Curso de formación en propóleos y productos afines

CURSO DE FORMACIÓN EN PROPÓLEOS Y
PRODUCTOS AFINES
Sala de Conferencias MAT-CINAT, Campus Pbo. Benjamín Núñez

Prof. Dr. Niraldo Paulino – Pasante Académico Coordinador del Curso
El Dr. Niraldo Paulino es profesor en la Universidad Bandeirante de São Paulo y Jefe de Investigación y
Desarrollo del Grupo BIOMED en el Programa de Farmacia. Recibió su título de farmacéutico de la
Universidad Federal de Santa Catarina, Florianópolis, SC Brasil y completó su doctorado en la misma
universidad en colaboración con la Universidad Ludwig Maximilian de Alemania.
Tiene experiencia en Farmacología, centrándose en las plantas medicinales farmacología, farmacología
molecular y la señalización celular. El área especial de interés es: plantas medicinales (especies
brasileñas), propóleos, la inflamación, y los mecanismos moleculares de acción de los productos
naturales y sintéticos bioactivos.
Cuenta con varias publicaciones y patentes, es uno de los expertos líderes en investigación en los
propóleos brasileños y sus acciones y aplicaciones. Es miembro de varios comités de revisión
incluyendo Chef-Editor de la Revista de Pesquisa e Inovação Farmacêutica en Brasil.
Impartido por:
Universidade Anhanguera de São Paulo
Programa de Mestrado Profissional em Farmácia
Grupo de Pesquisa e Desenvolvimento de Biomedicamentos
Rua Maria Cândida, 1813, Vila Guilherme - São Paulo, SP
Prof. Niraldo Paulino
E-mail: niraldop@yahoo.com.br
(11) 2967-9147 (48) 9986-6003
Medical Lex Gestão de Informações e Cursos Ltda. Av. Desemb. Vitor
Lima, 260 sala 908, Ed. Madson Center Trindade - Florianópolis/SC -
CEP 88040-400. Fone 48 32261616 diretoria@medlex.com.br

Aspectos históricos y comerciales
de la utilización de los productos
de las colmenas
Parte 1:

Talk during the RLHH Journal Club Schedule
60 Great Ormond Street - London WC1N 3HR
Tel: 0845 1555 000 - Website:
http://www.rlhh.org.uk
Clase del autor en Inglaterra
Royal London Homeopathic Hospital, e no
Imperial College London, ambas em Londres na Inglaterra.

Historia del propóleo
Dibujos prehistóricos sugieren la
presencia de las abejas y la
interacción con los seres humanos.
En el antiguo Egipto los propóleos
fueron utilizados como un bálsamo
para momificar a los seres humanos
y animales muertos.
También fueron utilizados por los
sacerdotes para el tratamiento de
enfermedades inflamatorias y de la
piel.

La civilización judeo-cristiana
heredada de los egipcios la
costumbre de utilizar resina para
purificar ambientes (tales como
resina balsámica) y para el
tratamiento de lesiones de la piel.

Los sirios usaban los propóleos en el
tratamiento de infecciones y lesiones
de la piel.
La proximidad geográfica y las guerras
con civilizaciones mesopotámicas
hicieron que el enfoque y los griegos
conocían las propiedades de la resina de
propóleos, transmitirla al mundo
occidental por la antigua Roma.

En Roma los propóleos fueron
popularmente utilizados para el
tratamiento de numerosas
enfermedades.
Avicena en el siglo XI sistematizó el
uso del propóleos asignándole la
propiedad de limpiar el tejido
infectado y regenerar heridas
expuestas, incluyendo forúnculos,
inflamaciones de la boca y los
tumores.

Própolis é coletado, limpo, triturado e
percolado em condições padronizadas
(em geral em alcool) para produzir extrato.
Essas substâncias são
transformadas na colméia e
usada para fechar a abertura e
protege-la da proliferação de
micro-organismos:
bactérias,fungos e virus.
Esta substância resinosa é
chamada de própolis.
O extrato de própolis é usado para preparar
várias formulações farmacêuticas: capsulas,
cremes, spray oral, shampoos...
Abelhas coletam
substâncias
resinosas de
determinadas plantas
Propóleo

A Própolis é coletada, limpa, triturada e
percolada em condições padronizadas
(em geral em alcool) para produzir extrato.
Essas substâncias são
transformadas na colméia e
usada para fechar a abertura e
protege-la da proliferação de
micro-organismos: bactérias,
fungos e virus.
Esta substância resinosa é
chamada de própolis.
O extrato de própolis é usado para preparar
várias formulações farmacêuticas: capsulas,
cremes, spray oral, shampoos...
Abelhas coletam
substâncias
resinosas de
determinadas plantas
Propóleo

Propóleo Europeo
No Europa Central e Leste a principal
fonte botânica para produzir própolis
é o Populos nigra.
Populos nigra
Os principais componentes são Flavonóides e ésteres do Ácido
Cafeico (CAPE) e derivados allyl (ALERGENICOS).

Propóleo brasileño
Brasilia(DF)
Amazonas
Roraima
En Brasil tenemos muchas regiones fitogeográficas y muchos tipos de
propóleos (al menos 20) con diferentes constituciones químicas.
Marrón
Verde
Amazonia
Pantanal
Rojo
Bosque de las
Araucarias Mata Atlántica
Cerrado
Bosques del
mangle

Brasilia(DF)
Amazonas
Roraima
MG
SP
PR
SC
RS
Los productores de propóleos más
grandes en el Brasil están en el sur y
sureste. La mayor parte de la
producción se exporta al mercado
asiático (Japón) y Europa (Alemania)! Marrom
Verde
Producción

MG
SP
PR
SC
RS
Marrón
Verde
Baccharis dracunculifolia
Araucaria angustifoliaEucalipto citriodora
Producción
Roja Dalbergia ecastophyllum
AL
BABA

https://youtu.be/P4-eCWYlXfM
https://youtu.be/7_zAEPMTLS0
VERDEROJA

Nuestro estudio
Estudio sistemático para agregar
valor comercial al propóleo brasileiro
Este estudio tiene como objetivo
demostrar el camino tomado por un
producto natural, su prospección,
fabricación y comercialización

