Este documento discute alternativas al uso de formaldehido en anatomía patológica. Señala que el formaldehido es el fijador estándar pero también cancerígeno, por lo que se ha adoptado un enfoque de fijación mixta utilizando en un 70% el fijador Glioxal y en un 20% formaldehido. La fijación mixta permite reducir el uso de formaldehido y proporciona buenos resultados en tinción e inmunohistoquímica aunque presenta algunos desafíos para la conservación a
Psicología: Revista sobre las bases de la conducta humana.pdf
Alternativas al uso de formaldehido
1. Alternativas al uso de
formaldehido
Dr. Miguel Ángel Carrasco
Jefe de Servicio de Anatomía Patológica
Hospital General de Catalunya. Hospital Universitari Sagrat Cor. Clínica del Vallés
Jornada FormalCat. Barcelona 5 nov 2015
2. Puntos fuertes del formol
2
• Fijador “gold standard” en Anatomía Patológica:
• Estudios histopatológicos
• Estudios inmunohistoquímicos y moleculares
• Kits de farmacodiagnóstico FDA, EMA
CH2O
3. Peligros del formol
3
• Vapores irritantes
• Sensibilizante cutáneo
• Cancerígeno grupo 1, 2011 IARC
6. HOSPITAL GENERAL DE CATALUNYA
• 2002 Comité Seguridad
y Salud
• Substitución formol
• Fijador basado en
glioxal (Glyo-fixx)
7. 2014. Servicio de Anatomía Patológica
• Servicio transversal
• 26.786 muestras de biopsia y piezas quirúrgicas
• 58% HGC
• 34% HUSC
• 8% CDV
• Todo tipo de biopsias y piezas quirúrgicas
8. Uso de fijadores tisulares
8
• FIJACIÓN MIXTA. ¿Por qué no todo?
• Glyo-fixx. 70%
• Greenfix. 10%
• Formol. 20%
9. Glyo-fixx
• Concentrado. Garrafas de 3,8
lt (Shandon Thermo Fisher
Scientific)
• Agua destilada 70-75 %, Etanol absoluto 5-10 % ,
Glioxal 15-25 %, Ácido acético 3-5 %
• Dilución:
• 11,6 l agua destilada y 3,5 l etanol absoluto
• Solución de trabajo 18,9 l:
• 75-77 % agua destilada, 20-22
% etanol y 3-4% glioxal
• HGC y HUSC
C2H2O2
10. • Greenfix (DiaPath)
• Botes prellenados de 50 cc
• 15-20% etanol absoluto, 1-3% etandial (glioxal) i 70-
80% agua destilada
• Logística y costes: CDV
• Formol 4%
• HGC, HUSC y CDV
Fijadores empleados
11. • Relación fijador/tejido similar a formol
• Tiempo fijación similar
• Fijación a temperatura ambiente
• No son buenos conservantes del tejido a medio
plazo
Glyo-fixx. GreenFix
13. ESTRATEGIA FIJACIÓN MIXTA
• Reducir la fijación con formol
• Mínimo de biopsias
• Mínimo posible de la pieza quirúrgica. Evitar trabajar
sobre superficies impregnadas de formol
• Relación consumo fijadores alternativos/formol:
7-9/3-1
14. Fijación mixta en piezas quirúrgicas
•Las piezas se reciben en fresco:
• Tejido en perfectas condiciones
• Mínima manipulación de formol en quirófanos
•Fijación mixta
• Formol: Tumor una porción o todo
• Fijador alternativo: Resto del tejido
18. Fijación mixta muestras pequeñas
• Biopsias de tumores o sospechosos siempre
formol
• Mama
• Colon
• Pulmón
• SNC...
• Lesiones inflamatorias piel y enfermedades por
eosinófilos formol. En revisión cambio a Greenfix
• Resto de biopsias: No formol
24. • Disección ganglionar
• Identificación visual más fácil.
Color blanquecino
• Identificación por tacto más
difícil
• No buen conservante de
tejidos en periodos largos.
