El documento describe la estructura y replicación del rotavirus. El rotavirus tiene una cápside externa de 80 nm que protege una cápside interna y 11 segmentos de ARN que codifican para 6 proteínas estructurales (VP1-VP4, VP6, VP7) y 6 no estructurales (NSP1-NSP5). El rotavirus pertenece al Grupo A y se divide en serotipos según las proteínas VP7 y VP4. Se replica en el citoplasma de las células epiteliales intestinales causando diarrea aguda

1. Ruth Bishop y col.
Royal Children`s
Hospital
en Melbourne, Australia
1974
Thomas
Henry
Flewett

2. Estructura del
ROTAVIRUS
Cápside Externa
80 nm.
Cápside
Interna
Cápside
Interna

3. ROTAVIRUS
ESPECIES DE RV.
Segmentos de ARN
Grupo A – (SGI-SGII)
Grupo B -
China
VP1/ VP3 Grupo C – Australia, Brasil
Grupo D
VP2
Grupo E
Grupo F
Grupo G
VP6
VP7
VP4
Clivada por tripsina pancreática
VP8 / VP5

4. Proteínas virales
No estructurales (NS)
Replicación ARN viral
NSP1
Transcrita por el gen 5 y es una proteína de unión al
ARN.
NSP2
Proteína de unión de ARN, que se acumula en
inclusiones citoplasmáticas.
NSP3
Unida al ARNm en células infectadas y es responsable
de la finalización de la síntesis proteica celular.
NSP5
Codificada por el segmento 11 del genoma vírico del RV
A y en las células infectadas se acumula en el
viroplasma
NSP4
Enterotoxina viral que induce Diarrea
(primera enterotoxina que se descubrió)

5. Grupo A
La clasificación de rotavirus de acuerdo con el
serotipo
VP7. Se divide en 14 serotipos de RV del grupo
A de origen animal y humano siendo:
Vp7(G (Glicoproteínas)).
Serotipos que infectan a Humanos
(G1, G2, G3, G4, G5, G6, G8, G9, G10 y G12)
20 Genotipos diferentes de VP4 (P)
10 Serotipos
Vp4(P(Prot. sensible a la Proteasa))
Serotipos en Humanos (P1A, P1B, P2A, P3,
P3B, P4, P5 y P8)

6. Replicación Viral
ENDOCITOSIS
PENETRACIÓN
DIRECTA

7. NÚCLEO

8. Replicación viral (Penetración directa)
4 Nuevos virus deja a
las células infectadas
para invadir a las
sanas
ROTAVIRUS
VP4
Célula
Epitelial
1
Hemaglutinina viral
2
Transcriptasa
viral.
3
El virus se multiplica y
produce la toxina
5 Las células epiteliales
mueren y los fluidos
salen del cuerpo

9. Patogenia
Respuesta
Inmune
11 H. a 3
días
Disminución en la
superficie de absorción
Alteración de la integridad
epitelial
(Incubación)
Deficiencia de
disacáridos

10. Cuadro Clínico
7 a 10 Días
14 o más días
Intolerancia
disacáridos
5-8 Días
2-3 Días
2-3 Días

11. Diagnóstico de Laboratorio
Serología
ELISA
Inmunofluorescencia
Aglutinación en Latex
Contrainmunoelectroforesis
Reacción de fijación
del complemento

12. Diagnóstico de Laboratorio
Otros recursos
Inmunoelectromicroscopía.
Hibridación para detección de heces.
Sondas de oligonucleótidos acopladas a
radioactividad.
Cultivo celular
Estudio de reaccion de polimerasa en cadena.
Identificación de ARN
segmentado

13. Control
Control inicial

14. Control Específico
2 Meses de
Edad
4 Meses de
Edad
6
4 Meses de
Edad

15. Epidemiología
65-67% ---1año de edad
35% entre 2 y 3 años de edad
Caracas:
En todo el año.
85% -- 1 año
14% -- 2 años
1% 3 años
Valencia – Edo. Carabobo
Estacionaria.
67% -- 1 año
26% -- 2 años
7% 3 años
Templados:
EE.UU, México, Finlandia,
Gran Bretaña (Fríos o
Secos)
Tropicales:
Brasil, Venezuela varios
países de África (todo el
año)

17. Electroforesis
Vocablos griegos
“êlektron” (“ámbar”) y hace referencia a la electricidad
“phoros” (“llevar o trasladar”)
Etimológicamente puede definirse como:
Un transporte o traslado bajo la acción de la
electricidad. Más propiamente, la electroforesis se
define como un método analítico para la separación de
moléculas según la movilidad de éstas en un campo
eléctrico a través de una matriz porosa, la cual
finalmente las separa por tamaños moleculares y
carga eléctrica, dependiendo de la técnica que se use.