Nuestro estudio
Dos grandes socios
de la industria para el
estudio sistemático de
los propóleos
brasileños (marrón y
verde)
Los objetivos fueron
evaluar la toxicidad,
validar acciones
farmacológicas y
desarrollar productos
a base de propóleos
1998
1999

Estudio del propóleo brasileño
El propóleo del Brasil
Univ. Brasil Univ. Exterior Promoción
James Fearnley
Nature’s Laboratory Ltd
England - UK
Industrias
Néctar Farmácia Ltda
Belo Horizonte MG
Apis-Nativa Produtos
Naturais Ltda
Rua Caetano Lumertz, 49
Araranguá, SC

Prospección, calificación y validación de los extractos
Recogida y estandarización de los extractos
Fraccionamiento químico Aislamiento y caracterización
química de los compuestos
Ensayos biológicos
Farmacotécnicos Farmacológicos
investigación Desarrollo de la
Formulación
Control de
calidad
Farmacologia Toxicologia
Compatibilidad
Viabilidad
Forma
farmacéutica
Embalaje
Bula
Farmacotécnico
Fisicoquimico
Quimico
In vivo
In vitro
Ex vivo
DL50
Hematológia y
bioquímica
La toxicidad
sistémica y de
comportamiento
HPLC
Espectroscopia
de masas
Necessidad
Registro de
PATENTES
Aditivo para
PATENTES
Estudio farmacocinético preliminar de la formulaciónCápsulas2008
1998

La investigación científica con
propóleos brasileños
Procedencia geográficaFuente Botánica
Toxicologia AntibacterianoInflamaciónDolor Sinais
Transducionais
Biologia
Molecular
In vivo
Bioquimica
Celular
Função:
Hepática
Renal
LD50
Histologia:
Fígado
Rins
Edema de
pata
Peritonite
Pleurisia
Induzida:
Carragenina
Bradicinina
Histamina
PGF2α
PGE2 ou
Capsaicina
induzida:
Carragen.
Bradicinina
Histamina
CIM
Inibição do
crescimento
Efeito citotóxico
Cultura
celular
Patch
clamp
Kv1.3,
BKCa
Antioxidante
In vitroIn vivo
Fígado
Edema de
orelha
RAW 264.7
Jurkat
Desoxyribos
Xanthina-
oxidase
Migração
neutrófilos
Rins
Células
Kupfer
Traquéia
isolada de
cobaia
CHO e
GH3
MTT
NFκBNOMPO
Formulaciones
con propóleos
Cápsulas con extracto
seco estandarizado
Formulaciones para
uso vaginal
Formulaciones para
uso dental
Empezando en
abril de 1998
Fin en abril de
2008
Inflamatoia
Térmica
COX2
Aorta
Íleo
Hemograma
Leucócitos
Dados
Hematológicos
PGE2
Línea de Cosméticos y
cosmecéuticos
Órgãos
isolados
Traquéia

Ensayos biológicos
Farmacológicos
Los primeros estudios con muestras de propóleos estandarizados desde el sur de Brasil (P1) mostraron
actividad antinociceptiva en varios modelos de dolor en ratones y ratas, incluyendo nocicepción causado por el
ácido acético, caolín y zymozan así como la inhibición de ambas fases, neurogénica y formalina persistente
inducida dolor o dolor inducido por la capsaicina (Campos et al., 1998).
CAMPOS, R. O. P. ; PAULINO, N. ; SILVA, C. H. M. ; SCREMIN, A. ; CALIXTO,
J. B. . Anti-hyperalgesic effect of the ethanolic extract of propolis. Journal of
Pharmacy and Pharmacology, Inglaterra, v. 50, p. 1187-1193, 1998
JOURNAL OF PHARMACY AND PHARMACOLOGY
An international journal of pharmaceutical science
ISSN: 0022-3573
Copyright 2002 Pharmaceutical Press
Otras publicaciones

Trabajando representa a cuatro compuestos de propóleos brasileños
encontrado en: (1) 3-prenil-4-hidroxicinámico (PHCA), (2) 2,2-dimetil-6-
carboxyethenyl-2H-1-benzopirano (DCBEN), (3) ácido 3,5-diprenyl-4-
hidroxicinámico (DHCA) y (4) 2,2-dimetil-6-carboxyethenyl-8-prenil-2H-1-
benzopirano (DPB) y sus actividades biológicas.
MARCUCCI, M. C. ; FERRERES, F. ; GARCÍAVIGUERA, C. ; BANKOVA, V. S. ;
CASTRO, S. L. ; DANTAS, A. P. ; VALENTE, P. H. M. ; PAULINO, N. . Phenolic
compounds from Brazilian propolis with pharmacological activities.. Journal of
Ethnopharmacology, Estados Unidos, v. 74, p. 105-112, 2001
JOURNAL OF ETHNOPHARMACOLOGY
An Interdisciplinary Journal Devoted to Indigenous Drugs
The Official Journal of the
International Society for Ethnopharmacology
Otras publicaciones

También demuestran que los propóleos brasileños producen efecto relajante
en la tráquea aislado de cobaya in vitro. Este efecto fue mediado por la
producción y liberación de óxido nítrico en las neuronas nitrérgicas, e fue
indirectamente dependiente de la modulación de los canales de potasio
modulado por calcio de alta (BKCa) e intermedio (IKCA) conductancia (Paulino
et al., 2.002).
PAULINO, N. ; SCREMIN, F. M. ; RAICHASKI, L. B. ; MARCUCCI, M. C. ;
SCREMIN, A. ; CALIXTO, J. B. Mechanisms involved in the relaxant action of the
ethanolic extract of propolis in the guinea pig trachea in vitro. Journal of Pharmacy
and Pharmacology, Northern Ireland, v. 54, n. 6, p. 845-852, 2002.
JOURNAL OF PHARMACY AND PHARMACOLOGY
An international journal of pharmaceutical science
ISSN: 0022-3573
Copyright 2002 Pharmaceutical Press
Otras publicaciones

