El documento presenta información sobre técnicas de diagnóstico de protozoos como la gota gruesa y tinción de Giemsa. Describe los ciclos vitales de parásitos como Leishmania y Plasmodium que causan enfermedades como la leishmaniasis y la malaria. Explica cómo estos parásitos se reproducen en huéspedes vertebrados e invertebrados a través de etapas como esporozoitos, trofozoitos y merozoitos.

1. UNIVERSIDAD CATÓLICA
SANTO TORIBIO DE MOGROVEJO
Facultad de Medicina
Escuela de Medicina
MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA
Práctica N°12
Reconocimiento morfológico de protozoos de localización en sangre y
tejidos. Técnicas de diagnóstico.
Jesús Alonso Custodio Marroquín
Código: 062ac03464
Ciclo 2009 – IV

2. Examen de Gota Gruesa
La toma de muestra se realiza mediante la punción con una lanceta estéril, normalmente en la yema del
dedo. Se recoge una gota de sangre en un portaobjetos y con otro se realiza la extensión en capa fina.
Para la gota gruesa se recogen 3 ó 4 gotas sobre un portaobjetos y con la esquina de otro se unen en
movimientos rápidos, extendiéndose en una capa gruesa y uniforme. La gota gruesa permite analizar
una mayor cantidad de sangre, facilitando la detección de parasitemias bajas y un ahorro de tiempo en
el examen, aunque al romperse los eritrocitos resulta difícil la identificación de especie.
Son muchas las tinciones que se aplican para el diagnóstico del paludismo, desde las convencionales de
Giemsa, May-Grünwald-Giemsa, Field y Leishman hasta las fluroescentes con naranja de acridina o el
sistema QBC.
La tinción de Giemsa es la técnica diagnóstica de referencia. Este colorante sirve tanto para la gota
gruesa como para el frotis. La necesidad de emplear agua tamponada a pH 7,2 (tanto en la dilución del
colorante como en los lavados) se debe a que, con otro pH, puede verse alterada la morfología del
parásito, impidiendo la observación de las granulaciones de Schüffner, tan importantes para la
diferenciación de la especie.
Esta tinción tiene buena sensibilidad (92-98%) y especificidad (85-99%). 1
Estos organismos adquieren una coloración diferencial y se ven dentro del citoplasma de la célula
huésped. La técnica de Giemsa está formada por varios colorantes: los tintes neutros utilizados
combinan el azul de metileno como tinte básico y la eosina como tinte ácido, lo que da una amplia
gama de colores. El azul de metileno es un colorante metacromático, de ahí que muchas estructuras se
tiñan de púrpura y no de azul. El pH de la solución de coloración es crítico y se debe ajustar idealmente
según diversos fijadores.2
Resultados de la coloración:
1. Citoplasma: rosa
2. Núcleos: azul
3. Eritrocitos: rojo
4. Gránulos de las células cebadas: púrpura
5. Bacterias: azul
6. Parásitos: azul

3. UTA
La Leishmaniasis o UTA es un enfermedad producida por un protozoo parásito con presencia en
América Latina, Asia, África y Europa; afecta fundamentalmente a vertebrados como el perro, (zorro,
ratas, etc.) - a los que se denomina Reservorios y solo secundariamente al hombre.
La Leishmaniasis o UTA es transmitida por picaduras de los flebótamos, pequeñas moscas de 2 a 3 mm
con el cuerpo y alas cubiertas de pelos. Abundan todo el año en las zonas tropicales y en verano en
zonas templadas. Así mismo se encuentran en las pendientes andinas hasta 2885 mts. Sobre el Nivel
del Mar.
La UTA se presenta en las laderas occidentales de los valles andinos e interandinos, entre 800 y 3000m
de altitud.
La incidencia varía con la latitud, y no se han registrado casos de UTA por debajo de los 13 grados de
latitud sur.
En esa zona la población se ocupa principalmente de la agricultura, y la UTA se asocia con las
actividades rurales.
La prevalencia es muy elevada. La mayor parte de los casos se manifiestan en niños, y más del 80% de
la población adulta presenta cicatrices.
El parásito, L.peruviana., aún se considera una especia distinta, pero tiene el patrón de isoenzimas muy
similar a la cepa de regencia de la OMS de L. braziliensis.3
En el Perú se han identificado cinco especies de
leishmania:
1) Leishmania (V) brasiliensis;
2) Leishmania (V) guyanensis;
3) Leishmania (V) peruviana;
4) Leishmania (V) lainsoni;
5) Leishmania (L) amazonensis.
En la amazonía se reconocen tres especies como
agentes causantes de leishmaniasis llamada
también leishmaniasis selvática o espundia: L.
amazonensis, L. guyanensis y L. brasiliensis.
Entre los 600 y 2 000 m.s.n.m (Ayacucho, Pasco,
San Martín, Huánuco) se ha reportado la presencia
de L. lainsoni. La forma cutánea andina, llamada
UTA, es causada por la L. (V) peruviana, que se
desarrolla entre los 600 y 3 000 m.s.n.m.

