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Dr. Keylor Arroyo Gutiérrez
MQC 1778
BIOQUÍMICA CLÍNICA
ESPECTROFOTOMETRÍA
Limitaciónes de la Ley de Lambert y Beer
 Dispersión de la luz por particulas en la muestra
 Fluorescencia de la muestra
 Radiación no monocromática
 Luz extraña (ruido)
 Cubetas sucias
 Interferentes analiticos (Lipemia, Hemolisis, Ictericia)
ESPECTROFOTOMETRÍA
SELECCIÓN DE LONGITUD DE ONDA:
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reacción química se selecciona la
longitud de onda específica en la
cual la absorbancia producto de
la reacción o del analito sea
MÁXIMA
 ESPECTRO DE ABSORCIÓN:
Calibradores
 Para poder calibrar son necesarios estándares o calibradores, estas son sustancias
de referencia, se conoce su valor y es considerado exacto.
 Con los calibradores se construye una curva de calibración y con ella se
determina:
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PRACTICA DE CÁLCULOS
 CURVA DE CALIBRACIÓN E INTERPOLACIÓN DE UNA INCÓGNITA
Absorbancia de la muestra considerando el blanco
0,334-0,087=0,247
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FACTOR: 10+7,5 +5+2,5 / 0,432+0,279+0,169+0,041 = 27,14
Absorbancia de la muestra considerando el blanco
0,334-0,087=0,247
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  • 1. Dr. Keylor Arroyo Gutiérrez MQC 1778 BIOQUÍMICA CLÍNICA ESPECTROFOTOMETRÍA
  • 2.
  • 3.
  • 4. Limitaciónes de la Ley de Lambert y Beer  Dispersión de la luz por particulas en la muestra  Fluorescencia de la muestra  Radiación no monocromática  Luz extraña (ruido)  Cubetas sucias  Interferentes analiticos (Lipemia, Hemolisis, Ictericia)
  • 5.
  • 6. ESPECTROFOTOMETRÍA SELECCIÓN DE LONGITUD DE ONDA:  Según cada analíto y cada reacción química se selecciona la longitud de onda específica en la cual la absorbancia producto de la reacción o del analito sea MÁXIMA  ESPECTRO DE ABSORCIÓN:
  • 7.
  • 8. Calibradores  Para poder calibrar son necesarios estándares o calibradores, estas son sustancias de referencia, se conoce su valor y es considerado exacto.  Con los calibradores se construye una curva de calibración y con ella se determina:  Linealidad  Sensibilidad  Límite de detección  Límite de cuantificación  Intervalo analítico
  • 9.
  • 10.
  • 11.
  • 12. PRACTICA DE CÁLCULOS  CURVA DE CALIBRACIÓN E INTERPOLACIÓN DE UNA INCÓGNITA
  • 13. Absorbancia de la muestra considerando el blanco 0,334-0,087=0,247 CM= (0,247/0,339)×7g/dl = 5,1 g/dL
  • 14. FACTOR: 10+7,5 +5+2,5 / 0,432+0,279+0,169+0,041 = 27,14 Absorbancia de la muestra considerando el blanco 0,334-0,087=0,247 CM= 0,247×27,14= 6,70 g/dL