El documento describe el procedimiento para establecer yemas de guayaba en cultivo in vitro, incluyendo la preparación de medios de cultivo, la extracción y tratamiento de explantes con detergente y cloro, el enjuague de los explantes, y la siembra de las yemas en frascos con medio de cultivo. El objetivo es introducir yemas apicales y axilares de guayaba al sistema de cultivo in vitro.

1. PRACTICA 3
Tema: Establecimiento de yemas de Guayaba (Psidium guajava)
Objetivo: Introducir yemas apicales y axilares de Guayaba (Psidium guajava) al sistema de
cultivo in vitro.
Procedimiento
 Se preparó, previamente, un medio MS enriquecido con: 3% azúcar, 0,6% agar, 0.5
mg/L de BAP, las soluciones stock de la hormona contenía 1mg/ml de BAP.
 Se extrajeron los explantes de la muestras realizando cortes con una tijera.
Img.02. Explantesobtenidos
 Se preparó una solución de detergente al 2% en 500 ml de agua, en un frasco.
Cálculosde la solución:
1% 𝑑𝑒 𝑑𝑒𝑡𝑒𝑟𝑔𝑒𝑛𝑡𝑒 =
2𝑔 𝑑𝑒𝑡𝑒𝑟𝑔𝑒𝑛𝑡𝑒
100 𝑚𝑙 𝑑𝑒𝑙 𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜
5𝑜𝑜 𝑚𝑙 𝑑𝑒𝑙 𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜∗
2𝑔 𝑑𝑒𝑡𝑒𝑟𝑔𝑒𝑛𝑡𝑒
100 𝑚𝑙 𝑑𝑒𝑙 𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜
= 10𝑔 𝑑𝑒𝑡𝑒𝑟𝑔𝑒𝑛𝑡𝑒

2. Img. 03. Aplicando los 10g de detergente (a), preparacion de la solucion de detergente
(b)
 Se añadió la solución de detergente a los explantes y se mantuvo en agitación por 15
minutos.
Img. 04. Añadiendo la solución de detergente (a), agitación de los explantes más solución de
detergente (b)
 Se realizaron 3 enjuagues con agua destilada estéril por 3 min c/u, en agitación para eliminar
el detergente desechando el agua después de cada enjuague.
A B
A B

3. Img.05. Aplicando agua para realizar los enjuagues
 Se preparó una solución de cloro al 1.25% con 500 ml de agua. Teniendo en cuenta que la
concentración del cloro comercial es de 5.25%.
Cálculos de la solución
𝐶1𝑉1 = 𝐶2𝑉2
𝐶1:5,25 𝑦 𝑉1: ? ; 𝐶2:1,25% 𝑦 𝑉2:500𝑚𝑙
𝑉1: 1,25% ∗
500𝑚𝑙
5,25 %
=
1000𝑚𝑙
5,25
= 119 𝑚𝑙
 Se terminó la solución de cloro, aplicando primero los 119 ml y luego se completó
con agua hasta llegar a un volumen de 500 ml.
Img. 06. Aplicando los 119 ml de cloro (a), completando con agua hasta un volumen
de 500 ml (b)
 Se añadió la solución de cloro a las muestras y se mantuvo en agitación por 10
minutos.
A B

4. Img. 07. Añadiendo la solución de cloro.
 Se eliminó la solución de cloro y se realizaron 3 enjuagues con agua destilada,
estéril por 3 min c/u, manteniendo en agitación, se desecharon el agua de los dos
primeros enjuagues y se dejaron las muestras en el agua del último enjuague.
Img. 08. Ultima agua del enjuague
Siembra de las yemas
 Se sacaron las Yemas del agua y se eliminó las partes más externas del tallo, los cuales
presentaban quemadura por la acción del cloro.

5. Imagen. 09. Eliminado partes externas quemadas por el cloro
 Se flameo los frascos que contenía el medio de cultivo en el mechero.
Img. 10. Flameo del frasco con medio Ms (a), Siembra de las yemas (b)
 Se sembró 4 yemas por frasco.
Img. 11. Siembra de las yemas
 Se flameo el frasco y se le coloco la tapa.
Img. 12. Flameo del frasco sembrado (a), frasco sembrado y sellado con tapa (b)
A B
A B

6. Resultados esperados
 se espera que en 4 semanas las yemas hayan brotado