Hemos publicado un artículo sobre la actividad analgésica y antiinflamatoria de
propóleo de Baccharis dracunculifolia. Se demuestra que este propóleo
produjo efecto antiedematogenico, anti-inflamatorio y analgésico según la
evaluación de diversos modelos animales, y los métodos de biología
molecular. Los propóleos de Baccharis dracunculifolia inhibieron la
producción de prostaglandina E2 durante la fase de inflamación aguda,
reducen la producción de óxido nítrico en los macrófagos e inhiben la
activación del factor de transcripción nuclear (NFκB).
PAULINO, N. ; TEIXEIRA, C. ; MARTINS, R. ; SCREMIN, A. ; DIRSCH, V. ;
VOLLMAR, A. ; ABREU, S. R. L. ; CASTRO, S. L. ; MARCUCCI, M. C. . Evaluation
of the analgesic and anti-inflammatory effects of a Brazilian green propolis.. Planta
Medica, v. 72, p. 899-906, 2006
PLANTA MEDICA
An International Journal of Natural Products and Medicinal
Plant Research
Official Organ of the Society for Medicinal Plant Research
(GA), www.ga-online.org
Otras publicaciones

Demostró el efecto inmunomodulador de propóleo verde tipificada en la
respuesta inmune humoral y celular. El propóleo como un adyuvante de
vacunas veterinarias.
Otras publicaciones

Revisión de las indicaciones para el uso del propóleos como una terapia
nutricional adyuvante para tratar el cáncer, que se refiere al efecto sobre la
base de numerosos estudios publicados.
J. Galvao, J.A. Abreu, T. Cruz, G.A.S. Machado, P. Niraldo, A. Daugsch,
C.S. Moraes, P. Fort and Y.K. Park F. Biological Therapy Using Propolis as
Nutritional Supplement in Cancer Treatment. International Journal of Cancer
Research 3 (1): 43-53, 2007
INTERNATIONAL JOURNAL OF CANCER RESEARCH
Otras publicaciones

Evaluación de la actividad anti-inflamatoria y la biodisponibilidad del
compuesto presente en propolis verdes tipificado, como el ARTEPILLIN C.
Otras publicaciones

Evaluación de la actividad anti-úlcera de una formulación que contiene
propóleos brasileños.
Otras publicaciones

Evaluación del Gel anti-inflamatorio que contiene extracto de propóleos en
cervicite.
Otras publicaciones

Título – TYPING NATURAL PRODUCTS
País – Japão (PCT)
Descrição – Número do pedido: 2002-552654. Data de depósito: 20/06/2003.
PCT/BR01/00159. Prioridade: 22/12/00.
Nome do depositante: Maria Cristina Marcucci Ribeiro.
Nome dos inventores: Maria Cristina Marcucci Ribeiro.
Nome do procurador: Beerre Assessoria Empresarial Ltda
Título – TYPING NATURAL PRODUCTS
País – Comunidade Européia (PCT)
Descrição – Número do depósito: EP 012719175. Data de depósito: 20/06/2003.
PCT/BR01/00159 Prioridade: 22/12/00.
Nome do depositante: Maria Cristina Marcucci Ribeiro.
Título – PROCESSO DE IDENTIFICAÇÃO DE TIPAGENS DA PRÓPOLIS BRASILEIRA
País – Brasil (INPI-Rio de Janeiro)
Descrição – Número do pedido: PI 0006272-3 Data de depósito: 22/12/2000, publicada em
16/08/2002. Nome do depositante: Maria Cristina Marcucci Ribeiro (transferido para Fundação
de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo – Fapesp).
Patentes adicionales

Bases legales y regulatorios
Legislación Federal Agropecuaria (Ministerio de Agricultura, 2001) regula la
identidad y calidad de propóleos, que se fijan los requisitos mínimos de calidad
para su comercialización
A finales de 2005 ANVISA publica el registro de medicamentos como Nota de
regulación técnica a partir del propóleo si tienen indicaciones terapéuticas
comprobadas por experimentos científicos.
(www.anvisa.gov.br/medicamentos/catef/propolis.htm).
Existe una demanda para el registro de productos con indicación terapéutica, que
contienen como principio activo, propóleo, solos o en combinación.
El propóleo es un producto natural, las características físicas de madera blanda y
composición variable, recogidos de varias especies de plantas que se somete a
adición de secreciones de abejas, clasificados como opoterápico. Los requisitos
de registro se definen en la RDC No 132/2003 y prueba de seguridad y eficacia se
detalla en esta nota técnica.
Cámara Técnica de Medicamentos Fitoterápicos - CATEF

Investigación científica con
Nuevos proyectos
Empezando en
abril de 2006
Formulaciones
con propóleos
seco estandarizado
Formulaciones para
uso vaginal
Formulaciones para
uso dental
Fin en abril de
2008
Línea de Cosméticos y
cosmecéuticos

Formulaciones con
propóleos
Formulaciones
para uso vaginal
Propóleo
enjuague bucal
Solucion irrigatória en
biobulbopulpectomia
Cemento de
Recuperación
Gel vaginal con
propoleo
Ensayo clínico
multicentro
Registro de
patente
Ensayo clínico
preliminar
Producion
industrial
Farmacovigiância
Gel crema para la
mastitis bovina
Nuevos proyectos
seco estandarizado
Formulaciones para
uso dental

seco estandarizado
Produção
industrial
Farmacovigiância
Extractos especiales de
propóleos
Nuevos proyectos

Las formulaciones
para uso dental
Nuevos proyectos

Prospección, calificación y validación de proveedores
Recogida y estandarización de los propóleos y sus fracciones (tipificación)
Caracterización química de los propóleos
Ensayos Farmacéuticos y Biológicos
Farmacotécnicos Farmacológicos
Plan de
negocio
Desarrollo de
Formulación
Controle de
qualidade
Farmacologia y
eficácia
Ensaio clínico
Competitividad
Viabilidad
Forma
farmacéutica
Embalagem
Bula
Farmacotécnico
Fisico-quimico
Quimico
In vivo
In vitro
Ex vivo
Em SC
Em SP
HPLC/FIT-
CG/Fluido
supercrítico
Necessidad
Registro de
PATENTES
Enjuague bucal a base
del propóleo
Validación de los procesos químicos
Lote de
producción piloto
Validación de
los procesos
POPs de
producción
Dossier del producto al informe final
Nos USA
Nuevos proyectos

