El documento describe el proceso de fagocitosis llevado a cabo por células inmunes como neutrófilos y macrófagos. La fagocitosis involucra las etapas de quimiotaxis, adhesión, ingestión, digestión y exocitosis y es la forma más primitiva de defensa inmune. Las células fagocíticas secretan sustancias bactericidas que destruyen los patógenos fagocitados. La prueba de reducción del nitroazul de tetrazolio (NAT) mide la actividad bacter

1. Fagocitosis
INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL
ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
QUÍMICO BACTERIÓLOGO PARASITÓLOGO
DEPARTAMENTO DE INMUNOLOGÍA
PRÁCTICA No. 1

2. 1884, Elie Metchnikoff.
▶Premio nobel de medicina
▶Padre de la inmunidad celular
▶Descubrió y describió el fenómeno de la
fagocitosis
larvas bipinnaria de
estrellas de mar

3. INTRODUCCIÓN
La fagocitosis representa la forma más primitiva de defensa (respuesta inmune
natural), en el cual algunas células (neutrófilos, macrófagos, células dendríticas)
rodean con su membrana citoplasmática a un antígeno, una célula apoptótica,
restos celulares, microorganismos, cuerpos extraños y algunas sustancias para
ser eliminados, mediante la producción de agentes químicos y enzimáticos
(microbicidas).

4. CÉLULAS FAGOCITICAS
La fagocitosis se lleva a cabo en células especializadas.

5. NEUTRÓFILOS
Células fagocíticas profesionales de la sangre
Gránulos con sustancias bactericidas: hidrolasas, lisozimas, defensinas,
etc.
▶ FAGOCITOSIS: ingieren cualquier célula infecciosa
▶ NETOSIS: tienen la capacidad de producir redes compuestas por
proteínas intracelulares para atrapar patógenos
▶ DESGRANULACIÓN: libera moléculas citotóxicas antimicrobianas desde
unas vesículas secretoras (gránulos)
infecciones agudas y bacterianas, quemaduras, problemas cardíacos,

6. EOSINÓFILOS
GRÁNULOS:
▶ Proteína básica mayor que se tiñe con colorantes ácidos: eosina
▶ Proteína catiónica (ECP): citotóxica
▶ Peroxidasa de eosinófilos(EPO): Bactericida
*Desgranulación
Procesos parasitarios y alergias

7. BASÓFILO
La actividad de estas células está ligada a
la liberación de aminas vasoactivas, tales
como:
la histamina y la serotonina
Alergias/ inflamación aguda

8. MONOCITO/MACROFAGO
Circulan en sangre y al llegar a los tejidos se diferencian en macrófagos,
pero con estímulo adecuado se puede diferenciar a células dendríticas
▶ gránulos ricos en lisozima.
▶ PRESENTADORAS DE ANTÍGENO

9. SUSTANCIAS DE DEFENSA QUE SECRETAN
AL ACTIVARSE
▶ Enzimas: lisozima, hidrolasas, elastasa.
▶ Mediadores: IFN∝, IFNβ, GM-CSF, M-CSF, IL1, IL6, IL8, IL12, TNF∝, PAF,
TGFβ, NO.
▶ Componentes del C: C1-C9, properdina, factores B, D, I y H.
▶ Factores de coagulación: factores V, VII, IX y X, protrombina,
tromboplastina.
▶ Sustancias dependientes de O2(ROS): H2O2, 1O2, NO, O2-, OH-.

10. CÉLULAS DENDRÍTICAS
▶ Células presentadoras de antígeno derivadas de monocitos
▶ Presentes en los espacios intersticiales de los tejidos
▶ Pinocitosis: captación de material del espacio extracelular por invaginación
de la membrana citoplasmática.
▶ El antígeno lo llevan a los ganglios linfáticos y lo presentan para activar a
los linfocitos T

11. ETAPAS DE LA FAGOCITOSIS
▶ QUIMIOTAXIS
▶ ADHERENCIA
▶ INGESTIÓN
▶ DIGESTIÓN
▶ EXOCITOSIS

12. QUIMIOTAXIS
Las situaciones de infección o trauma, propician cambios en el microambiente
tisular que dan origen a la formación de compuestos exógenos (los derivados de
los microorganismos) como endógenos (los que resultan de las alteraciones
tisulares), con actividad quimiotáctica. Para que las células fagocíticas acudan a
los sitios de lesión.
son pequeñas moléculas que consisten en lípidos (prostaglandinas, leucotrienos y
tromboxano), aminoácidos modificados (histamina, serotonina) y pequeñas
proteínas (citocinas, complemento, interleucinas etc.)