Tiempo inclusión autopsias
similar piezas. Opción de
conservación posterior tejidos
en formol
Glyo-fixx. MacroscopíaMacroscopíaMacroscopíaMacroscopía
25. • Excelente calidad
(nuclear y
citoplasmática) de los
tejidos teñidos con HE
Se pierde la granularidad
eosinófila en eosinófilos
Glyo-fixx. MacroscopíaMacroscopíaMacroscopíaMacroscopía
26. Glyo-fixx. Inmunohistoquímica
• Buenos resultados
• Dependiente plataforma
inmuno: Dako, Ventana,
Leyca.
• Protocolos diferentes de
formol
• Marcadores nucleares
difíciles
26
p16 CD3
HER2PR
Ki67
27. Glyo-fixx. Patología molecularPatología molecularPatología molecularPatología molecular
27
• Kit HER2 CISH pharmDx™ Dako. Adecuación
protocolos especialmente en tiempo de
digestión enzimática
• Estudio deleciones cromosomas 1p y 19q en
oligodendrogliomas
• RAS en neoplasia colon
• EGFR en neoplasia pulmón
• Necesidad de estudios para validación
28. Prevención y eliminación residuos
28
• Guantes nitrilo y gafas
protección
• No necesidad de
mascarillas ni vitrinas
aspiración en macros
• Residuos
• Biodegradable
• Planta de residuos
biológicos
29. Toxicidad Glioxal 40%
29
• Glyoxal is listed on Annex I of Directive
67/458/EEC in the EU chemical legislation (since
26th – 28th ATP; Annex I Index# 605-016-007)
with a classification as:
• Xn; Muta. Cat. 3; R68
• Xi; R43 May cause sensitization by skin contact.
Concentration limit for labelling 1%
• Xn; R36/38 Irritating to eyes and skin.
Concentration limit for labelling 10%
30. Toxicidad glioxal
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• Ingesta de hasta 10 mg/día
• Alimentos: Café, tostadas, fritos y asados de carnes,
pescados, setas, salchichas, aceite, salsa de soja,
cerveza, brandis, productos lácteos y verduras
fermentadas…
• Productos cosméticos hasta 100 ppm
• Humo del tabaco
31. Problemas Glyo-fixx
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• Eosinófilos, hematíes, Paneth
• Tinciones de Warthin (HP)
• No conserva bien los tejidos a medio plazo
• Alternativas para larga conservación:
• Solución alcohólica de Glyo-fixx (60% etanol).
Ausencia de estudios de validación de tiempos.
• Formol como fijador secundario
32. Problemas Inmuno e HIS con Glyo-fixx
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• Marcadores nucleares: Ki 67, TTF1, PMS2
• Comportamiento diferente de los monoclonales
según plataforma:
• Ventana, Dako, Leyca
• SISH HER 2 Ventana vs. CISH HER 2 Dako
• Algunos protocolos Glyo-fixx diferentes formol
33. Fijación Greenfix
33
• Componentes fórmula similares a Glyo-fixx
• Comportamiento tinciones similar a Glyo-fixx
• Visualización de eosinófilos, hematíes, Paneth
• Buen comportamiento en inmunohistoquimia
34. Coste fijadores alternativos
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• Coste de compra superior a formol
• Menor coste si compra en formato concentrado
• Pocos fijadores se ofrecen concentrados (Glyo-fixx)
• Manipulación tejidos formol. Coste superior
• Mesas tallado con aspiración
• Recambios filtros y mantenimiento mesas
• Eliminación residuos
• 10-20 minutos aseo diario del personal
35. Ventajas fijadores alternativos
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• Escasa peligrosidad para la salud y medio ambiente
• Fijación adecuada de las piezas
• Muy buena calidad en HE, histoquimia e
inmunohistoquimia con adecuación de protocolos
• No precisan de protección respiratoria
• Eliminación del producto menos peligrosa para el
personal
• Coste final inferior al formol
36. Desventajas fijadores alternativos
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• Pérdida granulación en eosinófilos. Glyo-fixx
• Conservación mala de los tejidos para largos
períodos si no es alcohólico. Conservación
posterior en formol.
• Marcadores nucleares en inmuno algo más
débiles
40. Conclusiones
40
• Formol y bacon cancerígenos
grupo I
• Substitución del 100% formol.
Hoy no es posible
• La fijación mixta permite
reducir consumo formol a
mínimos aceptables
• Fijadores alternativos:
• Glyoxal
• Alcohólicos
• Técnicas no estandarizadas
• Problemas interconsultas