Ensayos Biológicos
Los ensayos biológicos permiten la definición de la calidad de la formulación de control, el producto, para
ensayos de eficacia y validación del producto clínico.
Farmacotecnico
Responsabilidad
1. Equipe Assessora Administrativa (3 meses)
2. Equipe do Laboratório da UFSC: Prof. Amarilis Scremin (2 meses)
3. Equipe de produção da TDV e Prof. Amarilis Scremin (2 meses)
4. Equipe da Garantia da qualidade, Prof. Amarilis Scremin e Equipe assessora
da UNIAN: Maria Cristina Marcucci. (1 mes)
Tiempo de ejecución 8 meses
1. Plan de
negocios
Competitividad
Viabilidad
Necessidad
2. Adecuacion de la
formulación
Forma
farmacêutica
Embalagem
Bula
3. Lote de
producción piloto
Validación de
los procesos
POPs de
Producción
4. Control de
calidad
Farmacotecnico
Fisicoquimico
Quimico
Patentes
Enjuague bucal
de la base de
propóleo
Fase 1 Fase 3Fase 2
Licencias
Nuevos proyectos

Propolis Natural Solution
Bioseguridad La higiene bucal línea profesional
Alcohol Gel-propóleosAlcohol Gel-propóleos
Alcohol 70GL-propóleosAlcohol 70GL-propóleos
jabón antisépticojabón antiséptico
Adultos y NiñosAdultos y Niños
Enjuague bucalEnjuague bucal
Pasta de dientesPasta de dientes
Hilo dentalHilo dental
Enjuague bucalEnjuague bucal
Reveladora de placaReveladora de placa
Carpeta para rellenos
Zn-propóleos
Carpeta para rellenos
Zn-propóleos
Solución para riego el
canal
Solución para riego el
canal
muy corto plazomuy corto plazo A corto plazoA corto plazo A medio plazoA medio plazo
Pro-up –saneante de
superficie
Pro-up –saneante de
superficie
Nuevos proyectos

Productos
Enjuague bucal propóleos, pasta de dientes y solución
oral para la halitosis

Composición química de los propóleos
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13
0
4
8
12
60
80
100 1 Ácido cumárico
2 Rutina
3 Pinobanksina
4 Quercetina
5 Kaempferol
6 Apigenina
7 Pinocembrina
8 Pinobanksina-3-acetate
9 Crisina
10 Galangina
11 Kaempferideo
12 Tectocrisina
13 Artepillin C
Conteúdo(mg/g)
Figura 1: La composición química del extracto estandarizado de propóleos utilizados en
el enjuague bucal se determinó por cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC)
utilizando un dispositivo de Merck-Hitachi (Alemania) provisto de una bomba (L-7100
modelo Merck-Hitachi) y un detector de diodos (Modelo L-7455 Merck-Hitachi). La
separación se consiguió con una columna Lichrochart 125-4 (Merck, Darmstadt,
Alemania) como se describe previamente (Marcucci et al.). La detección de los
componentes se monitorizó a 280 nm y los patrones cromatográficos fueron co-
cromatografía con el extracto. Los análisis se realizaron en un Merck-Hitachi D-7000
(Data Station Cromatografía - DAD Manager).

Índice de placa
0
50
100
150 Clorexidina
Própolis
0 5 10 0 5 10
Tempo (dias)
1515
*
* *
*
*
*
#
Índicedeplaca(%)
Figura 2: Evaluación del efecto de los enjuagues bucales que contienen clorhexidina (columna
hueca) o propolis (columna negro) sobre la relación de las placas de más de 15 días de
tratamiento evaluó cada 5 días. Los puntos representan la media de tres lecturas consecutivas
para cada individuo con un n = 10 pacientes por grupo, evaluados en cada intervalo de tiempo al
principio, y cada cinco días. * Representa un valor estadísticamente significativo de p <0,05
(ANOVA seguido de la prueba t de Student, analizados mediante el programa Graph Pad Instat) en
comparación con el inicio del tratamiento y # es una diferencia estadística entre los tratamientos
con enjuagues bucales que contengan clorhexidina y propóleo en 15 días.
50%
82%
30%
46% 40%
62%

Índice de Sangrado
0
50
100
150 Clorexidina
Própolis
0 5 10 0 5 10
Tempo (dias)
1515
*
*
*
*
* *
#
Índicedesangramento(%)
Figura 3: Evaluación del efecto de los enjuagues bucales que contengan clorhexidina (columna
hueca) o el propóleo (columna negro) del índice de sangrado gingival más de 15 días de
tratamiento evaluado cada 5 días. Los puntos representan la media de tres lecturas consecutivas
para cada individuo con un n = 10 pacientes por grupo, evaluados en cada intervalo de tiempo al
principio, y cada cinco días. * Representa un valor estadísticamente significativo de p <0,05
(ANOVA seguido de la prueba t de Student, analizados mediante el programa Graph Pad Instat) en
comparación con el inicio del tratamiento y # es una diferencia estadística entre los tratamientos
con enjuagues bucales que contengan clorhexidina y propóleo en 15 días.
18%
36%40%
56% 58%
64%

Pasta de dientes que contiene extracto de
propóleo marrón (P1) o extracto de propóleo
verde (G1)

Preparación de extractos
B r a s i li a ( D F )
A m a z o n a s
R o r a i m a
R e g i ã o N o r t e
R e g i ã o N o r d e s t e
R e g i ã o C e n t r o - O e s t e
R e g i ã o S u d e s t e
R e g i ã o S u l
BRP
BRG
---------------------------------------------
---------------------------------------------
--- BRP/BRPG
Minas Gerais
Pharma Nectar Apitherapy
Pharmacy Beekeeping Ltda –
Belo Horizonte
Santa Catarina
Empresa Apis Nativa Produtos
Naturais - Araranguá
verde (G1)

Las estructuras químicas y la concentración (en mg / ml de extracto crudo) de
los principales compuestos identificados en la muestra analizada de los
propóleos marrones (P1) de Brasil.
OH
O
OH OH
O
OH
O
OHO
O
OHO
OH
OH
C
H
C
H
OH
O
OH
OH
O
H
OMe
H
Ácido 3-prenil-4-hidroxicinâmico
(17,90)
Ácido 2,2-dimetil-6-carboxietenil-2H-
1-benzopirano (18,26)
Ácido 3,5-diprenil-4-
Hidroxicinâmico (26,21)
Ácido 2,2-dimetil-6-carboxietenil-8-
prenil-2H-1-benzopirano (11,01)
Ácido gentísico (1,94) Ácido caféico (2,06)
verde (G1)