14. marginación, rotación y adhesión al endotelio

15. OPSONIZACIÓN
Proceso por el cual se facilita la
fagocitosis de una sustancia extraña por
la deposición de proteínas llamadas
opsoninas como:
▶ anticuerpos (fundamentalmente IgG),
▶ componentes del complemento, y
algunas otras proteínas presentes en
el suero
▶ C3b

16. ADHERENCIA

17. INGESTIÓN

18. DIGESTIÓN
Una vez que el fagosoma está en el citoplasma esta se fusiona con los lisosomas y recibe la
descarga de los gránulos del fagocito.
El contenido preformado de estos gránulos, junto con sustancias producidas de novo,
constituyen los mecanismos encaminados a la muerte del patógeno. Estos mecanismos se
pueden clasificar en dos grandes tipos: dependientes e independientes de oxígeno.

19. Mecanismos dependientes de oxígeno
▶ Intermediarios reactivos de oxígeno (ROS).
La unión de partículas a los receptores de la membrana del fagosoma del
macrófago provoca el denominado estallido respiratorio (por activación de la ruta
de la hexosa monofosfato), que produce mucho NADH.
1.- reducción de oxígeno molecular (O2)
catalizada por la NADH-oxidasa.
2.-El anión superóxido resultante (·O-
2) →
peróxido de hidrógeno (vida corta) por superóxido
dismutasa (SOD)
3.-Formación de radicales libres oxidantes como
el radical hidroxilo (·OH) y el oxígeno singlete
(O1
2).
4.-Halógenos oxidados: ácido hipocloroso HOCl

20. Mecanismos dependientes de oxígeno
▶ Intermediarios reactivos de nitrógeno (NRS)
La enzima NOS (óxido nítrico-sintetasa) combina el oxígeno con el nitrógeno
guanidino de la L-arginina, para generar óxido nítrico (NO), que es tóxico
para bacterias y células tumorales.

21. REACCIONES INDEPENDIENTES DE OXÍGENO
Estos mecanismos dependen de proteínas antimicrobianas preformadas y acumuladas en los gránulos:

22. EXOCITOSIS
En el proceso de digestión queda una vesícula que contiene los desechos, o el
mismo antígeno (Dado que no siempre puede ser desintegrado). Entonces, la
forma de deshacerse de estos residuos es mediante la exocitosis.

23. NITROAZUL DE TETRAZOLIO (NAT)
oxidado -> reducido por metabolitos del estallido respiratorio

24. ENFERMEDAD GRANULOMATOSA
CRÓNICAEs una inmunodeficiencia primaria se caracteriza por un defecto de fagocitosis,
específicamente en el complejo enzimático de la NADPH oxidasa en la
producción de radicales libres en el estallido respiratorio.
Es causada por mutaciones en cualquiera de los
genes que codifican para las subunidades que
conforman la enzima

25. Los pacientes son susceptibles a infecciones recurrentes graves causadas por
bacterias, hongos y formación de granulomas en cualquier parte del organismo.
Estas infecciones son causadas fundamentalmente por: Staphylococcus aureus,
Burkholderia cepacia, Serratia marcescens, Nocardia, micobacterias y especies
de Aspergillus. Los órganos más afectados son: piel, tejido celular subcutáneo,
ganglios linfáticos, huesos, pulmones, bazo e hígado

26. Existen diversas técnicas de tamizaje para el diagnóstico, todas tienen en
común la medición de los radicales libres producidos por los neutrófilos. Las
técnicas más utilizadas en el laboratorio son la reducción de citocromo C,
quimioluminiscencia, reducción de nitroazul de tetrazolio (NBT)
El diagnóstico definitivo o molecular se realiza con la secuenciación directa de
los genes de las subunidades del complejo NADPH oxidasa, en los cuales se
detectan eliminaciones, inserciones o mutaciones puntuales.

27. OBJETIVO
▶Observar los fenómenos de adhesión,
opsonización, endocitosis y la reducción del
nitroazul de tetrazolio (NAT) derivada de los
mecanismos de destrucción oxidativos

28. MATERIALES
▶ Centrífuga refrigerada
▶ Incubadora ajustada a 37°C y 7% de CO2
▶ Microscopio óptico
▶ Porta Cubreobjetos para lavado
▶ Resina sintética
▶ Safranina
▶ 1L de solución salina al 0.85%
▶ 1 Matraz erlenmeyer
▶ 8 pipetas serológicas de diferentes volúmenes
▶ 7 tubos de ensaye
▶ 1 ml de suero humano fresco
▶ Charola con solución de hipoclorito

29. ▶ Papel absorbente
▶ Equipo para punción venosa
▶ 4 cajas de petri
▶ 1 frasco gerber
▶ 2 pipetas pasteur con bulbo de hule
▶ 1 gradilla
▶ 1 tubo de ensaye con tapa de rosca con 9 perlas de vidrio
▶ 2 ml de levaduras opsonizadas y 2 ml de levaduras sin opsonizar a una
concentración de 5x10^6 Levaduras/ml ambas
▶ 2 ml de NAT al 0.1% en SS
▶ 10 ml de medio minimo escencial (MEM) pH 6.8-7.0

30. MÉTODO
Cámara humeda