Este documento presenta las prácticas de microbiología a realizar. La Práctica 1 incluye tinción de microorganismos, medios de cultivo y antibiograma. La Práctica 2 contiene pruebas de identificación de cocos Gram positivos y bacilos Gram negativos. La Práctica 3 cubre técnicas micrológicas, medios de cultivo para hongos y levaduras, y parasitología. Cada práctica detalla los materiales y procedimientos requeridos para completar las tareas asignadas.

2. ÍNDICE
•PRÁCTICA 1: PÁGINA 3
• TINCIÓN DE MICRORGANISMOS: PÁGINA 4
• MEDIOS DE CULTIVO: PÁGINA 9
• TAREAS: PÁGINA 13
•PRÁCTICA 2: PÁGINA 17
• IDENTIFICACIÓN DE COCOS GRAM +: PÁGINA 18
• IDENTIFICACIÓN DE BACILOS GRAM -: PÁGINA 22
• TAREAS: PÁGINA 26
•PRÁCTICA 3: PÁGINA 29
• TÉCNICAS MICOLÓGICAS: PÁGINA 30
• TAREAS: PÁGINA 37
• PARASITOLOGÍA: PÁGINA 40

3. PRÁCTICA 1
•TINCIÓN DE MICROORGANISMOS
•MEDIOS DE CULTIVO. ESTERILIZACIÓN. SIEMBRA DE
MICROORGANISMOS Y ANTIBIOGRAMA

4. TINCIÓN DE
MICROORGANISMOS
¿Staphylococcus aureus? ¿Escherichia coli? ¿Levadura?

5. MATERIALES
• MECHERO
• ASA DE CULTIVO
• PLACAS CON LOS MICROORGANISMOS –
• PORTAOBJETOS
• JERINGUILLA CON SOLUCIÓN SALINA
• AGUA DESTILADA
• ACEITE DE INMERSIÓN.
• PUENTES DE VIDRIO
• TINTES ESPECÍFICOS DE CADA TINCIÓN: VIOLETA
DE GENCIANA, FUCSINA, CARBOL
• FUCSINA
• ALCOHOL:ACETONA; ALCOHOL-HCL
• LUGOL
• PLACA PARA RECOGER EL COLORANTE
• PINZAS

7. PROCEDIMIENTO
LA TINCIÓN DE GRAM ES LA TÉCNICA DE REFERENCIA A LA HORA DE
DIFERENCIAR ENTRE BACTERIAS CON PARED GRAM + Y -. A CONTINUACIÓN
EXPLICO LOS PASOS A SEGUIR:
• FIJAR LA MUESTRA Y TEÑIRLA CON VIOLETA DE GENCIANA
• AÑADIR AGUA DURANTE 1 MINUTO
• AÑADIR LUGOL (FIJA Y POTENCIA EL VIOLETA DE GENCIANA)
• AÑADIR AGUA OTRO MINUTO
• DECOLORAR CON ALCOHOL-ACETONA (GRAM – PERDERÁN COLOR)
• AÑADIR AGUA OTRO MINUTO
• TEÑIR CON FUCSINA (LE OTORGA COLOR A GRAM -)

9. MEDIOS DE CULTIVO

10. MATERIALES
• PLACAS PETRI CON AGAR-MACCONKEY
• PLACAS PETRI CON AGAR-MACCONKEY
• BACTERIAS
• DISCOS ANTIBIÓTICOS
• PINZAS
• MECHERO BUNSEN
• ASA DE CULTIVO
• ROTULADOR.
• MEDIO LÍQUIDO

11. PROCEDIMIENTO
PRIMERAMENTE PROCEDIMOS A REALIZAR DOS TIPOS DIFERENTES DE SIEMBRA. TODO ESTO PRECEDIDO POR LA
ESTERILIZACIÓN DEL ASA DE CULTIVO EN UN MECHERO BUNSEN:
• SIEMBRA POR ESTRÍAS EN MACCONKEY: SEMBRAMOS COLONIAS AISLADAS DE BACTERIAS CON EL HISOPO DEL ASA.
REALIZAMOS MOVIMIENTOS EN DIAGONAL SOBRE UN CUADRANTE Y, POSTERIORMENTE, PASAMOS AL SIGUIENTE
CUADRANTE DE LA PLACA. POR CADA SIEMBRA IREMOS ESTERILIZANDO EL HISOPO, PARA UN TOTAL DE 4 VECES.
• SIEMBRA MASIVA EN MUELLER-HITON: SEMBRAMOS UNA MUESTRA INICIAL DE INÓCULO POR TODA LA PLACA
DESDE 4 ZONAS DE LA PLACA, PERO SIN TENER QUE VOLVER A ESTERILIZAR (CON LA MUESTRA INICIAL ES
SUFICIENTE).