Las estructuras químicas y la concentración (en mg / g de extracto crudo) de
los principales compuestos identificados en la muestra analizada de propolis
(G1) de Brasil.
OH
O
OH OH
O
OH
OH
OH
COOH
O
O
OH
OH
OH
H
OH
COOH
OH
COOH
MeO
Ácido 3-Prenil-4-hidroxicinâmico
(6,23)
Ácido 3,5-Diprenil-4-hidroxicinâmico
(28,69)
Ácido caféico (1,97)
Pinobanksin (35,63) Ácido p-cumárico (15,30) Ácido ferúlico (6,51)
verde (G1)

La investigación científica con
Formulacion para
uso vaginal
Farmacovigiância
Nuevos proyectos

Producto
GEL VAGINAL CON PROPOLEO BRG
Contiene extracto de propóleos brasileños tipificado BRG de Baccharis
dracunculifolia L. para usar con los adultos.
Propóleo de Baccharis se produce en sólo el 3% del territorio
brasileño y es la forma más activa de la presentación de propóleos
en el mundo. La muestra ha sido estandarizada con 13 marcadores
identificados y cuantificados.
Figura 1: La composición química del propóleo ha sido
determinada por cromatografía líquida de alta resolución
utilizando equipos Merck-Hitachi (Alemania), equipado con una
(L-7100 modelo, Merck-Hitachi) bomba y un detector de diodos
(modelo L-7455 Merck-Hitachi). La separación se logró en la
columna de la Lichrochart 125-4 (Merck, Darmstadt, Alemania)
se ha descrito previamente (Kun Prof. Yong Park, PhD). La
detección de los componentes se monitorizó a 280 nm y
compuestos estándar co cromatografió-Were con el extracto.
Fecha. El análisis se realizó en un Merck-Hitachi D-7000 (Data
Station Cromatografía - DAD Manager)

Producto
COMPOSICIÓN
Cada 4 g Gel Vaginal BRG (Própolis Extracto tipificado) gel contiene concentración
equivalente a 20 mg de resina de propóleos tipificadas BRG, obtenido de Baccharis
dracunculifolia L.
PRESENTACIÓN
Gel Vaginal BRG se presenta en tubos de 60 g (aplicador acompañados).
PROPOCLEAN: Eficaz, seguro y natural!!!

Resultados
Initial 1a. col. 2a. col
0
200
400
600
After propolis gel (5%)
**
Neutrophils(n./field)
Initial 1a. col. 2a. col
0
40
80
120
160
200
After propolis gel (5%)
***
**
Neutrophils(n./field)
Cul-de-sac Endocervix

Características físico-químicas y
químicas de los productos de las
colmenas
Parte 2:

Preparación de los extractos
1. 30 g de la resina crudo molido se extrajo con 100 ml de metanol PA.
2. En mesa de agitación (agitador) durante 24 horas
3. Filtró y se concentró en rotaevaporator para completar la eliminación de metanol
(MeOH).
4. Resultando en el extracto de metanol seco (EMP).
5. Una parte alícuota de 5 ml es secado en horno para realizar el cálculo del porcentaje
del extracto en solución.
6. Por lo tanto, el extracto de etanol de propóleos (EEP) obtenido será evaluado por su
concentración en porcentaje (peso / volumen).
30g
100 mL de
metanol -
etanol
En mesa de agitación
(Shaker) por 24 horas
se concentró en
rotaevaporador
5ml secó en
un horno
para
realizar el
cálculo del
porcentaje
del extracto
en solución
+

Análisis de propóleos y fracciones por HPLC
La composición química de las muestras de propóleos se evalúa por HPLC
(cromatógrafo de LaChrom, D-7000 modelo) empleando una columna de fase inversa
C18 y un gradiente lineal (caudal 1 ml / min) compuesto de metanol y agua acidificada
con 5 ácido fórmico%. Se utilizará una red de diodos detectores en la detección de picos.
El programa TIP fue utilizado en la cuantificación y clasificación de los resultados.
Cada una de las fracciones y compuestos aislados serán supervisados por HPLC en las
mismas condiciones.
Profa. Maria Cristina Marcucci

Propóleo de Baccharis dracunculifolia
Las abejas recogen de Baccharis
dracunculifolia una resina verde.
Los apicultores en la operación para
recoger propóleos de Baccharis
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Tipos de propóleos brasileño
Muestras de propóleos recolectados en RS (A), SC (B), PR (C) y MG (D).
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50
Retention Time (min)
0.0
0.5
1.0
1.5
Absorbance(AU)
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50
0.0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
1.2
Absorbance(AU)
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50
0.0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
1.2
Absorbance(AU)
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50
0.0
0.5
1.0
1.5
2.0
2.5
Absorbance(AU)
A
DC
B
MG
RS SC
PR

La composición química del propóleo varía de
región a región.
55% de resinas y bálsamos
30% de ceras,
10% de pólen
y metabolitos secundarios incluyendo:
Los ácidos grasos, ácidos fenólicos y sus ésteres,
flavonoides (flavonas, flavononas, chalconas, etc.),
terpenos, esteroides, b-aldehídos aromáticos y
alcoholes, sesquiterpeno, naftaleno y derivados de
estilbeno.
Química de los propóleos

La composición química de Baccharis dracunculifolia de Premium brasileña Propolis se determinó
por alto rendimiento cromatografía líquida utilizando un aparato Merck-Hitachi (Alemania),
equipado con una bomba (L-7100 modelo, Merck-Hitachi) y un detector de matriz de diodos
(modelo L-7455 Merck-Hitachi). compuestos fenólicos (mg / g) (1) de ácido cumárico (3.81), (2) la
rutina (9.87), (3) pinobanksina (3.48), (4) la quercetina (2.15), (5) kaempferol (0.78), (6 ) apigenina
(1.86), (7) pinocembrina (22:55), (8) pinobanksina-3-acetato (4.10), (9) crisina (02:49), (10) galangin
(04:14), (11) kaempferide (05:59) (12) tectochrysin (2.90), (13) ARTEPILLIN C (87,97).
Propóleo de Baccharis

