Adn Polimerasa En Pro..

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Las ADN polimerasas son enzimas que catalizan la síntesis de ADN durante la replicación al unir nucleótidos complementarios a la cadena molde. Tienen actividad polimerasa para alargar cadenas de ADN y actividad exonucleasa para corregir errores mediante la eliminación de nucleótidos incorrectamente unidos. Existen varios tipos de ADN polimerasas que se diferencian por su estructura, función y localización durante la replicación.

Educación

CONCEPTO ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object]

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Replicación ,[object Object],[object Object]

Actividad exonucleasa 3´----- 5´ ,[object Object],[object Object]

Actividad exonucleasa 5´----- 3´ ,[object Object],[object Object],[object Object]

Tipos de ADN POLIMERASA Los tipos de ADN POLIMERASA se encuentran bien caracterizados estos se pueden diferenciar por su localización y actividad

ADN POLIMERASA I ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object]

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Presentación de María de los Ángeles Baridon: "Métodos de extracción y purificación de ácidos nucleicos" en el Curso Básico y Taller de PCR en Tiempo Real. HIGA Rossi La Plata, 22 y 23 de Noviembre, 2012. Organiza: Laboratorio de Virología y Biología Molecular H.I.G.A. R. Rossi - La Plata. Auspicia: Servicio de Docencia e Investigación - HIGA Rossi La Plata y Comunidad Vita - Biocientífica S.A.

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3.1 Fundamento de la tinción de Feulgen. La tinción de Feulgen es una técnica de tinción descubierta por Robert Feulgen y usada en histología para teñir selectivamente el material cromosómico o ADN en células. Depende de la hidrólisis ácida del ADN. Esta técnica consiste en la hidrolización del DNA mediante una dilución débil de ácido clorhídrico que libera las bases púricas, quedando libres los radicales aldehídos de las pentosas, y en la coloración con leucofuscina, que pone de manifiesto los grupos aldehído. El fundamento de este método se basa en la identificación altamente específica de ácidos nucleicos del ADN a partir del reconocimiento de los grupos aldehídos de la pentosa (azúcar). Para esto se realizan 2 pasos fundamentales: 1) Hidrólisis ácida: Se utiliza para romper los puentes de hidrogeno que unen a la doble hélice, mediante la desnaturalización de la cadena. Para esto se utiliza ácido clorhídrico (HCl), que es el componente reactivo más crítico del método, controlando la concentración del ácido, temperatura y tiempo, que depende del tipo de tejido (compactación de cromatina) y fijador empleado. Durante la hidrólisis ácida suave la mayor parte del RNA se divide en sustancias solubles y se pierde del tejido, sin ser removidos los grupos ribosil debido a la presencia de un grupo hidroxilo en la posición 2' de la ribosa, por lo que, este material no reacción posteriormente con el reactivo de Schiff. Mientras tanto el DNA es parcialmente hidrolizado siendo removidas y liberadas las bases púricas (A y G) de los residuos de deoxiribosa (depurinización) formando ácido apurínico y generando grupos aldehído (CHO) en el C1 de la pentosa, donde se encontraba unida la base nitrogenada. Este es un paso crítico por lo que hay que tener en cuenta las variables de tiempo de exposición a la hidrólisis acida, pH ([ H+]) al que se lleve a cabo la reacción, temperatura, el fijador utilizado en el tejido y el grado de compactación de la cromatina que depende de la naturaleza del tejido. 2) Tinción con Reactivo de Schiff: Los grupos aldehídos liberados por la hidrólisis de Feulgen son teñidos con reactivo de Schiff. Cualquier grupo aldehído libre endógeno y preexistente producido por el fijador (ej. glutaraldehído), tejido elástico inmaduro o algunos lípidos son removidos tratando el tejido con boro hidrato de sodio antes de ser teñido. (Ortiz, 2019) 3.2 Describir y explicar la Técnica completa. Opcionalmente, la muestra se puede contrateñir con Light Green SF amarillento. Finalmente, se deshidrata con etanol, se aclara con xileno y se monta en un medio resinoso. (Perez) 3.3 Características de las muestras que podemos teñir con esta técnica. Solamente el método de Feulgen puede considerarse estequiométrico en donde es posible observar una intensidad de coloración proporcional a la concentración de DNA, por lo que es posible determinar cuantitativamente el DNA presente en el núcleo de las células, lo que se aplica en patología

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