4. LEISHMANIA
Leishmania es un género de protistas responsable de la enfermedad conocida como leishmaniasis,1 o
más correctamente según la SNOAPAD, leishmaniosis. El principal vector de infección son los
mosquitos de los géneros Phlebotomus (en el viejo mundo) y Lutzomyia (en América). Sus víctimas son
vertebrados: la leishmaniosis afecta a marsupiales, cánidos, roedores y primates. Se estima que unos 12
millones de personas padecen leishmaniosis hoy en día.
Morfología
Los especímenes de Leishmania muestran dos morfologías durante su ciclo vital:
• Promastigote, alargada con un cilio o flagelo anterior, en el intestino del invertebrado vector.
• Amastigote, esférica y con un cilio muy corto, que no sobresale de la bolsa flagelar, de modo
que sólo es apreciable en el microscopio electrónico, que se reproduce dentro de macrófagos y
células del sistema retículoendotelial del huésped vertebrado. Las infecciones se producen en
la piel (cutáneas), piel y mucosas (mucocutáneas) o en los órganos (viscerales).
Ciclo Vital
• Etapas en el ser humano. La
leishmaniasis es transmitida
por la picadura de un insecto
hematófago. El insecto
inyecta en la sangre la forma
infecciosa, los promastigotes
Los promastigotes son
fagocitados por los
macrófagos (2) y se
transforman en amastigotes
(3). Estos se multiplican en las
células infectadas y afectan a
distintos tejidos, dependiendo
en parte de la especie de
Leishmania (4). Esto origina
las manifestaciones clínicas de
la leishmaniasis.
• Etapas en el insecto. El insecto se infecta al ingerir sangre con macrófagos infectados por
amastigotes (5, 6). En el intestino del insecto, los parásitos se diferencias en promastigotes (7),
que se multiplican y migran a la probóscide (8). Si el insecto realiza otra picadura, los
amastigotes pasan a la sangre del huésped (1), completándose el ciclo.

5. PLASMODIUM
Plasmodium es un género de protistas del filo Apicomplexa, clase Aconoidasida, orden Haemosporida y
familia Plasmodiidae del que se conocen más de 175 especies.1 El parásito siempre tiene dos huéspedes
en su ciclo vital: un mosquito que actúa como vector y un huésped vertebrado. Al menos diez especies
infectan al hombre. Para humanos hay cuatro especies de Plasmodium que provocan la malaria o
paludismo: P. falciparum, P. malariae, P. ovale y P. vivax, de las cuales la primera es la más virulenta y la
que produce la mayor mortalidad. Otras especies infectan a otros animales, incluyendo aves, reptiles y
roedores.
En el ciclo del Plasmodium existe un agente vector (la hembra de un mosquito), donde el Plasmodium se
reproduce sexualmente y un hospedador vertebrado intermediario (el ser humano u otro animal). La
siguiente explicación puede seguirse en la figura de abajo.
• Etapas exo-eritrocíticas o hepáticas (A en la figura). Tras la picadura del mosquito, éste inocula
el parásito existente en su saliva en la sangre o en el sistema linfático2 del huésped (1). En ese
momento, el Plasmodium se encuentra en la fase de su ciclo conocida como esporozoito. Los
esporozoitos pasan al torrente sanguíneo hasta que llegan a los hepatocitos del hígado (2). Allí
se multiplican por esquizogénesis (disgregación) formando el esquizonte hepático (3), tras lo
cual se rompe el hepatocito, apareciendo un nuevo estadio del Plasmodium, el merozoito (4).
Aquí hay un primer ciclo asexual, en el que los merozoitos pueden o bien reinfectar
hepatocitos o bien volver de nuevo al torrente sanguíneo, donde penetran en los eritrocitos.
• Etapas eritrocíticas o sanguíneas (B). En los eritrocitos, los merozoitos comienzan a alimentarse
de la parte proteica de la hemoglobina contenida en éstos, apareciendo entonces el trofozoíto
(5). Nuevamente por esquizogénesis se multiplica en el interior de dichas células, formándose
el esquizonte hemático. También se rompe la célula, en este caso el eritrocito, liberando
nuevos merozoitos (6). La mayoría de los merozoitos continúan con este ciclo replicativo
infectando nuevos eritrocitos, pero algunos se convierten en gametocitos, masculinos y
femeninos (7).

