El documento proporciona información sobre pruebas de sensibilidad a antimicrobianos siguiendo las guías CLSI. Describe materiales, métodos de inoculación, lectura e interpretación de resultados. También incluye paneles de antimicrobianos recomendados para pruebas en varias bacterias como Haemophilus influenzae, Streptococcus pneumoniae, Enterococcus spp., Staphylococcus spp. y otras.

1. ANTIBIOGRAMA MSP Lilia E. Fragoso Morales May 29, 2009

2. Pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos CLSI Pruebas de susceptibilidad por el método de difusión con discos

3. Materiales Nefelómetro de Mac Farland 0.5 que equivale aproximadamente a 1x10 8 ufc/ml Agar de Mueller Hinton Caldo Mueller Hinton, caldo tripticasa de soya o solución salina Sensidiscos estandarizados producidos por el propio productor del antibiótico o de casas comerciales. Cepas Bacterianas ATCC Cultivos puros para aplicar las pruebas

4. Inoculación de las placas Antes de 15 min de haber ajustado la turbidez inocular las placas Tomar con el hisopo la muestra del tubo presionando en las paredes del tubo para eliminar el exceso Rotar el hisopo por la superficie del agar por lo menos tres veces para extender el inóculo, rotando la placa 60° Aplicar los discos entre 3 y 15 min después No deben estar más cerca de 24 mm de centro a cetro Aplicar los discos con una pinza estéril No aplicar más de 5 discos por placa de 100 mm de diámetro No mover los discos una vez que han hecho contacto con el medio Incubar por 18 a 24h y los EMR y los Enterococos resistentes a vancomicina por 6 a 8 hs más

5. Con la ayuda de una lámpara mida el diámetro con la ayuda de un Bernier En los medios opacos como MH suplementado con sangre remover la cubierta y leer con la lámpara arriba Leer la zona de inhibición y no confundir con la zona de inhibición de la hemólisis Cuando se emplee un método de prueba como H. influenza y N gonorrhoeae, reportar que se realizó por un proceso no estandarizado. S pneumoniae y otros estreptococos se prueban en AMH adicionado con sangre de carnero al 5% Lectura de las placas

6. Procedimiento para la dilución en Agar El caldo MH debe tener un pH entre 7.2 y 7.4 a 25°C Si se van a probar cepas para a resistencia a meticilina suplementar el agar con NaCl (4% w/v; 0.68 mol/L) y 6  g de oxacilina por ml Observar con luz la aparición de colonias pequeñas Reportar la resistencia como resistencia a todas las drogas beta lactámicas (incluyendo cefalosporinas e imipenem) y puede significar resistencia a otros agentes como aminoglycocidos, eritromicina, clindamicina y tetraciclinas

7. Cepas de referencia Enterococcus faecalis ATCC 29212 Escherichia coli ATCC 35218 Haemophilus influenza ATCC 49247 Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 Staphylococcus aureus ATCC 25923 Streptococcus pneumoniae ATCC 49619 El control de calidad debe hacerse cada vez que se inicie un nuevo lote de medio, discos, etc Si cualquier valor esta fuera de lo normal Cada inicio de semana Si los resultados son erróneos cada día hasta controlar la falla

8. Consideraciones importantes Los antibióticos beta lactámicos, imipenem y ácido clabulánico oxacilina son los más lábiles Los discos de los AB anteriores se mantienen inalterados una semana después de descongelarlos Antes de usar las placas de MH incubarlas a 37° durante un tiempo no mayor de 30´ Las placas de 100 mm de diámetro deben medir 4 mm de profundidad La sangre contiene timidina (excepto la de caballo), la cual interfiere con la prueba para SxT, por lo que hay que probar el medio con la cepa de Enterococcus faecalis ATCC29212. Una zona > de 20mm indica aceptabilidad

9. Interpretación Susceptible Intermedio Resistente

10. Programa de resistencia bacteriana en México. Paneles de antimicrobianos. Programa 2002 Haemophilus influenzae Nitrocefin 1ª elección Ampicilina Cloramfenicol SXT Eritromicina Levofloxacina Ampicilina/sulbactam 2ª elección Claritromicina Imipenem Ciprofloxacina Ceftriaxona

