El documento describe los conceptos básicos de la esterilización y desinfección, incluyendo los diferentes métodos para esterilizar materiales como el calor seco, húmedo, radiaciones y agentes químicos. Explica que la esterilización busca destruir toda forma de vida microbiana, mientras que la desinfección busca reducir los microorganismos a niveles mínimos. También define términos como asepsia y antimicrobianos, y proporciona detalles sobre cómo preparar y esterilizar los medios

1. Preparación de medios de
cultivo y su esterilización.
Por Oscar Omar

2. ¿Para que se necesita esterilizar el material?
Aquí una sencilla respuesta, es imprescindible trabajar con material y soluciones
estériles con objeto de que los resultados que se obtengan correspondan al
microorganismo o microorganismos que están presentes en la muestra que se
estudia y no a contaminantes procedentes del medio o materiales que puedan
desarrollarse y falsear las pruebas. Para ella, antes de empezar el trabajo práctico
se esterilizará, junto con los medios de cultivo, el material que posteriormente se
utilizará.

3. Desde hace mucho tiempo…
Es un reto el control de enfermedades infecciosas por destrucción, disminución de
su número o inhibición de microorganismos. Se puede llevar a cabo con diferentes
métodos en función del lugar a aplicar y el grado de erradicación microbiana que se
pretende conseguir.

4. Es por eso que veremos algunos conceptos básicos.
 Esterilización, este es un proceso físico o químico que destruye toda forma de vida
microbiana incluidas las esporas.
 Desinfección tiene por objetivo la destrucción de microorganismos mediante agentes de
la naturaleza química, con el fin de disminuir el número de formas vegetativas a niveles
mínimos.
 Desinfectante, esta es una sustancia química que inhibe o destruye microorganismos al
aplicarla sobre material inerte sin alterarlo significativamente
 Asepsia, es un término que se aplica a los procedimientos utilizados para prevenir que los
microorganismos progresen en un medio determinado.
 Antimicrobianas: Son sustancias químicos producidas por microorganismos o sintetizadas
químicamente que a bajas concentraciones son capaces de inhibir e incluso de destruir
microorganismos sin producir efectos tóxico en el huésped.

5. Antimicrobianas
 Esterilización Agt
 es. Físicos
 Calor seco
 Flameado
 Incineración
 Estufa
 Calor húmedo
 Autoclave
 Tindalización
 Filtración
 Radiaciones
 U.V
 Rayos X
 Agtes. Químicos
 Óxido de etileno
 Formol o formaldehído
 Glutaraldehído
 Desinfección Compuestos
inorgánicos
 Nitrato de plata y derivados
argéncos
 Derivados mercuriales
 Agua oxigenada
 Permanganato de potasio
 Derivados clorados
 Derivados yodados
 Compuestos orgánicos
 Alcoholes y fenoles
 Clorohexidina
 Detergentes aniónicos y
catiónicos

6. Esterilización
 Flameado: es un procedimiento simple y eficaz, consiste en la exposición de un
objeto a efecto de la llama hasta la incandescencia. Se esteriliza de esta forma, p.
ej. ansas de cultivo de siembra.
 Incineración: es el mejor sistema para esterilizar todas aquellos productos en los
que no importe su destrucción, p. ej. material biológico
 Estufa: calor seco a alta temperatura, 20 minutos durante 180º, 60 minutos a
160º, siendo suficiente la esterilización durante 60 minutos a 100-140º, se lo
utiliza para esterilizar material de vidrio debidamente envuelto en papel, metal.
etc.

7. Calor húmedo
 La esterilización con calor húmedo (vapor d agua) es mucho más rápida y eficaz que el
calor seco debido a que las moléculas de agua desnaturalizan las proteínas de forma
irreversible mediante rotura de los uniones H entre los grupos peptídicos a temperaturas
relativamente bajas.
 Autoclave: horno a presión, consiste en una cámara en la que el aire puede ser sustituído
por vapor de agua sometida a presión. Se opera a 121ºC y 1 atm. de presión durante 20
minutos. De esta forma se consigue destruir todas las formas vegetativas y esporas. Se lo
utiliza para esterilizar todo material resistente a esa temperatura y es muy utilizado para
la esterilización de medios de cultivos
 Tindalización: (esterilización intermitente) consiste en someter el producto a
calentamientos intermitentes entre 56 y 100ºC durante 30 minutos con lo que se asegura
destruir las formas vegetativas. En los intervalos se mantiene a temperatura ambiente o
a 37ºC, las esporas germinan y las bacterias resultantes se hacen más sensibles al
calentamiento posterior.

