimetilglioxima, se observó un color
rojizo en la porción del papel.
4. Imagen # 3: revelación con
Dimetilglioxima
El fundamento de lo anterior se debe a
que la dimetilglioxima (DMG) forma
con el Ni2+ un precipitado rosa fuerte o
rojo.
Con dimetilglioxima, se produce un
complejo extraño por su estructura,
muy usado en la precipitación
del níquel. La dimetilglioxima, es un
ligando bidentado que origina un campo
fuerte, ya que al efecto característico de
los pares no ligantes del nitrógeno, se
une la acción de un doble enlace
próximo y un grupo hidroxilo , esto
provoca una estructura distorsionada,
por eso el complejo con la
dimetilglioxima es cuadrado. Como la
energía de desdoblamiento es bastante
grande, aproximadamente 2000 cm-1, el
color del complejo es rojo. Ver la
reacción siguiente.
Por otro lado, la revelación con
ferrocianuro de potasio permitió
identificar la presencia de hierro en la
cromatografía en papel, formándose un
color azul.
Imagen # 4: revelación con Ferrocianuro
de potasio
La revelación con ferrocianuro de
potasio se fundamente en la formación
de un complejo de color azul como se
muestra en la siguiente reacción
Para el caso de la revelación con
amonio, este debía permitir la
identificación de cobre en la
cromatografía con la formación de un
color azul. Pero de acuerdo a los
resultados obtenidos no fue así, lo cual
se muestra en la siguiente imagen:
Imagen # 5: revelación con amonio. No
se observa color
5. Aunque el resultado con amonio fue
negativo, el fundamento de esta
revelación se debe a que el catión cobre
en disolución acuosa, reacciona con el
amoniaco para dar un complejo de
intenso color azul cuya tonalidad
depende de la concentración de cobre
añadido.
Cromatografía De Banda
Imagen # 6: placa con iniciación de
corrida de muestra de tinta a
concentraciones 7:3 etanol-agua
Imagen #7: Cromatografía de banda
con tinta de impresora. Corrida total de
la placa
Se muestra la separación de la tinta por
medio de la técnica de cromatografía en
banda, separando los diferentes colores
que se combinaron en una sola muestra.
Esta separación se logra con el
fenómeno de capilar donde se distingue
los colores que se presentó en la capa,
logrando la separación de esta muestra.
CONCLUSIONES
La cromatografía en papel es una
técnica sencilla que permite realizar
análisis cualitativos, ya que pese a
no ser una técnica muy potente no
requiere de ningún tipo de
equipamiento. A través de la
cromatografía en papel se pudo
realizar la separación de los
componentes de la tinta trabajada,
como también la separación de
cationes de hierro presentes en una
mezcla. Para el caso de la separación
de los pigmentos de la hoja estos no
se observaron como se esperaba.
Para la separación de cationes,
tomando las pruebas específicas de
dimetilglioxima es utilizada para
revelar la presencia de cationes
níquel en una cromatografía de
papel. Entre tanto el ferrocianuro de
potasio revela la presencia de
cationes hierro y el amonio la
revelación del catión cobre. Por
último la cromatografía en banda es
efectiva para una separación de
muestra problemas y conocidas
donde se logra medir un tiempo
retención con eficaz exactitud.