Peak Name Retention time Content (mg/g)
1 Coumaric acid 8.176 3.81
2 Rutin 14.058 9.87
3 Pinobanksin 21.209 3.48
4 Quercetin 25.598 2.15
5 Kaempferol 31.946 0.78
6 Apigenin 32.611 1.86
7 Pinocembrin 38.083 22.55
8 Pinobanksin-3-
acetate
40.200 4.10
9 Chrysin 41.792 2.49
10 Galangin 46.789 4.14
11 Kaempferide 52.137 5.59
12 Tectochrysin 67.054 2.90
13 Artepillin C 72.599 87.97
Chemical markers in Propolis from Baccharis dracunculifolia
Propóleo de Baccharis

Algunos compuestos
coumaric acid apigenine chrysin
galangin kaempferol quercetin
rutin

O
OHHO
3-Prenyl 4-hydroxycinnamic acid
O
O
OH
2,2-Dimethy-6-carboxyetenil-2H-1-
benzopiran
Prenilados y Artepillin C

OH
O
O
2,2-Dimethyl-6-carboxyetenil-8-
prenyl-2H-1-benzopiran
Artepillin C®
3,5-Diprenyl-4-hydroxycinnamic
acid
HO OH
O
Prenilados y Artepillin C

Actividades farmacológicas de
propóleos y potencial terapéutico
Parte 3:

Las actividades biológicas
Propóleo
Antiviral Antimicrobiano
Fungicida Anti protozoário
Anticárie
Ikeno et al., 1991
Steinberg et al., 1996
Botushanov et al., 2004
Bueno-Silva et al., 2013
Hayacibara et al., 2005
Leitão et al., 2004

Imunomodulatório
AntiinflamatóriaAntioxidante
Hepatoprotetor
Merino et al., 1996
Basnet et al., 1996
Lin et al., 1997
Banskota et al., 2001
El-Khatib et al., 2002
Seo et al., 2003
Shukla et al., 2004
Liu et al., 2004
Antihiperalgésico
Propóleo

Própolis
ANTITUMORAL

Biological Therapy using Propolis as
Nutritional Supplement in Cancer
Treatment
Galvao, J.; Lemos, S.R.; Abreu, J.A.; Cruz, T.;
Machado, G.A.S.; Daugsch, A.; Moraes, C.S.;
Fort, P.; Park, Y.K. Paulino, N.
International Journal of Cancer
Research
Publicaciones del grupo sobre el
propóleo

Mecanismos farmacológicos de acción
antitumoral de propóleos y sus
constituyentes

APAF1Cyt C
Caspase 9
Smac
AIF
Cell cycle
G1 - S
Caspase 3
Mit
External
stimulus
Nucleus
fragmentation
DNA
La inducción de la apoptosis en células tumorales
BAX/
BAK
Estímulos repetitivos,
persistentes, inducen la
respuesta celular.
Después de la estimulación
de la célula produce
proteínas pro-apoptóticas:
BAX / BAK, que actúan en
la mitocondria
La mitocondria, fuente
de energía en la célula,
libera tres proteínas
principales
Smac proteína Diablo
modula la respuesta
apoptótica
El citocromo C se une
rápidamente a las
proteínas APAF1
formando un complejo
que activa la caspasa 9
Proteína AIF que actúa
como un factor de
transcripción nuclear
pro-apoptótica
La caspasa 9 proteína
función proteasa
apoptótica que activa la
caspasa 3
Ciclo de crecimiento y
diferenciación celular.
Definido por la etapa de la
evolución de la célula.
Caspasa 3, una proteasa
extremadamente potente,
inhibe la diferenciación de
las células G1-S
La caspasa inducida por
la fragmentación del
ADN 3 promueve
desmontar celular
programada
Por otra parte, la
caspasa 3 se transloca al
núcleo y promueve el
daño del ADN.
Cyt C
Redutase
Citocromo C reductasa
inhibe la formación de
complejos Cyt C + APAF1

APAF1Cyt C
Caspase 9
Smac
AIF
Caspase 3
Mit
External
stimulus
Nucleus
fragmentation
DNA
BAX/
BAK
Cyt C
Redutase
Green
Propolis
Artepillin C
Kimoto T, Arai S, Aga M, Hanaya T, Kohguchi M,
Nomura Y, Kurimoto M. Cell cycle and apoptosis in
cancer induced by the artepillin C extracted from
Brazilian propolis. Gan To Kagaku Ryoho. 1996
Nov;23(13):1855-9
Kimoto T, Arai S, Kohguchi M, Aga M, Nomura Y,
Micallef MJ, Kurimoto M, Mito K. Apoptosis and
suppression of tumor growth by artepillin C extracted
from Brazilian propolis. Cancer Detect Prev.
1998;22(6):506-15
Lee YJ, Kuo HC, Chu CY, Wang CJ, Lin WC,
Tseng TH. Involvement of tumor suppressor protein
p53 and p38 MAPK in caffeic acid phenethyl ester-
induced apoptosis of C6 glioma cells. BiochBiochem
Pharmacol. 2003 Dec 15;66(12):2281-9
CAPE
Akao Y, Maruyama H, Matsumoto K, Ohguchi K,
Nishizawa K, Sakamoto T, Araki Y, Mishima S,
Nozawa Y. Cell growth inhibitory effect of cinnamic
acid derivatives from propolis on human tumor cell
lines. Biol Pharm Bull. 2003 Jul;26(7):1057-9
Chen CN, Wu CL, Lin JK. Propolin C from propolis
induces apoptosis through activating caspases, Bid
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Biochem Pharmacol. 2004 Jan 1;67(1):53-66
Propolin C
Woo KJ, Jeong YJ, Park JW, Kwon TK. Chrysin-
induced apoptosis is mediated through caspase
activation and Akt inactivation in U937 leukemia
cells. Biochem Biophys Res Commun. 2004 Dec
24;325(4):1215-22
CrisinaBacharin, Drupanin e
Artepillin C
Scheller S, Krol W, Swiacik J, Owczarek S, Gabrys J,
Shani J. Antitumoral property of ethanolic extract of
propolis in mice-bearing Ehrlich carcinoma, as
compared to bleomycin. Z Naturforsch [C]. 1989
Nov-Dec;44(11-12):1063-5.
Green
Propolis
Kimoto T, Koya S, Hino K, Yamamoto Y, Nomura Y
, Micallef MJ, Hanaya T, Arai S, Ikeda M,
Kurimoto M. Renal carcinogenesis induced by ferric
nitrilotriacetate in mice, and protection from it by
Brazilian propolis and artepillin C. Pathol Int. 2000
Sep;50(9):679-89
Kimoto T, Koya-Miyata S, Hino K, Micallef MJ,
Hanaya T, Arai S, Ikeda M, Kurimoto M. Pulmonary
carcinogenesis induced by ferric nitrilotriacetate in mice
and protection from it by Brazilian propolis and
artepillin C. Virchows Arch. 2001 Mar;438(3):259-70
El propóleos induce apoptosis en células tumorales
A fragmentação do
DNA induzido pela
caspase 3 promove o
desmonte programado
da célula