18. Arne Tiselius (1937)
Desventajas
Dio paso a aquellos que
Escaso poder de
usaban un soporte sólido o
resolución
Exigir gelatinoso
gran cantidad
Embebido en
de muestra, la solución
amortiguadora
Muy laborioso de pH
Sobre el que ocurría la
En la práctica no
separación electroforética
permitir la separación
de los los
total decomponentes en
bandas o zonasde la
componentes discretas
mezcla
“Electroforesis De Frentes En Movimiento”
o “moving boundary electrophoresis”

19. Fundamento
El movimiento de las moléculas está
gobernado también por dos fuerzas
adicionales; inicialmente la fricción con el
solvente dificultará este movimiento originando
una fuerza que se opone, por otro lado las
moléculas poseen energía cinética propia por
lo que tienden a moverse en forma aleatoria o
movimiento browniano

20. Tipos de Electroforesis
 Electroforesis Libre
Disoluciones o suspensiones.
Fue desarrollada por Arne
Tiselius en 1937.
Desesuso, ya que al ser un
fluido el medio en el que se
desarrolla, tiene poco poder
de resolución.

21. Electroforesis en Zona
Fuente de alimentación.
Cubeta.
Soporte electroforético.

22. Tipos de Electroforesis de Zona
ELECTROFORESIS EN PAPEL
El revelado se realiza empleando los
mismos métodos que los utilizados en
cromatografía sobre papel, mediante la
acción de los colorantes adecuados
ELECTROFORESIS EN GEL
La
separación
no
se
produce
sólo
por
las
diferentes cargas de las
moléculas, sino también por
las diferencias de tamaño.

23. Tipos de Geles
Geles de agarosa
Este gel está constituido por una matriz o
trama tridimensional de fibras poliméricas
embebida en gran cantidad de medio
líquido, que retarda el paso de las
moléculas, se usa usualmente para
separar moléculas grandes de alrededor
20.000 nucleótidos.
Geles de poliacrilamida
Se forman por polimerización de
la acrilamida por acción de un
agente
entrecruzador,
es
químicamente
inerte,
de
propiedades uniformes, capaz
de ser preparado de forma
rápida y reproducible

24. La Electroforesis en Geles de
Poliacrilamida
TIPOS
1. Electroforesis en gel en una dimensión
(continuo o discontinuo)
a. PAGE-nativa
b. PAGE-desnaturalizante (SDS-PAGE)
c. Isoelectroenfoque
2. Electroforesis en gel en dos dimensiones
(bidimensional)

25. PAGE-nativa
SEPARAR
EN FUNCIÓN
Carga
intrínseca de
las proteínas
PAGE-desnaturalizante (SDS-PAGE)
Tamaño (MM)
SEPARAR
EN FUNCIÓN
D. PM de las
proteínas
Detergentes (SDS, sodio dodecil sulfato)
Caótropos (urea)
agentes reductores (2- mercaptoetanol, DTT).

26. Isoelectroenfoque
DESPLAZAMIENTO
Gradiente de
pH
Las moléculas anfotéricas, como los aminoácidos, se separan en un
medio en el que existe una diferencia de potencial y un gradiente de
pH.
Entre ambos se establece un gradiente de pH tal que las
moléculas que se han de separar tenga su punto isoeléctrico
dentro del rango
La migración les conducirá a una región dónde el pH coincidirá con su
punto isoléctrico, tendrán una carga neta nula y se detendrán. De esta
forma las moléculas amfotéricas se sitúan en estrechas bandas donde
coincide su punto isoeléctrico con el pH.

27. Electroforesis Bidimencional
SEPARAR
Isoelectroenfoque
Electroforesis En
Poliacrilamida
Según
Punto
isoeléctrico
Peso
Molecular
Punto
isoeléctrico
Peso Molecular

28. La Electroforesis Capilar (CE)
Detector
De las especies portadoras de
Electroferograma--- Muestra el
una carga eléctrica global, bajo
registro de la composición de
el efecto de un campo eléctrico y
la muestra.
en contacto con un soporte
(medio
de
desplazamiento)
Solo las especies que se
adecuado.
dirigen hacia el cátodo serán
detectadas.
Solución Buffer
SEPARAR
MIGRACIÓN

29. Métodos de Detección
UV-Vis se mide la intensidad de la luz que
pasa a través del capilar en una pequeña zona
en la que se ha eliminado el revestimiento
opaco.
Detección por Fluorescencia resulta más
sensible si se emplea una fuente láser muy
intensa,
asociada
a
menudo
a
un
procedimiento de preformación de derivados
de los analitos portadores de un fluoróforo.

30. Factores que Afectan la
Electroforesis
CAMPO ELÉCTRICO
MUESTRA
SOPORTE
TAMPÓN

31. Resultados
Muestras rotapositivas que mostraron el patrón típico de
ARN de