8. Radiaciones
 Luz UV: es absorbida a una longitud de onda de 240 a 280 nm por ácidos
nucleicos causando daños genéticos alterando las bases. Se la utiliza en la
preparación de vacunas, cabinas de seguridad biológica, lugares de trabajo como
mesadas de laboratorios, est.
 Radiaciones ionizantes: actúan lesionando ácidos nucleicos. Se la utiliza sobre
todo en procesos industriales para esterilizar dispositivos quirúrgicos, guantes,
jeringas, etc.

9. Agentes químicos
Los agentes químicos como el óxido e etileno, formaldehído o glutaraldehído reaccionan con gran facilidad con diferentes grupos
funcionales de los ácidos nucleicos y proteínas alquilando estos radicales esenciales.
a) Óxido de etileno.
 Es un gas inflamable y potencialmente explosivo, muy penetrante que incativa microorganismos sustituyendo átomos de
hidrógeno lábiles por otros grupos como hidroxilos, carboxilos, etc.
 El material se expone a esterilizar a un 5-10% de óxido de etileno en dióxido de carbono a 50-60º en condiciones de humedad
controlada durante 4 a 6 horas. Es necesario someterlo después a un período de aireación debido a su carácter mutegénico. Es
un agente efectivo en la esterilización de material termolábil como prótesis, catéteres, etc
b) Formol o formaldehído.
 Es un gas fácilmente soluble en agua que se utiliza al 40% (formalina). Usado en forma gaseosa y en cámara cerrada se emplea
en la esterilización hospitalaria y en la industria farmacéutica. También es muy utilizado como desinfectante ambiental de salas
altamente contaminadas que una vez tratadas deben airearse.
c) Glutaraldehído.
 S emplea sumergiendo el material limpio en una solución al 2%, se emplea sobre todo en la esterilización de instrumentos
ópticos y los utilizados en terapia respiratoria.

10. Compuestos Inorgánicos
La actividad de los compuestos derivados de metales pesados (como plata, mercurio, etc.,) se debe a la formación de sales que se
disocian con dificultad de los grupos sulfidrilos de las proteínas.
 Son buenos bactericidas. El nitrato de plata se ha utilizado en el tratamiento de quemaduras en soluciones al 0,5% y en la
profilaxis de la oftalmia neonatorum por Neisseria gonorrhoeae.
 Nitrato de plata y derivados agenticos, el más utilizado como desinfectante de la piel es el mercuriocromo, no es tóxico y sigue
siendo activo en presencia de materia orgánica.
 Derivados mercuriales, es un agente oxidante de efecto fugaz por ser descompuesto por las catalasas de los tejidos.
 Agua oxigenada (peróxido de hidrógeno)Agente oxidante que se inactiva en presencia de materia orgánica. Es poco utilizado. En
dermatología es utilizado por su propiedad antifúngica.
 Permanganato de potasio, se inactivan en presencia de materia orgánica. El cloro y derivados son agentes oxidantes muy usados
en la potabilización del agua en forma de cloro gaseoso en grandes establecimientos, y en forma de hipoclorito es utilizado para
descartar material biológico (sangre, suero, etc.)
 La cloramina es un antiséptico menos potente que el hipoclorito, de acción más lenta pero mejor tolerada en la aplicación tópica.
 Derivados clorados.
 Derivados yodados.

11. Compuestos Orgánicos
Actúan desnaturalizando proteínas. Su acción es rápida pero se evaporan con facilidad. El alcohol etílico se utiliza en antisepcia a una
concentración del 70%, a esta concentración se reduce más la tensión superficial de la célula bacteriana facilitando el proceso de
desnaturalización.
 Alcoholes.
Actúan precipitando proteínas. El hexaclorofeno y el fenol no se emplean por su toxicidad. Otros derivados fenólicos son los
cresoles, los que unidos a jabones originan compuestos estables.
 Fenoles.
Es un derivado fenólico que actúa alterando la permeabilidad de la membrana celular bacteriana. Tiene inactivación rápida y es bien
tolerado por la piel. Se emplea mucho en hospitales en el lavado de la superficie cutánea en forma de solución (acuosa o alcohólica)
o asociada a detergentes no iónicos.
 Clorohexidina.
Actúan desorganizando las membranas citoplasmáticas. Tienen escaso poder bacteriostático. Se pueden mejorar combinándolos con
desinfectantes u otras sustancias tensoactivas como laurilsulfato.
 Detergentes anionicos.
Tienen acción antiséptica, se inactivan en contacto con jabón, algodón y materia orgánica. Son poco usados.
 Detergentes cationicos.
 Glicoles.