Cell cycle
G1 - S
Nucleus
DAMAGE
DNA
La radiación ionizante,
ultravioleta,
quimioterapia,
Hiperoxia
External
stimulus
p53Antiapoptotic
p21
Ciclyn B1
Cdk1, 2, 4 e 6
Inhibit topoisomerase II
Inhibit DNA-Polymerase α
Proto-oncogene CAAT
Proto-oncogene Myc
Proto-oncogene STAT3
Inhibit NFκB
En respuesta a las células
que expresan p53.
Esto promueve la
transcripción de p21
P21 reprime a
expressão e/ou a
atividade de proteinas
que atuam sobre o
ciclo celular
El retraso en la maduración
de las células tumorales
Regulación de la diferenciación celular en células
tumorales
Crisin
CAPE
Artepillin C
Compostos promovem
a expressão da p21
p38

Cell cycle
G1 - S
Nucleus
DAMAGE
DNA
External
stimulus
p53Antiapoptotic
p21
Ciclyn B1
Cdk1, 2, 4 e 6
Inhibit topoisomerase II
Inhibit DNA-Polymerase α
Proto-oncogene CAAT
Proto-oncogene Myc
Proto-oncogene STAT3
Inhibit NFκB
Crisin
CAPE
Artepillin C
p38
Weng MS, Ho YS, Lin JK. Chrysin induces G1
phase cell cycle arrest in C6 glioma cells through
inducing p21Waf1/Cip1 expression: involvement of
p38 mitogen-activated protein kinase. Biochem
Pharmacol. 2005 Jun 15;69(12):1815-27
Kuo HC, Kuo WH, Lee YJ, Lin WL, Chou FP,
Tseng TH. Inhibitory effect of caffeic acid phenethyl
ester on the growth of C6 glioma cells in vitro and in
vivo. Cancer Lett. 2006 Mar 28;234(2):199-208
Shimizu K, Das SK, Hashimoto T, Sowa Y,
Yoshida T, Sakai T, Matsuura Y, Kanazawa K.
Artepillin C in Brazilian propolis induces G(0)/G(1)
arrest via stimulation of Cip1/p21 expression in
human colon cancer cells. Mol Carcinog. 2005
Dec;44(4):293-9
Regulación de la diferenciación celular en células
tumorales

Reducción de la inflamación y
la angiogénesis

Estímulos
TLR
Myd-88 IRAK
TRAF6
NIK
p50 p65
p50 p65
IKKα
IKKβ
IκBα
↑ TNF-α
↑ iNOS
↑ COX-2
↑ IL-12
↑ Inflammation
NO
PG
↑ IL1
Vasorelaxation Nutrition to cancer
Induction of VGEF Neoangiogenese
↑ TumorInduction of MMP
↑ Metastasis
Reducción de la inflamación y la
angiogénesis asociada a tumores
Quimioterápicos, LPS
Activación de los
receptores tipo TLR
Esto inicia una cascada
de fosforilación
Activación de la
quinasa IkappaB
Fosforilación de lo
inhibidor del NFkB
Liberación del
Factor de
Transcripción
Nuclear NFkB
Translocación
nuclear a la
activación de la
expresión génica
La expresión de
numerosos genes
proinflamatorios
Expresión de genes de
citoquinas IL1, 12 y
TNF-α
La ciclooxigenasa
2 expresión génica
Aumento de la
producción de
PGE2, PGF2α...
Inflamación:
aumento de la
permeabilidad
vascular,
vasodilatación, la
migración celular,
etc ...
Las condiciones
ideales para el
crecimiento y
metástasis del tumor

Estímulos
TLR
Myd-88 IRAK
TRAF6
NIK
IKKα
IKKβ
IκBα
p50 p65
p50 p65
↑ TNF-α
↑ iNOS
↑ COX-2
↑ IL-12
↑ Inflammation
NO
PG
↑ IL1
Vasorelaxation Nutrition to cancer
Induction of VGEF Neoangiogenese
↑ TumorInduction of MMP
↑ Metastasis
El propóleos reduce la inflamación y la angiogénesis
Liao HF, Chen YY, Liu JJ, Hsu ML, Shieh HJ,
Liao HJ, Shieh CJ, Shiao MS, Chen YJ. Inhibitory
effect of caffeic acid phenethyl ester on angiogenesis,
tumor invasion, and metastasis. J Agric Food Chem.
2003 Dec 31;51(27):7907-12
Hwang HJ, Park HJ, Chung HJ, Min HY, Park EJ,
Hong JY, Lee SK. Inhibitory effects of caffeic acid
phenethyl ester on cancer cell metastasis mediated by
the down-regulation of matrix metalloproteinase
expression in human HT1080 fibrosarcoma cells. J
Nutr Biochem. 2006 May;17(5):356-62.
Abdel-Latif MM, Windle HJ,
Homasany BS, Sabra K, Kelleher D.
Caffeic acid phenethyl ester modulates
Helicobacter pylori-induced nuclear
factor-kappa B and activator protein-1
expression in gastric epithelial cells. Br
J Pharmacol. 2005 Dec;146(8):1139-
47
Paulino N, Teixeira C, Martins R,
Scremin A, Dirsch VM, Vollmar AM,
Abreu SR, de Castro SL, Marcucci
MC. Evaluation of the Analgesic and
Anti-Inflammatory Effects of a
Brazilian Green Propolis. Planta Med.
2006 Aug 10;
Paulino N, Teixeira C, Martins R,
Scremin A, Dirsch VM, Vollmar AM,
Abreu SR, de Castro SL, Marcucci
MC. Evaluation of the Analgesic and
Anti-Inflammatory Effects of a
Brazilian Green Propolis. Planta Med.
2006 Aug 10;

Conclusión: el propóleo es antiinflamatorio, reduce la
producción de óxido nítrico y reduce la actividad de
NF-kappa B (NFκB: p50-p65).