12. PROCEDIMIENTO
• EN LA PLACA DE SIEMBRA POR ESTRÍAS DEPOSITAMOS UN
DISCO DE ANTIBIÓTICO (GENTAMICINA, AZITROMICINA, …)
POR CADA COLONIA PARA DETECTAR RESISTENCIAS AL TTO.
• CON UN ASA ESPECIAL PARA MEDIO LÍQUIDO CULTIVAMOS LAS
BACTERIAS EN LOS TUBOS SIN QUE EL HISOPO CONTACTE CON
LA PARED DEL TUBO

13. TAREAS

14. •1- NOMBRAR 5 MICROORGANISMOS GRAM + Y 5
MICROORGANISMOS GRAM –
•2- NOMBRAR Y EXPLICAR EL FUNDAMENTO DE 5 MEDIOS DE
CULTIVOS SELECTIVOS PARA DIFERENTES MICROORGANISMOS.

15. •GRAM +: STAPHYLOCCOCUS AUREUS, STREPTOCCOCUS PYOGENES,
STREPTOCCOCUS PNEUMONIAE, BACILLUS ANTHRACIS, CLOSTRIDIUM
•GRAM -: ESCHERICHIA COLI, MORAXELLA CATARRHALIS,
HELICOBACTER PYLORI, LEGIONELLA PNEUMOPHILA, SALMONELLA
TYPHI

16. -MEDIOS DE CULTIVO:
•AGAR MACCONKEY (SELECTIVO PARA BACTERIAS GRAM NEGATIVAS. DIFERENCIAL
PARA LAS ESPECIES QUE FERMENTAN LA LACTOSA)
•AGAR SAL MANITOL (SELECTIVO PARA LOS ESTAFILOCOCOS. DIFERENCIAL PARA S.
AUREUS)
•AGAR XLD (SELECTIVO PARA SALMONELLA Y SHIGELLA EN CULTIVOS ENTÉRICOS Y
DIFERENCIAL ENTRE ELLAS)
•AGAR LOWENSTEIN-JENSEN (MEDIO SELECTIVO PARA FACILITAR EL CRECIMIENTO DE
MICOBACTERIAS, SOBRE TODO MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS)
•CHROMAGAR (SELECTIVO Y DIFERENCIAL PARA LAS LEVADURAS).

17. PRÁCTICA 2
•PRUEBAS DE IDENTIFICACION DE COCOS GRAM POSITIVO
•PRUEBAS DE IDENTIFICACION DE BACILOS GRAM
NEGATIVOS. ENTEROBACTERIAS

18. PRUEBAS DE IDENTIFICACION
DE COCOS GRAM POSITIVO

19. MATERIALES
• PLACAS SEMBRADAS CON ESTREPTOCOCOS (OPTOQUINA) Y
ESTAFILOCOCOS
• OF MÉDIUM (TUBOS)
• GLICEROL
• AGUA OXIGENADA (PARA PRUEBA DE LA CATALASA
• AGAR SANGRE (PARA STREPTOCOCCUS)
• CHAPMAN /AGAR MANITOL SALADO (PARA STAPHYLOCOCCUS)
• PORTAOBJETOS
• ASAS DE SIEMBRA Y PICADURA
• PINZAS
• DISCOS OPTOQUINA

