La electroforesis es una técnica que permite separar moléculas biológicas como proteínas en función de su carga eléctrica mediante la aplicación de un campo eléctrico. Las partículas migran hacia el ánodo o cátodo dependiendo de su carga neta, tamaño y estructura. La velocidad de migración depende directamente de la carga de la partícula y el campo eléctrico, e inversamente de la fricción que experimenta en el medio.
Análisis de moléculas biológicas mediante electroforesis en geles de poliacrilamida
1.
2. Introducción
Mediante la electroforesis es posible separar
moléculas biológicas en dependencia
fundamentalmente de su carga bajo la
influencia de un campo eléctrico.
3. Fundamento
La electroforesis es la migración de solutos
iónicos bajo la influencia de un campo
eléctrico.
Estas partículas migran hacia el cátodo o
ánodo (electrodos - y +), en dependencia de
una combinación de su carga, peso
molecular y estructura tridimensional.
4. La velocidad de migración (v) de la
partícula es directamente proporcional
al producto de su carga efectiva (q) y el
gradiente de potencial eléctrico (E) e
inversamente proporcional al coeficiente
de fricción (f) relativo a la talla y forma
de la molécula, o sea, a la resistencia
que le ofrece el medio.
V = q E / f
6. 1. Tanque externo
2. Conectores tipo banana
3. Soporte para geles
4. Cuña
5. Tapa
6. Cables fijos
7.
8. PARTE FUNCION
Tanque externo Evita las fugas de líquido y las roturas. Es un
dispositivo duradero y transparente resistente a la
acción de agentes químicos y presión y
temperaturas elevadas
Tapa Presenta dos cables fijos de alimentación con
conector tipo banana para conectar a
La fuente de alimentación.
Soporte para geles El soporte incluye 2 cuñas de plástico para
asegurar una buena fijación de los geles y
electrodos de platino puro resistentes a la
corrosión y a elevadas temperaturas.
Dispositivo para preparación de geles Presenta una junta de silicona en la base,
proporcionando un perfecto sellado para evitar
fugas de poliacrilamida que constituyen un riesgo
tóxico para el usuario.
Placas de vidrio El equipo incluye 2 placas de
Vidrio planas con espaciadores fijos de 1.0 y 1.5
mm grosor para la preparación y electroforesis de
los geles.
Peines El equipo se suministra con un con-junto de 8
peines de 1.0 y 1.5 mm de grosor y
Con 10 ó 15 dientes
9. Ventajas Desventajas
Estables en un amplio rango de pH,
temperatura y fuerza iónica
Fácil de almacenar
Resistente a agentes
desnaturalizantes
Químicamente inerte de propiedades
uniformes
Puede ser preparado de forma rápida
y reproducible.
Geles transparentes con estabilidad
mecánica, insolubles en agua,
relativamente no iónicos y que
permiten buena visualización de las
bandas durante tiempo prolongado.
Variando la concentración de
polímeros, se puede
modificar de manera controlada el
tamaño del Poro
Toxicidad de los monómeros
Dificultades en manipulación
10. PAGE en condiciones no desnaturalizantes
No se altera la conformación nativa de las proteínas
separadas, por lo que finalizada la electroforesis, pueden
realizarse estudios de funcionalidad de dichas proteínas
separadas (actividad enzimática, capacidad de unión de
anticuerpos, unión a receptores, etc.).
Separa por carga y tamaño.
PAGE en condiciones desnaturalizantes
Utiliza agentes desnaturalizantes de proteínas, son la urea y
determinados detergentes. Estos afectan a la estructura
nativa de las proteínas y a las interacciones
con otras moléculas (proteínas, lípidos, etc.), ya que las
interacciones hidrofóbicas de las proteínas son sustituidas
por interacciones detergentes-proteína.
11. PAGE-SDS
Las proteínas se unen a moléculas de SDS
( dodecilsulfato sódico) por cada dos aminoácidos,
enmascarando o anulando las carga propio de la
proteína con cargas negativas.
Los complejos SDS-proteína están cargados
negativamente de forma uniforme.
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12. Bibliografía
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www.bionova.org.es/biocast/documentos/tema14.pdf
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