El documento describe el proteinograma, que es el resultado de la electroforesis de proteínas en función de sus características físicas como tamaño y carga. Se explican diversos métodos de electroforesis, incluyendo nativa, SDS-PAGE e isoelectroenfoque, y su aplicación en la separación y análisis de proteínas en suero. Además, se detallan las fracciones de proteínas y sus implicaciones clínicas en diferentes condiciones de salud.

1. Sesiones de Residentes Julio’11 PROTEINOGRAMA@dawelian martes 12 de julio de 2011Daniel E. PleguezueloMIR InmunologíaServicio de Inmunología Clínica

2. Introducción características físicas:- TAMAÑO- FORMA (3D)- CARGA- PUNTO ISOELÉCTRICOEl Proteinograma es el resultado de la aplicación de la técnica de electroforesis a una solución con proteínas. Electroforesis es un método para separar sustancias al aplicar un campo eléctrico dependiendo de su tamaño, forma, carga y punto isoeléctrico

3. ¿Pero cómo se mueven?VELOCIDAD DEMIGRACIÓNLas proteínas se separan en función de las características enumeradas anteriormente, y lo hacen así porque éstas definen una diferente velocidad de migración, que depende de la intensidad del campo eléctrico y de la movilidad electroforética. Esta última es directamente proporcional a la carga iónica que presente la proteína e inversamente proporcional a las fuerzas de fricción: tamaño y viscosidad.

4. HardwarePara realizar la técnica se necesita un aparato que conste de un gel (medio en el que se moverán las proteínas), tampón o buffer (que proporciona los iones y el pH para la separacíón de las proteínas), fuente de alimentación con dos electrodos, uno positivo y otro negativo, un peine para fabricar los pocillos y estos pocillos, donde se depositarán las muestras.

5. Variantes de Electroforesis

6. NativoEn la electroforesis nativa se aplica un campo eléctrico sobre un medio con un pH definido (básico). Las proteínas, depositadas en los pocillos, se desplazarán en función de sus características físicas anteriormente enumeradas y podrán ser diferenciadas gracias a una técnica de tinción.

7. SDS-PAGEhttp://www.youtube.com/watch?v=IWZN_G_pC8USDS es un compuesto químico que destruye la estructura terciaria y cuaternaria de las proteínas, otorgando a las proteínas una carga negativa proporcional al tamaño de las mismas. Al aplicar el campo eléctrico, las proteínas se separarán por tamaño.

8. Electroforesis CapilarEn la electroforesis capilar el medio en el que se separan las proteínas no es un gel sino un capilar artificial. A él llega la muestra mediante fuerzas hidrostáticas y se separarán también en función de sus características físicas, a lo largo del capilar.

9. IsoelectroenfoquepHdel medioH+H+H+H+H+H+ PUNTO ISOELÉCTRICOH+Las proteínas pueden tener carga global positiva, negativa o cero. En el Isoelectroenfoque las proteínas se separan en función de su capacidad para adquirir protones, que serán incorporados a los residuos aminoacídicos. Esta capacidad para ganar protones en un medio con un gradiente de pH, hará que las proteínas se desplacen hasta un punto en el que la carga neta de cada proteína sea cero, lugar en el que detendrá su movimiento por haber alcanzado su punto de equilibrio eléctrico.

10. IsoelectroenfoquepHdel mediopH < pI Proteína +pH > pI  Proteína -H+H+H+H+H+H+ PUNTO ISOELÉCTRICOH+¿Hacia dónde se mueven las proteínas? Si el pH en el que se encuentra la proteína es inferior a su punto isoeléctrico, la proteína estará cargada positivamente y se desplazará perdiendo protones hasta equilibrar sus cargas y quedar fija en el punto isoeléctrico.Si el pH del medio es mayor que el que define el punto isoeléctrico, la proteína se cargará negativamente.

11. Isoelectroenfoque

12. Proteínas en el SueroBandas del espectroelectroforético (abajo) y representación gráfica (arriba). La primera banda por la izquierda corresponde a la fracción de albúminas. La segunda a la de Alfa1, la tercera a Alfa2, la cuarta y quinta a Beta1 y Beta2 y la última por la izquierda a la fracción gamma.

13. Proteínas en el Suero

14. AlbúminaAlbúmina

15. Pre-AlbúminaanalbuminemiaDeshidrataciónEnfermedades HepáticasSíndrome NefróticoEmbarazoMalnutriciónHemorragiasEnteropatíasMalabsorcionLESQuemaduras

16. Fracción Alfa-1RFA, 90%Alfa-1 Antitripsina

17. Alfa-1 Glicoproteína Ácida

18. Alfa-1 Fetoproteína

19. Alfa-1 Lipoproteína (HDL)

20. Transcortina

21. Proteína Fijadora de TiroxinaCHCReacción de Fase AgudaInfección, Inflamación, Fiebre, NeoplasiasEmbarazoDéficit de Alfa-1 AntitripsinaEnfermedades Hepáticas

22. Fracción Alfa-2Haptoglobina

23. Alfa-2 Macroglobulina

24. Ceruloplasmina

25. Alfa-2 Lipoproteína (VLDL)

26. PCR*RFASdNFoCu, RFAReacción de Fase AgudaInfección, Inflamación, Fiebre, NeoplásicasInsuficiencia adrenalTratamiento con esteroidesDM avanzadaSíndrome NefróticoEIIMalnutriciónAnemia MegaloblásticaEnteropatías pierde-proteínasEnfermedades HepáticasEnfermedad de Wilson

27. Fracción Beta-1 y 2RFAFibrinógeno

28. Beta-2 Microglobulina

29. Beta-2 Glicoproteína

30. Fibronectina