11. Programa de resistencia bacteriana en México. Paneles de antimicrobianos. Programa 2002 Streprococcus pneumoniae Cefotaxima Cloramfenicol Eritromicina Levofloxacino Oxacilina ( < 19 mm de inhibición reportar penicilino resistente) Tetraciclinas SXT Vancomicina

12. Programa de resistencia bacteriana en México. Paneles de antimicrobianos. Programa 2002 Enterococcus sp Ampicilina Ciprofloxacino Gentamicina 120 Linezolid Nitrofurantoina (Uro) Piperacilina/tazo Quinupristina Vancomicina 1ª elección Ampicilina Gentamicina Ciprofloxacina Nitrofurantoina Ampicilina/sulbactam 2ª elección Vancomicina Levofloxacino Teicoplanina B lactamasa

13. Programa de resistencia bacteriana en México. Paneles de antimicrobianos. Programa 2002 Staphylococcus spp Ciprofloxacino Clindamicina Eritromicina Gentamicina Linezolid Oxacilina Rifampicina SXT Vancomicina 1ª elección Oxacilina Eritromicina Gentamicina Clindamicina SXT Levofloxacino cefalotina 2ª elección Ciprofloxacina Vancomicina Amikacina Netilmicina Teicoplanina

14. Programa de resistencia bacteriana en México. Paneles de antimicrobianos. Programa 2002 Streptococcus pyogenes Ampicilina Azitromicina Cefotaxima Clindamicina Claritromicina Cloramfenicol Eritromicina Ofloxacino Tetracicinas SXT Vancomicina Streptococcus sp no neumococo 1ª elección Oxacilina Eritromicina Tetraciclina SXT Levofloxacina Clindamicina penicilina 2ª elección Vancomicina Cefotaxima ofloxacino

15. Programa de resistencia bacteriana en México. Paneles de antimicrobianos. Programa 2002 E. coli , Proteus sp y Morganella Amikacina Ampicilina Ampicilina/sulbactam Cefepime Ceftazidima Ceftriaxona Ciprofloxacino Gentamicina Imipenem Nitrofurantoína (uro) SXT Piperacilina Tazobactam 1ª elección Amikacina Ampicilina Amoxicilina clavulanato SXT Cefalotina Ciprofloxacina Nitrofurantoina 2ª elección Netilmicina Imipenem Levofloxacina cefepime Β lactamasas de espectro extendido son resistentes a penicilinas, cefalosporinas y aztreonam

16. Programa de resistencia bacteriana en México. Paneles de antimicrobianos. Programa 2002 Klebsiella , Enterobacter, Serratia, Citrobacter Amikacina Aztreonam Cefepime Ceftazidima Ceftriaxona Ciprofloxacino Gentamicina Imipenem Nitrofurantoína (uro) SXT Piperacilina/tazo 1ª elección Amikacina Ampicilina Amoxicilina clavulanato SXT Cefalotina Ciprofloxacina Nitrofurantoina 2ª elección Netilmicina Imipenem Levofloxacina cefepime Β lactamasas de espectro extendido son resistentes a penicilinas, cefalosporinas y aztreonam

17. Programa de resistencia bacteriana en México. Paneles de antimicrobianos. Programa 2002 Pseudomonas aeruginosa, Acinetobacter Amikacina Ampicilina/sulbactam Aztreonam Cefepime Ceftazidima Ciprofloxacino Gentamicina Imipenem Ticarcilina/clavulanato Trimetoprim/sulfametoxazol Piperacilina/tazo 1ª elección Amikacina Gentamicina Ceftazidima Aztreonam Ticarcilina/clav Ciprofloxacina Cefepime 2ª elección Piperacilina/tazo Imipenem Levofloxacina Ceftazidima IMIPENEM –ACINETOBACTER SXT- STENOTROPHOMONAS