20. PROCEDIMIENTO
• EN ESTA PRÁCTICA REALIZAMOS EN PRIMER LUGAR LA PRUEBA DE LA CATALASA + EN UN PORTA PARA UNA CEPA
DE STAPHYLOCOCCUS, RESULTANDO POSITIVA (AUREUS). PARA ELLO VERTÍAMOS SOBRE EL PORTA UNA GOTA DE
AGUA OXIGENADA
• DESPUÉS LO COGIMOS Y SEMBRAMOS EN DOS TUBOS CON GLUCOSA, AÑADIENDO A UNO DE ELLOS MANITOL
PARA COMPROBAR SI EL METABOLISMO SE DESARROLLA CORRECTAMENTE TANTO EN MEDIO AEROBIO COMO
ANAEROBIO (DEBERÍAN DE TEÑIRSE LOS DOS TUBOS DE AMARILLO: FERMENTA Y OXIDA LA GLUCOSA)
• SEGUIDAMENTE, HICIMOS UNA SIEMBRA POR ESTRÍA DE LA MISMA CEPA EN UNA PLACA DE CHAPMAN MANITOL

21. Catalasa +
Tubos con glucosa delante
Siembra por estrías

22. PRUEBAS DE IDENTIFICACION DE
BACILOS GRAM NEGATIVOS.
ENTEROBACTERIAS

23. MATERIALES
• PLACAS DE MCCONKEY SEMBRADAS CON
ENTEROBACTERIAS
• TUBOS PARA PRUEBA DE MALONATO
• TUBOS PARA PRUEBA DE CITRATO
• TUBOS PARA PRUEBA DE MIO
• TUBOS PARA PRUEBA DE UREA
• TUBOS PARA PRUEBA DE KLIGLER
• TUBOS PARA PRUEBA DE L.D.C.
• PLACAS DE MEDIO MCCONKEY
• REACTIVO DE KOVACS
• ASAS DE SIEMBRA Y PICADURA

24. PROCEDIMIENTO
• PASAMOS A SEMBRAR STREPTOCOCCUS EN UNA PLACA DE AGAR SANGRE, MEDIANTE EL MÉTODO DE
SIEMBRA MASIVA
• AL FINALIZAR, DEPOSITAMOS BACITRACINA PARA PODER OBSERVAR SI ESTA CEPA ERA SENSIBLE A ELLO.
UNA VEZ ACABADO, SEMBRAMOS EN DIFERENTES TUBOS ENTEROBACTERIAS GRAM – PARA DEFINIR SUS
CARACTERÍSTICAS (LA MÍA ERA PROTEUS MIRABILLIS: + PARA UREA Y CITRATO)
• POR ÚLTIMO, SEMBRAMOS OTRA VEZ POR ESTRÍAS, EN ESTA OCASIÓN UNA PLACA DE AGAR MCCONKEY
CON LA ENTEROBACTERIA GRAM -

25. En la fila de atrás
encontramos los tubos para
prueba
Placa Agar Sangre con
bacitracina
Placa Agar McConkey

26. TAREAS

27. •1- INDICAR AL MENOS 4 PRUEBAS BIOQUÍMICAS ESPECÍFICAS PARA LA IDENTIFICACIÓN DEL
GÉNERO STREPTOCOCCUS Y OTRAS 4 PRUEBAS BIOQUÍMICAS ESPECÍFICAS PARA LA
IDENTIFICACIÓN DEL GÉNERO STAPHYLOCOCCUS Y REALZAR UNA BREVE EXPLICACIÓN DE SU
FUNDAMENTO
Streptoccocus: Detección anticuerpos ASLO (pyogenes), medio Granada (agalactiae), CAMP test (agalactiae),
sensibilidad a la optoquina (Pneumoniae)
Staphyloccocus: Agar sangre, Agar de Chapman, catalasa +/-, coagulasa +/-

28. • 2- UTILIZANDO LA TABLA DE IDENTIFICACIÓN DE ENTEROBACTERIAS SEGÚN LOS RESULTADOS DE DIFERENTES
PRUEBAS BIOQUÍMICAS QUE APARECE AL FINAL DEL GUION DE PRÁCTICAS DE LA PRACTICA 4 O EN EL FINAL DEL
POWER POINT DE LA SESIÓN DE PRÁCTICAS 3, IDENTIFICARLOS GÉNEROS Y LA ESPECIE DE LOS
MICROORGANISMOS DE LOS DOS SUPUESTOS PRÁCTICOS QUE SE DETALLAN A CONTINUACIÓN.
CASO 1 CASO 2
KLEBSIELLA SERRATIA

