La tinción de Gram clasifica las bacterias como Gram positivas u Gram negativas dependiendo de si tienen una capa gruesa o delgada de peptidoglicano en su pared celular. La tinción consiste en cuatro pasos: tinción inicial con cristal violeta, mordiente con yoduro, decoloración con alcohol y contra tinción con safranina. Esto permite diferenciar las bacterias Gram positivas que se tiñen de morado y las Gram negativas que se tiñen de rosado. Factores como la edad de la bacteria, errores del operador

1. Universidad Autónoma de Chiriquí
Facultad de Ciencias naturales y Exactas
Licenciatura en tecnología médica 2do
año
l semestre
Microbiología General 1
Tinción de Gram
Prof. : Arline Villareal
Por: Jocsan Gonzalez

2. Tinción de
Gram

3. Esta tinción fue desarrollada por el doctor Christian Gram en 1884, es
la mas utilizada en los laboratorios de bacteriología y permite, de
acuerdo con la estructura y grosor de la pared bacteriana, agrupar las
bacterias en Gram positas y Gram negativas.

4. Las bacterias se clasifican o se tiñen como Gram Positivas (color
morado), y Gram negativas (color rosado o fucsia).

5. Las Gram positivas poseen una
capa gruesa de peptidoglucano
y carecen de membrana
externa.
Las Gram negativas tienen una
capa mas delgada de
peptidoglucano y poseen
membrana externa

6. Algunos
microorganismos
agrupados en Gram
positivas y negativas

7. Pasos para realizar la tinción

8. 1. Tinción inicial
Las células se tiñen con cristal violeta, el cual es el
colorante primario. En este paso todas las células se tiñen
de morado.

9. 2. Mordente
Se adiciona Yoduro(lugo) que reacciona con el cristal
violeta y forma un complejo cristal violeta-yoduro. En este
punto todas las células continúan de color morado.

10. 3. Decoloración
Se adiciona un solvente no polar
(alcohol, acetona) el cual actúa
lavando el complejo cristal violeta-
yoduro de las células Gram negativas.
De esta manera las bacterias Gram
positivas continúan moradas y las
Gram negativas quedan incoloras. Este
es el paso critico de esta tinción, pues
si se exagera, decolora las Gram
positivas y si se hace muy débil no
decolora las Gram negativas.

11. 4. Contra tinción
Se vuelve a teñir con safranina o fucsina, de
manera que las bacterias de Gram negativas, que
habían sido decoloradas, se tiñen de rosado a
fucsia según el colorante empleado; en tanto, las
bacterias Gram positiva no se afecta con la
contratinción y permanecen moradas debido a lo
intenso de esta coloración.

12. Bacterias Resistentes a la tinción de Gram
Bacterias de naturaleza gran positiva que se tiñen
como Gram negativas.
1. Mycobacterias
2. Mycoplasmas
3. Formas L.
4. Protoplastos y
esferoplastos

13. Factores que alteran la tinción de Gram

14. Edad de la bacteria o cultivo
Las células viejas tienden a perder su capacidad de retener el
complejo cristal violeta-yoduro y por lo tanto las bacterias se verán
rosadas.

15. Errores del operador
Se debe prestar atención a los lavados que se realizan al ir
agregando los diferentes reactivos, si se deja un exceso en
la lamina los reactivos se diluirán.

16. Composición de reactivos
Se han descrito modificaciones de esta
técnica orientadas a resolver problemas
específicos y cuyas variaciones radican en
la composición de reactivos,
especialmente en la concentración y
preparación del cristal violeta, así como el
uso de solvente orgánico empleado como
agente decolorante, si se cuentan con
estas modificaciones es importante no
confundir los reactivos; los resultados
podrían variar.