12. Medios de cultivo ¿Qué es?
El medio de cultivo consta de un gel o una solución que cuenta con todos los
nutrientes necesarios para permitir condiciones favorables de pH y temperatura,
así como para permitir también el crecimiento de virus, microorganismos, células,
tejidos vegetales o incluso pequeñas plantas. Según lo que se desea hacer, se
requerirá ciertas condiciones. Algunas veces se presentan desecados en forma de
polvo o granular antes de ser preparados, una vez preparados estos se encuentran
en estado sólido, semi sólido o líquido. Los objetivos aquí suelen ser variados, tales
como la antibograma, la identificación o la multiplicación, entre otros.

13. Clasificación
Dependiendo sus cualidades físicas, se distinguen en:
 Sólidos
 Semisólidos
 Líquidos

14. Según su origen
Naturales: Estos son preparados a partir
de sustancias naturales de origen vegetal
o animal, pudiendo ser extractos de
tejidos o infusiones y cuya composición
química no se conoce exactamente.
Sintéticos: Los medios que tienen una
composición química definida
cualitativamente y cuantitativamente.
Estos son utilizados comúnmente para
obtener resultados reproducibles.
Semisintéticos, son a los que se les
añaden factores de crecimiento bajo
una forma de un extracto orgánico
complejo, como por ejemplo extracto
de levadura.

15. ¿Qué se necesita para preparar un medio de cultivo?
Antes que nada se debe de saber que tipo de cultivo se desea preparar. Ya que la
composición precisa dependerá de la especie que se quiera cultivar, por que las
necesidades nutricionales variaran considerablemente, hay microorganismos muy
poco exigentes que crecen en medios de laboratorio normales y microorganismos
exigentes que necesitan sustancias determinadas como vitaminas, sueros o sangre
para crecer.
Algunos medios dependiendo su composición ayudan al crecimiento de
1.- un gran numero de especies

16. El agar nutritivo siendo este un medio de cultivo
usado comúnmente para la mayor parte de las
bacterias. Es muy útil por que permanece sólido
incluso a relativas altas temperaturas. Este tipo de
agar contiene normalmente:
0.5 % de peptona
0.3 % de extracto de carne/extracto
de levadura
1.5 % de agar
0.5 % de cloruro de sodio
Agua destilada
pH casi neutro (6, 8) a 25 °C

17. Este tipo de medio de cultivo selectivo contiene
peptonas. Este es utilizado para cultivar hongos,
especialmente dermatofitos, aunque también
pueden desarrollarse en un cierto tipo de
bacterias filamentosas tales como la nocardia.
Se utilizo en 1892 por Raymond Sabouraud y más
tarde Chester W. Emmons lo mejoro.
40 g/L glucosa
10 g/L pluripeptona 15 g/L agar
15 g/L agar
0.05 g/L [cloranfenicol]
pH 5, 6

18. Determinados microorganismos, a estos se les denomina
medio de cultivo.
Un medio selectivo es un medio de cultivo en
el que sólo puede crecer un tipo de
microorganismo (hongo, bacterias entéricas,
protozoos…). Un ejemplo de medio selectivo
sería usar un medio rico en un antibiótico
para permitir únicamente el crecimiento de
las bacterias resistentes a éste.

19. Otros en cambio se desarrollan para el estudio de determinadas pruebas fisiológicas o test bioquímicos

20. Nota
La siguiente información fue sacada desde el sitio:
https://sites.google.com/a/goumh.umh.es/practicas-de-microbiologia/
indice/preparacion-de-medios-de-cultivo

21. ¡Lo que esperaban desde el principio:! Un fin:
Preparación de medios de cultivo

23. Ver otras presentaciones:
Julissa Montoya López
Rosa Angélica Salvador
Mario Alberto Rosales García
Alexis Castillo Castillo Ana Luisa Morales Salinas