29. PRÁCTICA 3
•TÉCNICAS MICOLÓGICAS. MEDIOS DE CULTIVO.
VISUALIZACION E IDENTIFICACION. FUNGIGRAMA
•PARASITOLOGÍA

30. TÉCNICAS MICOLÓGICAS. MEDIOS DE
CULTIVO. VISUALIZACION E
IDENTIFICACION. FUNGIGRAMA

31. MATERIALES
• API ID 32 C
• PLACAS DE HONGOS Y LEVADURAS PARA MOSTRAR
CRECIMIENTO
• AZUL DE LACTOFENOL
• TINTA CHINA
• HIDRÓXIDO DE POTASIO (POTASA)
• PLACAS DE SABOURAUD
• PORTAOBJETOS Y CUBRES
• ASAS DE SIEMBRA
• PINZAS
• PLACAS SEMBRADAS

33. PROCEDIMIENTO
• LA PRIMERA TÉCNICA QUE REALIZAMOS
ES LA DE TINCIÓN Y VISUALIZACIÓN AL
MICROSCOPIO.
• TRAS FLAMEAR EL HISOPO ESTÉRIL,
EXTENDEMOS EN UN PORTA UNA
MUESTRA DE ASPERGILOSIS Y LO
TEÑIMOS CON HIDRÓXIDO DE POTASIO.
FINALMENTE CUBRIMOS CON UN
CUBRE
•PARA LA SEGUNDA TINCIÓN FLAMEAMOS
DE NUEVO Y OBTENEMOS MUESTRA DE UNA
PLACA DE MICELIO. LA EXTENDEMOS EN UN
PORTA Y TEÑIMOS CON AZUL DE
LACTOFENOL PARA CUBRIR CON UN PORTA

34. PROCEDIMIENTO

35. PROCEDIMIENTO
• SEGUIDAMENTE, LA PROFESORA NOS EXPLICÓ EL
FUNCIONAMIENTO DEL API ID 32C SOBRE CÓMO
OBTENER EL FUNGIGRAMA. ES RENTABLE, REQUIERE
POCO TIEMPO, FLEXIBILIDAD Y ES DE FÁCIL
INTERPRETACIÓN. PASÓ DESPUÉS A DILUIR UNA
MUESTRA DE HONGOS EN UN TUBO CON UNA
SOLUCIÓN Y CADA UNO FUIMOS PIPETEANDO EN 8
POCILLOS DISTINTOS DEL API

36. PROCEDIMIENTO
• YA POR ULTIMO, ACOMETIMOS UNA SIEMBRA
MASIVA EN UNA PLACA DE SABOURAUD CON
UNA MUESTRA (EN MI CASO DE LA
ASPERGILOSIS QUE USÉ AL PRINCIPIO),
FLAMEANDO Y SEMBRANDO POR SEGMENTOS

37. TAREAS

38. •1- BUSCA INFORMACIÓN RELATIVA DEL GÉNERO DE HONGO FILAMENTOSO ASPERGILLUS Y SOBRE
LA LEVADURA CANDIDA ALBICANS.
-ASPERGILLUS: LOS ASPERGILOS FORMAN HIFAS TABICADAS RAMIFICADAS QUE PRODUCEN CABEZAS CONIDIALES
CUANDO SE EXPONEN A AIRE EN CONDICIONES IN VITRO E IN VIVO. LA IDENTIFICACIÓN DE CADA ESPECIE DEPENDE DE
LAS DIFERENCIAS A NIVEL DE LAS CABEZAS, LA DISPOSICIÓN Y LA MORFOLOGÍA DE LAS CONIDIAS. SON UBICUOS Y
FRECUENTES POR TODO EL MUNDO, EN EL ENTORNO HOSPITALARIO APARECEN POR EL AIRE O LOS DEPÓSITOS DE AGUA;
EL TUBO DIGESTIVO ES LA VÍA DE ENTRADA MÁS FRECUENTE.
HAY DIVERSAS FORMAS DE PRESENTACIÓN DE LA ENFERMEDAD: BRONCOPULMONAR (ASMA, INFILTRADOS
PULMONARES, EOSINOFILIA, ELEVACIÓN DE IGE). EN LA SINUSITIS ALÉRGICA LOS INDICIOS SE ACOMPAÑAN DE
SÍNTOMAS DE VÍAS RESPIRATORIAS SUPERIORES DE OBSTRUCCIÓN NASAL O RINORREA. TAMBIÉN EN LA FIBROSIS
QUÍSTICA O LA BRONQUIECTASIA.

