Este documento proporciona instrucciones para operar adecuadamente el detector DAD del equipo HPLC 1200 para garantizar la calidad de los análisis. Describe cómo configurar el detector DAD para monitorear múltiples longitudes de onda, enviar muestras de prueba, y visualizar y editar las señales en línea del detector. El objetivo es asegurar un funcionamiento correcto del detector DAD para obtener resultados precisos de los análisis realizados en el equipo HPLC 1200.
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pruebas bioquimicas para microorganismos capaces de utlizar la via anaerobia, fermentativa y utilizar los carbohidratos para ese fin, y la utilizaion de acidos organicos.
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1. 1. OBJETIVO:
Operar de forma adecuada el detector del equipo HPLC 1200 DAD, para garantizar la
calidad de los resultados de los análisis que en el se realicen.
2. ALCANCE:
2.1. Equipo HPLC 1100 DAD
2.2. Equipos HPLC 1200 DAD.
2.3. Equipos HPLC 1200 DAD-RID.
3. OBSERVACIONES PRELIMINARES:
3.1 El analista debe estar provisto de los EPP’s necesarios de acuerdo al tipo
solvente a usar.
3.2 Verificar que los cuatro canales cuenten con su filtro de entrada de solvente,
nunca los utilice sin filtro, pues se puede generar obstrucciones en el equipo.
3.3 Verificar que no existan burbujas de aire en los canales, si lo hubiese,
eliminarlos mediante la purga de todos los canales.
3.4 Los disolventes y fases móviles siempre se deben filtrar a través de filtros de
0,45 μm, ya que las partículas pequeñas pueden bloquear permanentemente los
capilares y las válvulas.
3.5 Cambiar los solventes cada dos días o vuelva a filtrarlos (filtro de 0,45 μm). En
caso del agua filtrarla y cambiarla diariamente.
3.6 Verificar que no existan obstrucciones en ninguna parte del equipo.
3.7 Compruebe regularmente las fritas de la válvula de purga. Se puede identificar
una frita bloqueada por la existencia de capas negras o amarillas en su
superficie o de una presión mayor de 10 Bares, cuando se bombee agua a una
velocidad de 5 ml/min con la válvula de purga abierta. Si es necesario considerar
el cambio de frita.
3.8 Asegurar que la cantidad de fase móvil sea la suficiente para terminar con el
análisis.
3.9 Asegurar que el recipiente de desechos sea de capacidad suficiente para
contener los desechos del producto en análisis, purga y lavado.
3.10 No deje nunca la fase móvil en el instrumento durante varios días sin flujo. En
caso de no usar el equipo por más de 2 días, purgar todos los canales con agua
por 10 minutos, luego con metanol grado HPLC y finalmente con una mezcla
80:20 de Metanol y Agua, para evitar la proliferación de microorganismos en el
equipo.
3.11 Para operar de forma general el equipo HPLC 1200 DAD, debemos referirnos al
POE XXXX: Procedimiento de Operación de los equipos HPLC 1200 de longitud
de onda variable.
3.12 Este instructivo se refiere específicamente al manejo del detector de arreglo de
diodos (DAD) de los equipos HPLC de la serie 1200.
4. INSTRUCCIONES
2. 4.1. Uso de la Ventana DAD Signal:
4.1.1. En la ventana de dialogo de parámetros de detección, aparecerá la
siguiente imagen:
Se puede acceder a ella también desde el Instrument: Set up DAD Signal, o
por lo general desde Method: Edit Entire Method, durante la creación del
mismo.
4.1.2. Pueden seleccionarse hasta 5 longitudes de onda de prueba, realizando
un check en las casillas de Store de la parte superior izquierda de la
ventana de dialogo.
4.1.3. En la casilla Sample, se deben colocar las longitudes de onda en prueba,
con la cual la absorbancia de la muestra es medida como función del
tiempo. Los límites de medición son de 191 hasta 949 nm.
4.1.4. La siguiente casilla: Bw (Bandwidth) se coloca el ancho de banda, por
ejemplo si se trabaja a una longitud de onda de 254 nm, y se coloca un
ancho de banda de 20 nm, la medida de la absorbancia se realizará en el
rango de 244 a 264 nm.
4.1.5. Colocar en la siguiente casilla (Reference) la longitud de onda de
referencia y su respectivo ancho de banda, esto permitirá compensar las
fluctuaciones en la señal causadas por ejemplo por cambios en la
composición de los solventes durante un gradiente de elución.
4.1.6. En la casilla de Store, seleccionar All, para usar todas las longitudes de
onda de prueba previamente colocadas en la tabla Signal.
4.2. Envío de una corrida de prueba:
4.2.1. Seleccionar el icono de vial individual en la ventana principal
Method & Run Control.
3. 4.2.2. Seleccionar RunControl : Sample Info… en la barra de herramientas, y
colocar los datos correspondientes a la corrida de prueba:
4.2.3. En Operator Name, colocar el nombre (s) del (los) operador (es), activar
Prefix/Counter, colocar el numero de subdirectorio (correspondiente al
mes y día en que se realiza el análisis), colocar el Filename (que para los
análisis de producto terminado, materia prima y estabilidad se ha
designado como PRUEBA).
4.2.4. Colocar en Location, la ubicación del vial en prueba y en Sample Name
el nombre que le vamos a asignar, este debe ser: Nombre del principio
activo, seguido de ST si se trata del estándar y Mp si se trata de muestra,
finalmente se coloca el tipo de análisis: Dis (disolución), Val (Valoración),
Uc (Uniformidad), CR o SR (Compuestos relacionados o sustancias
relacionadas) según se trate.
4.2.5. Si fuese necesario destacar algún detalle en particular o alguna
observación, esta se puede colocar en la casilla de Comment, ubicada en
la parte inferior de la ventana Sample Info, arriba mostrada.
4.2.6. Enviar la corrida de prueba en Run Method.
4.3. Edición del Signal Plot (Grafico de la Señal):
4.3.1. Cuando se trabaja con el detector DAD es posible observar online la señal
emitida por cada una de las longitudes de onda de trabajo; para ello en la
barra de herramientas seleccionar: View: Online Signal, aparecerán las
siguientes ventanas:
Click aquí, luego Change
4. 4.3.2. Seleccionar las longitudes de onda de trabajo en el cuadro: Available
Signal, y adicionar al cuadro Selected Signals, usando el boton Add:
4.3.3. Se pueden incluir además en el Online Plot, las señales del flujo, la
presión y los cambios en la composición de la Fase Móvil.
4.3.4. Para quitar las señales del display, proceder en sentido inverso al paso
4.3.2,es decir seleccionar las señales del Selected Signals, pasarlas al
Available Signals, usando el botón Remove.
4.3.5. Para observar en el display la (s) señal (es) seleccionada (s), presionar el
botón Adjust: