Manal de como realizar un hemograma

1. HEMOGRAMA
MANUAL
Carlos Jorge Villa Sono
Tecnólogo Medico
UNMSM- UPCH- HSGY
2023

2. Definición
ES EL ESTUDIO CUALITATIVO Y
CUANTITATIVO DE LOS ELEMENTOS
CORPUSCULARES DE LA SANGRE
CUANTITATIVO : Recuento de GR, GB
Dosaje de Hb
Índices Hematimétricos ( VCM, HCM, CHCM )
Fórmula Leucocitaria
CUALITATIVO
Estudio Morfológico de la Serie Roja, Serie Blanca y Pq

3. Determinaciones Adicionales
RECUENTO DE Pq
Reticulocitos
VSG

4. ETAPA Pre-ANALÍTICA
 Condiciones del Paciente
 Tipo y Toma de Muestra

5. Condiciones del Paciente
 NO NECESITA ESTAR
ESTRICTAMENTE EN AYUNAS (se
sugiere al menos 2 h).
 NO HABER REALIZADO ACTIVIDAD
FÍSICA INTENSA
 PERMANECER PREFERENTEMENTE
SENTADO DURANTE LA EXTRACCION

6. DATOS A TENER EN CUENTA
EDAD
 DX. PRESUNTIVO
 SEXO

7. REFERENTE A LA MUESTRA
 TIPO DE MUESTRA
-VENOSA
-CAPILAR
-ARTERIAL??

8. PUNCION VENOSA
VENTAJAS
-Técnica rápida y segura
-Permite obtener volúmenes
adecuados para las demás
determinaciones.
-Permite repetir el análisis en
caso de dudas.
-Reduce los posibles errores
de la punción capilar.
DESVENTAJAS
-Resultados erróneos por hemo-
concentración (torniquete pro-
longado)
-Hematomas y dolor (extracción
dificultosa)
-No se recomienda en neonatos
o pacientes quemados.
-Paciente Oncológicos

9. PUNCION CAPILAR
VENTAJAS
-Resulta sencillo para neonatos y
niños
-Se puede realizar más de una
vez en pacientes especiales (que-
mados, oncológicos, etc)
-Útil en pacientes con patologías
Hemorrágicas.
DESVENTAJAS
-Recuentos erróneos por hemo-
concentración o hemodilución
-Dificultad para obtener flujo
continuo.
-Recuentos de Pq disminuidos,
coagulación.
-Errores por contaminación
-Paciente Oncológicos

10. ANTICOAGULANTES
 SALES DE EDTA :(Na2 o K3) Forman complejos con el Ca++,
efectivo en pequeñas cc, no necesita ser evaporado (Posible error
por dilución a tener en cuenta) 0.01mL (10 μL) sirven para
anticoagular hasta 2,5 mL de sangre LA RELACION
NORMALMENTE USADA ES 10 μL más 1 mL (990 µL) de sangre
(1/100)
PERMITE CONSERVAR EN HELADERA LAS MUESTRAS
HASTA 48h SIN ALTERAR LOS VALORES
 MEZCLAS DE OXALATOS DE AMONIO Y POTASIO (
MEZCLA DE WINTROBE) Actúa precipitando el Ca²+
Proporción 1/10 (0.5 mL ACG EVAPORADO a 37 + 5 mL sangre)
 HEPARINA: Actúa neutralizando la trombina. Proporción 10-50
UI/mL sangre. (COLORACIÓN)

11. ACTIVIDAD
 TENIENDO EN CUENTA PROPORCIONES
CALCULE:
 - volumen de EDTA-Na2 para anticoagular 3
mL de sangre
 -volumen de EDTA–Na2 para anticoagular
2 mL de sangre

12. Obtenida la muestra
 HOMOGENEIZAR !!!!! LENTA Y
REPETIDAS VECES
 ANTES DE PROCESAR :
HOMOGENEIZAR LENTA Y
REPETIDAS VECES!!!

13. ETAPA ANALÍTICA
 RECUENTOS DE GB , GR y Plq
 Hematocrito
 Dosaje de Hb
 Fórmula Leucocitaria

14. RECUENTO DE GB
 DILUYENTE: LIQUIDO DE TURK
-Acido acético glacial (20 mL)
-Cristal Violeta 1% (10 mL)
-Llevar a 1000 mL con agua destilada
 Dilución : 1/20
380 μL + 20 μL muestra

15. Muestra
Homogeneizar
Por agitación
Secar con papel
el dispositivo de
cargado

16. RECUENTO DE GB
CAMARA DE
NEUBAUER
PIPETAS

17. CAMARA DE NEUBAUER
Se trata de un portaobjetos con una
depresión en el centro, en el fondo de
la cual se ha marcado con la ayuda de
un diamante una cuadrícula.
Es un cuadrado de 3 x 3 mm, con una
separación entre dos líneas
consecutivas de 0.25 mm. Así pues el
área sombreada y marcada L
corresponde a 1 mm². La depresión
central del cubreobjetos está hundida
0.1 mm respecto a la superficie, de
forma que cuando se cubre con un
cubreobjetos éste dista de la superficie
marcada 0.1 mm, y el volumen
comprendido entre la superficie L y el
cubreobjetos es de 0.1 mm³.

18. Aumento 10X

19. Aumento 10x

20. Consideraciones prácticas
 PARA CARGAR LA CAMARA : SE COLOCA EL CUBRE
OBJETO Y ACERCANDO LA PUNTA DE LA PIPETA O
EL CAPILAR SE LLENA POR CAPILARIDAD
 EL LLENADO DEBE HACERCE DE UNA SOLA VEZ SIN
QUE QUEDEN BURBUJAS, NI LÍQUIDOS
EXEDENTES ALREDEDOR DEL CAMPO
 NO BALANCEARLA AL ACERCAR AL MO
 PARA DISTINGUIR DE BASURAS MOVER EL
TORNILLO MICROMETRICO.
 NO DEMORARSE

21.  Elementos contados 4 mm²
X 1mm²
X N / 4
 Dado que el espesor de la cámara es 0.1 mm, para expresar el número
de elementos por mm³ deberemos multiplicar el valor X por 10.
X= (N/4) X 10
 Como se ha efectuado una dilución de 1/20, debemos multiplicar por la
dilución, es decir:
X= Nx10x20= N x 50= Nº de GB/mm³
4
 Según el ICSH, debe expresarse este resultado en Nº de GB. 10x9/l

22. Cálculos

23. Valores de Referencia
 ADULTOS : 5000 a 10.000 GB / mm³
 NIÑOS
- RN : 12.000 a 25.000 GB / mm³
- Hasta 1 año : 6000 a 18.000 GB / mm³
- 3 a 6 años : 5000 a 15.000 GB / mm³
- 6 a 12 años: 4500 a 13.500 GB / mm³

24. ACTIVIDAD
 EXPRESAR 6500 GB/mm3
 En: cel / dL
 cel / µL (notación científica)
 cel / L (notación científica)

25. CAUSAS DE ERROR
 DEL MATERIAL
 CUBREOBJETOS MAL COLOCADO
 SUCIEDAD ,LEVADURAS EN EL LIQUDO DE DILUCION
 RESTOS DE G.R.
 APELOTAMIENTO DE LEUCOCITOS
 DESGASTE
 DE TECNICA
 EXTRACCION DE SANGRE
 DILUCION (PIPETA MAL ENRASADA)
 LLENADO DE CAMARA EN FORMA DESIGUAL
 AUTOAGLUTINACION
 DEL OPERADOR
 DIFERENCIAS DE UN INDIVIDUO A OTRO
 FATIGA OCULAR

26. LEUCOCITOSIS
 FISIOLÓGICAS
- Embarazo, Lactancia, Puerperio, Período
menstrual
- Ejercicio violento, Stress.

27. LEUCOCITOSIS PATOLOGICAS
CAUSAS INFECCIOSAS
-Bacterias piógenas : Strepto,
Staphylo , Meningo y gonococo.
-Tos convulsa (Bordetella)
Leucocitosis con Linfocitosis
-Sarampión (Inc)
-Cuadros septicos : Peritonitis,
Neumonía
CAUSAS NO INFECCIOSAS
-Cuadros inflamatorios
-Post hemorragias
-Vómitos, convulsiones, crisis eclámp-
sicas, epilepsia, taquicardias
-Hipertemias no infecciosas
-Quemaduras extensas
-Sock traumático
-IMC, necrosis de tejido tumoral, pan-
creatitis.
-Leucemias
-Enfermedades metabólicas : DBT,
Coma diabético, Acidosis
-IRC
-Endócrinopatias : Cushing
- Corticoterapia

28. Leucopenias
-Constitucional (Rara) tener presente resultados previos
-Digestiva (post prandial)
-Infecciosa: fiebre tifoidea y paratifoidea
-Sepsis de mala evolución
-Casi todas las virosis (Sarampión, Varicela, Gripe, Neumonía )
-Intoxicación por benzoles o sulfas
-Hemopatías: Leucemias leucopénicas, aplasia medular, etc
-Afecciones hepatoesplénicas
-Cirrosis hepática, trombosis de la vena porta o esplénica
-Leucopenias alérgicas, shock anafiláctico
-Afecciones reumáticas
-Quimioterapia
-Leucopenias carenciales
-Colagenopatías: LES, Esclerodermia
-AINES

31. DOSAJE DE Hb
 Método de la Cianmetahemoglobina
 Fue recomendado por el Comité
Internacional para la Estandarización de
Hematología (ICSH) en 1966, modificado
en 1977 y sigue siendo hasta hoy el más
recomendado.

32. REACTIVO DE DRABKIN
 Fe(CN)6K3---------------200 mg
 KCN---------------------------- 50 mg
 K3HPO3--------------------140 mg
 Sterox Se o Triton X-100-------1 mL
 Llevar a 1L con agua destilada y ajustar el pH a
7,2 con H3PO4 0.1 N o con KOH 0.1N.
 Guardar en frasco color caramelo, a T amb,
estable 6 meses.

33. Fundamento del Método
Hb ( Fe II )
Meta Hb ( Fe III)
Fe(CN)6K3
CIANMETAHEMOGLOBINA
KCN
MAXIMO DE ABS
A 540 nm

34. Técnica
5 mL Rvo Drabkin + 20 μL sangre entera anticoagulada
5 minutos
Leer a 540 nm en espectrofotómetro o en fotocolorímetro con
filtro verde

35. Curva de calibración
 Se realiza cada vez que se prepara o
adquiere reactivo.
 Kits comerciales : 3 niveles ( bajo, normal,
alto )
 Muestra testigo de concent conocida
(trabajo con dilución al ½ y con el doble )

36. Curva de Calibración
A=Ɛ.b.C
y=ax+b
g/dL
Abs

37. ACTIVIDAD
 A=ξ b C  despejar C y especificar Unidades
(g/dL)
 Idem desde la pendiente del gráfico

38. VENTAJAS DE LOS METODOS
KIT COMERCIAL
-Controla la
linealidad del equipo
-Estado del rvo
MUESTRA TESTIGO
-Controla la linealidad del equipo
-Controla la manipulación del
material de medición volumétrico
(en forma indirecta) pues el
patrón se procesa
como si fuese una muestra
-Posible deterioro del reactivo
-Variaciones de tensión, Int de la
-Lampara,etc.

39. Para tener en cuenta
 La determinación de un patrón diario nos
permite:
-Controlar que el reactivo no ha sufrido
deterioro
-Controlar el factor humano
-Cambios en la tensión eléctrica o
funcionamiento del equipo de lectura.

40. VALORES DE REFERENCIA
Bibliografía Laboratorio
Mujeres 11,5 - 14 g% 12 – 15 g%
Varones 13,5 – 17 g% 13 – 17 g%

41. HEMATOCRITO O
VOLUMEN GLOBULAR

42. Definición
 ES EL VOLUMEN DE MASA
GLOBULAR EXPRESADO
COMO UN % EN EL VOLUMEN
DE SANGRE TOTAL

43. Técnica
1-SE CARGAN TUBOS CAPILARES:
 Sangre venosa : Sin heparina
 Punción digital: Con heparina
2-LLENAR HASTA 2/3 EL CAPILAR Y CERRAR
EN UN EXTREMO CON PLASTILINA
3-CENTRIFUGAR EN CENTRIFUGA ESPECIAL:
15000 rpm 5 a 6 min
4-LEER EN ABACO ESPECIAL

44. MICROCENTRÍFUGA

45. VENTAJAS
 RÁPIDO
 < VOLÚMEN DE SANGRE
 TUBOS CAPILARES DESCARTABLES
 MAS EXACTO YA QUE AL CENTRIFUGAR LA
SANGRE A MAYOR VELOCIDAD EL
VOLUMEN DE PLASMA ATRAPADO POR
LOS G.R. EN DICHA CAPA ES <

46. Valores de referencia
 Recién Nacido 52 – 65 %
 Varones 40 – 48 %
 Mujeres 37 – 47 %

47. VALORES BAJOS
-ANEMIAS
-FASE DE
RECUPERACIÓN
DE PERDIDA DE
SANGRE
-EMBARAZADAS
VALORES ALTOS
POLIGLOBULIA REAL
HEMOCONCENTRACION :
QUEMADURAS , ECLAMPSIAS,
SHOCK QUIRURGICO
O TRAUMATICO
ESTADOS DE
DESHHIDRATACION (VOM.
DIARREAS, DIABETICOS)
HIPOXIA DE LAS ALTURAS
FUMADORES

48. RECUENTO DE GLÓBULOS
ROJOS
 EL CONTAJE HA ADQUIRIDO MUCHA
PRESICION CON LOS METODOS
AUTOMATIZADOS
 EL RECUENTO EN CAMARA ES OBSOLETO Y
SUJETO AGRAVES ERRORES TANTO QUE
CUANDO NO SE DISPONE DE VALORES POR
AUTOMATIZACION ES MEJOR PRESCINDIR
DE ESTE DATO Y GUIARSE POR LOS
VALORES DE HTO Y HB.

49. VALORES DE REFERENCIA
 Mujeres 4 – 4.8 millones/mm³
 Varones : 4.5 -5.5 millones / mm³
 RN : 5.6 millones / mm³
 4 semanas: 4 millones/ mm³
 6 semanas: 3.6 millones/ mm³
 12 semanas : 3.8 millones/mm³
 6 a 12 años : 4.5 millones / mm³

50. INDICES HEMATIMÉTRICOS
VCM HCM CHCM
Expresa el
volumen medio
del GR
Cantidad de Hb
contenida en un
hematie
% de Hb
contenida en la
masa globular
total
90 ± 5 fL 29 ± 3 pg 30 – 34 %
Hto x 10
GR
Hb x 10
GR
Hb x 100
Hto

51. ACTIVIDAD
 EXPRESAR CON UNIDADES
 VCM (fL)
 HCM (pg)

53. ANÁLISIS DE FROTIS
SANGUÍNEOS

56. Coloración May Grüwald - Giemsa
 May Grüwald
-Eosinato – Azul de Metileno
-Metanol
 Giemsa
-Eosinato de Azur II
-Azur II
-Glicerina y Metanol

57. TÉCNICA
1-Realizar el extendido – Dejar secar- Rotular
2- Cubrir 3 minutos con MG (FIJACIÓN)
3-Agregar en igual proporción al colorante buffer o
agua común : agua destilada (1:1) con
movimientos sin eliminar todo el colorante
anterior (ACTIVACION)
4-Volcar la mezcla anterior y (enjuagar) cubrir con
Giemsa al 10% durante 15 minutos. PREPARAR
EN EL MOMENTO
5-Dejar secar – Observar con Aceite de Inmersión

58. MG
 Metanol : Agente Fijador
 Eosinato : colorea partes básicas del citoplasma
(rosado) : hematíes, gránulos de Eos, citoplasma
de granulocitos.
 Azul de Metileno: granulaciones específicas de
granulocitos, nucleolos, citoplasmas basófilos,
hematíes policromatófilos, colorea levemente el
núcleo.

59. Giemsa
 Colorea fuertemente las granulaciones
inespecíficas (azurófilas), colorea además
fuertemente los núcleos diferenciando la
cromatina.
 Tiñe también cuerpos de Howell Jolly,
anillos de Cabot y Bastones de Auer

60. RESUMIENDO…
 NÚCLEOS: En violeta rojizo
 CITOPLASMA DE LAS CELULAS
LINFOIDEAS :en azul -celeste luminoso. Los
gránulos linfoideos en rojo purpúreo
 LOS GRANULOS NEUTRÓFILOS .en rosado
pardusco
 LOS GRANULOS EOSINÓFILOS: en naranja
pardo o rojo ladrillo
 LOS GRANULOS BASÓFILOS: En azul marino
con tonalidad violácea
 ERITROCITOS en rosado rojizo

61. NEUTROFILO
BASOFILO
LINFOCITO
EOSINOFILO MONOCITO

63. Fórmula Leucocitaria
 Cayados…………0 - 2%
 Neutrófilos……….50 - 70%
 Eosinófilos……….0 – 8 %
 Basófilos…………0 – 1%
 Linfocitos…………20- 40 %
 Monocitos……….. 4 – 6 %

66. OCULARES
OBJETIVOS
PLATINA
MACRO
CONDENSADOR
MICRO

67. PARA LOS TRABAJOS PRÁCTICOS
 GUARDAPOLVO O CHAQUETILLA
 2 PARES* DE GUANTES POR PERSONA
 MATERIAL DE EXTRACION (AGUJAS, JERINGAS,
LAZO, ALGODÓN ALCOHOL, CINTA DE PAPEL)
 MARCADOR PARA ROTULAR

68. POR GRUPO DE LABORATORIO
 1 ROLLO DE COCINA X 3
 1 LITRO DE LAVANDINA (MARCA)
 1 BOTELLA DE ALCOHOL 250 CC

69. PAUTAS DE TRABAJO
 ORDEN Y ORGANIZACIÓN
 CONCEPTOS TEÓRICOS LLEVADOS A LA
PRÁCTICA (COLOQUIO)
 LIMPIEZA (ROTULADO)

70. INFORME INDIVIDUAL
 HOJA A4
 FOLIO A4
 DÍA MIÉRCOLES AL INICIO DE CLASES
G1-20

71. GRUPO 1 (15:00 – 17:00) GRUPO 2 (17:00 – 19:00)
AGÜERO CORONA ROMINA ARRÚA JOSÉ
ALARCÓN PATRICIA BARONI PIETTO MARIA
ALVAREZ JUAN MARCELO BERTONA VANNINA
ARANDA MARIA BELEN CERULLO FABIAN
BREGANT MATIAS COMPARIN LAURA
CASTILLO RÚVEDA EDUARDO DEZOTTI EDGARDO
DORNELES GABRIEL FERNANDEZ SOSA ELIANA
ESCALANTE ROSAURA
GARCIA PABLO
GONZALEZ VIANO VALERIA
GOMEZ HERNAN LEDESMA RUBEN
MONJE ANALIA MARTINEZ VALERIA
MONTAÑEZ LUCAS MENDOZA MAYRA
PENTENERO MARIANA MIJALEC TATIANA
PINTO MARÍA TOMASZUK ANA

72. FIN