39. -CANDIDA ALBICANS: TODAS LAS CÁNDIDAS SE DESARROLLAN COMO CÉLULAS LEVADURIFORMES OVALADAS QUE
FORMAN YEMAS O BLASTOCONIDIAS. ALGUNA DE SUS CEPAS PUEDE SUFRIR MODIFICACIONES FENOTÍPICAS Y
TORNARSE MÁS PELUDAS, LE CONFIERE MAYOR SUPERVIVENCIA. COLONIZAN A SERES HUMANOS COMO OTROS
SERES DE SANGRE CALIENTE, EL AIRE, AGUA Y EL SUELO. LA MAYOR PARTE DE LAS INFECCIONES SON ENDÓGENAS
(DISBIOSIS). PUEDE INDUCIR UNA INFECCIÓN EN CASI CUALQUIER SISTEMA ORGÁNICO: VÉASE LAS MUCOSAS
(VAGINAL), CUTÁNEAS, ONICOMICOSIS/PARONIQUIA, …

40. PARASITOLOGÍA

41. 1- Relacionar 6 artrópodos vectores con enfermedades que causan y
explicarlo.
-Mosquito Phlebomotus: Transmite la leishmania
trópica. El periodo de incubación tras la picadura
va de 2 semanas a 2 meses, hasta que aparece la
pápula roja. Esta lesión produce prurito, se
expande y se ulcera. Poco a poco salen costras y
exuda, si no se trata aparece cicatriz desfigurante
-Mosquito Aedes: Transmite la filariosis de Bancroft
(entre otros). Las larvas emigran a los nódulos
linfáticos tras picadura. Entre 3-12 meses después,
los machos fecundan a las hembras y producen
microfilarias envainadas

42. -E. granidosus: Producen los quistes hidatídicos. Los
gusanos adultos se encuentran en el intestino de los
cánidos y producen huevos que se eliminan por las
heces. Al ingerirlos se forma la oncosfera (larvas),
que penetra en la pared intestinal y pasa al torrente
circulatorio. Las larvas formarán quistes hidatídicos
-Copépodo cyclops: Se han identificado como anfitriones
intermedios de la dracunculosis. D. medinensis deja sus
larvas en el artrópodo y el ser humano lo ingiere con el
agua. La infección comienza con la liberación de larvas en
el estómago, migran al espacio retroperitoneal y allí
maduran. Tras ser fecundadas, las hembras emigran a los
tejidos subcutáneos y forman vesículas que se ulceran

43. -L. mactans: Producen aracnoidismo sistémico con su
picadura. Le sigue enrojecimiento, tumefacción y
dolor. A la hora aparecen calambres, dolor, náuseas,
vómitos y dificultad visual. Los espasmos pueden
simular un abdomen en tabla. Los casos graves
pueden predecir insuficiencia respiratoria o cardíaca
-Garrapatas: Son vectores en la fiebre de las
montañas rocosas. Entre 2-14 días después de la
picadura de la garrapata aparece fiebre, escalofríos,
cefalea y mialgias. Puede haber exantema al cabo de
3 o más días que evoluciona a mácula o petequias.
Primero se afectan las extremidades y luego el tronco

44. 2- Elegir un Platelminto y un Nematodo y explicar las características y
patogenia.
-Cestodos: Son planos con aspecto de cinta. La
cabeza suele tener 4 estructuras succionadoras y
una corona de ganchos. Los segmentos
individuales son los proglótides, cuya unión
conforma el estróbilo. Son hermafroditas y los
huevos contienen un embrión que posee seis
ganchos. Carecen de ap. digestivo y absorben
directamente del intestino de su hospedador.
Tienen ciclos vitales complejos que implican a un
anfitrión intermedio. Las presencia de larvas
extraintestinales son las que causan problemas

45. -Oxiuro (E. vermicularis): Gusano pequeño blanco en los
pliegues perianales o la vagina de sus hijos infectados.
En general, los nematodos son grandes y de cuerpo
cilíndrico, y son parásitos de sangre, linfa y tejidos
subcutáneos. Las larvas salen en el intestino delgado, y
tras madurar se fecundan las hembras, que
depositarán los huevos en los pliegues perianales