6. • Etapas en el mosquito (C). Si el individuo infectado es nuevamente picado por un mosquito, los
gametocitos masculinos y femeninos pasan al mosquito (8). En el interior de éste se
diferencian en gametos (4-8 microgametos por cada gametocito masculino y una
macrogameta por cada gametocito femenino) y al fusionarse ambos gametos, se producen los
zigotos (9). Los zigotos, a su vez, se convierten en oocinetos móviles y alargados (10), que
invaden la pared intestinal del mosquito, donde se desarrollan en ooquistes (11). Los ooquistes
crecen, se rompen y liberan una nueva generación de esporozoitos (12), que hacen su camino a
la glándulas salivares del mosquito. Es en esta fase en la que el Plasmodium puede volver a ser
inyectado en el huéped.
PLASMODIUM MALARIAE
Plasmodium malariae es un protozoario parásito que causa malaria en humanos y perros. Está
cercanamente relacionado con Plasmodium falciparum y Plasmodium vivax que son responsables por la
mayoría de las infestaciones. Se le llama «malaria benigna» por no ser tan peligrosa como las entidades
producidas por P. falciparum o P. vivax. P. malariae causa fiebres que recurren en intérvalos de
aproximadamente tres días, más de dos días más que las otras especies del parásito.
Características
Microscópicamente, los glóbulos rojos parasitados nunca se ven agrandados y pueden a veces aparecer
más pequeños que los glóbulos rojos normales. El citoplasma no se descoloran ni aparecen
granulaciones sobre sus superficies. La vacuola alimenticia es pequeña y el parásito se nota compacto.
El parásito forma una gruesa banda a lo ancho de la célula infectada, lo que caracteriza a la especie de
las demás, aunque se argumenta que sean características diagnósticas. Dentro del parásito se puede
observar grandes puntos de pigmento, más prominentes que los demás Plasmodium.4

7. V. CUESTIONARIO
¿Qué protozoarios parásitos de la sangre pueden causar la muerte, aparte de Plasmodium?
CARACTERÍSTICAS GENERALES DE LAS PRINCIPALES HEMOS PARASITOSUS DEL
HOMBRE
PARASITOSIS AGENTES FORMAS INFECTANTES MECANISMO DE
PARA EL HOMBRE INFECCIÓN
PROTOZOOS
Malaria Plasmodium spp. Esporozoítos Picadura de Anopheles,
transfusiones,
trasmisión congénita.
Leishmaniosis Leishmania spp. Promastigotos Picaduras de
flebótomos.
Enf. De Chagas Tripanosoma cruzi Tripomastigoto Deyecciones de
triatominos,
transmisión congénita,
transplantes.
Enf. Del Sueño Trypanosoma brucei Tripomastigoto Picadura de moscas
(Glossina sp)
Toxoplasmosis Toxoplasma gondii Ooquistes, quistes, Heces de gato, carnes,
zoítos transmisión congénita,
transfusiones en
inmunocomprometidos.
Babesiosis o Babesia spp. Merozoítos Picadura de garrapatas.
Piroplasmosis

8. VI. CONCLUSIONES
• En el Perú se han identificado cinco especies de leishmania:
1) Leishmania (V) brasiliensis;
2) Leishmania (V) guyanensis;
3) Leishmania (V) peruviana;
4) Leishmania (V) lainsoni;
5) Leishmania (L) amazonensis.
• La UTA se presenta en las laderas occidentales de los valles andinos e interandinos, entre 800 y
3000m de altitud.
VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:
1. Turrientes C,López-Vélez R. Aspectos prácticos del diagnóstico de laboratorio y profilaxis de la
malaria [Sede Web] España: Unidad de Medicina Tropical y Parasitología Clínica. Hospital
Ramón y Cajal –Madrid; 2006 – [acceso el 21 de noviembre de 2009]. Disponible en:
http://www.seimc.org/control/revi_para/malaria.htm
2. Wikipedia.org. Tinción de Giemsa [Sede Web]. España: Wikipedia.org; 2009- [actualizado el 28
de agosto de 2009; acceso el 21 de noviembre de 2009]. Disponible
http://es.wikipedia.org/wiki/Tinci%C3%B3n_de_Giemsa
3. Atías A. Parasitología Médica.1ed. Chile: Editorial Mediterráneo; 2000.
4. Wikipedia.org. Plasmodium [Sede Web]. España: Wikipedia.org; 2009- [actualizado el 28 de
agosto de 2009; acceso el 21 de noviembre de 2009]. Disponible
http://es.wikipedia.org/wiki/Plasmodium