Epiderm EpidermOERITEMA
Inflammatory mediator
PGE2
O2
-
Migração
Vaso
Macrophage PMN
ROS
Apoptose
or
Necrose
PGsAA
COX
OEDEMA
NO
Cytokines
PGE2
G1
Linfocyte
Carrageina
Inflammation
G1
G1
G1
G1 G1
Paulino N, Teixeira C, Martins R, Scremin A, Dirsch VM, Vollmar AM, Abreu SR, de Castro SL,
Marcucci MC. Evaluation of the Analgesic and Anti-Inflammatory Effects of a Brazilian Green Propolis.
Planta Med. 2006 Aug 10.
Este efecto fue
mediado por la
inhibición de
NFκB

Mecanismos farmacológicos
inmunomoduladores de acción del
propóleo o sus constituyentes

Carcinogenic
stimulus
Rac2 Cdc42
GTP
Rac2 Cdc42
GDP
P
+
MKK3
MKK6
p38
ELK-1MEF2C ATF2
TLR
Myd-88 IRAK
TRAF6
NIK
IKKα
IKKβ
IκBα
p50 p65
p50 p65
↑ TNF-α
↑ IL-1
↑ iNOS
↑ COX-2
↑ IL-12 ↑ Th1
↓ CD8+ ↑ CD4+
↑ B cell
↑ Cellular immunity
↑ Inflammation
NO
PG
Carcinogenic
stimulus
External mitogenic
stimulus
Activation of proteins:
Ras (GTPase)
Prenylation pos-
translational
Activation of proteins
kinase activated by
mitogen
Activation of p38-MAPK
Green
Propolis
Activation of
immunological
modulating factor
Increase the
cell immunity
Green
Propolis
Green
Propolis
La regulación del sistema inmune en los linfocitos T

Carcinogenic
stimulus
Rac2 Cdc42
GTP
Rac2 Cdc42
GDP
P
+
MKK3
MKK6
p38
ELK-1MEF2C ATF2
TLR
Myd-88 IRAK
TRAF6
NIK
IKKα
IKKβ
IκBα
p50 p65
p50 p65
↑ TNF-α
↑ IL-1
↑ iNOS
↑ COX-2
↑ IL-12 ↑ Th1
↓ CD8+ ↑ CD4+
↑ B cell
↑ Cellular immunity
↑ Inflammation
NO
PG
Carcinogenic
stimulus
Green
Propolis
Green
Propolis
Green
Propolis
Kimoto T, Arai S, Kohguchi M,
Aga M, Nomura Y, Micallef
MJ, Kurimoto M, Mito K.
Apoptosis and suppression of
tumor growth by artepillin C
extracted from Brazilian
propolis. Cancer Detect Prev.
1998;22(6):506-15
Paulino N, Teixeira C,
Martins R, Scremin A,
Dirsch VM, Vollmar AM,
Abreu SR, de Castro SL,
Marcucci MC. Evaluation
of the Analgesic and Anti-
Inflammatory Effects of a
Brazilian Green Propolis.
Planta Med. 2006 Aug 10;
Paulino N, Teixeira C,
Martins R, Scremin A,
Dirsch VM, Vollmar AM,
Abreu SR, de Castro SL,
Marcucci MC. Evaluation
of the Analgesic and Anti-
Inflammatory Effects of a
Brazilian Green Propolis.
Planta Med. 2006 Aug 10;
Paulino N, et al.,
umpublished results
La regulación del sistema inmune en los linfocitos T

El propóleo contra el estrés
oxidativo

Green
Propolis
Green
Propolis
Green
Propolis
Los propóleos regulan la respuesta antioxidante

La actividad antioxidante de propóleos
Inhibición de la oxidación directa inducida por los radicales libres:
Reducción de la peroxidación lipídica
El aumento de expresión de SOD, CAT y GSHpx
Aumento oxidorreductasa NAPHquinona
La inhibición de la xantina oxidasa y secuestro de O2-
y alcoxilo.

Actividades farmacológicas de
veneno de abeja y el potencial
terapéutico
Parte 4:

Proyecto de investigación aplicada
PROYECTO PARA EL DESARROLLO DE LOS PRODUCTOS QUE
CONTIENEN APITOXINA NORMALIZADO
Tema: Desarrollo de las innovaciones en los productos biológicos para
la aplicación anti-inflamatoria que utilizan el veneno de abeja y
fracciones
Coordenadores: Prof. Dr. Niraldo Paulino; Prof. Dr. Geferson Fischer
Área de Concentração: Farmacologia/Imunologia
São Paulo (Brasil), Janeiro de 2013

Patente internacional para la apitoxina

Composición química del veneno de abeja y sus Actividades
El veneno de las abejas, o el veneno de abeja, es la forma química en la
defensa contra los depredadores de las abejas o la invasión de su territorio.
Cuatro componentes se destacan en la composición del veneno de abeja:
Dos péptidos de bajo peso molecular, melitina, aproximadamente 50% en peso
seco; apamina a aproximadamente 3% en peso seco.
La melitina es una sustancia de acción anti-inflamatoria y es considerado el
principal agente de veneno de abeja.
Junto con Apamina, melitina estimula el sistema adrenal y pituitaria para
producir cortisol natural y otros esteroides, que desempeñan un papel
importante en la terapia y no producen complicaciones médicas asociadas con
esteroides sintéticos.
UNIAN – UFPel - MEDLEX
Proyecto de desarrollo de productos estandarizados que contienen veneno de abeja
Tema: desarrollo de la innovación en productos biológicos para la aplicación anti-inflamatorio, con
veneno de abeja y fracciones

FARMACOLOGIA Y MECANISMO DE ACCIÓN APAMINA
APAMINA
El bloqueo de
los canales
de potasio
Estimula la
corteza del
adrenal
Aumenta la
secreción de
CRH
La liberación
de ACTH
La despolarización
y la activación del
hipotálamo
Liberación
corticosteroide
Estimulación
del SNC
aumento de la
gluconeogénesis
Lipolise Catabolismo
muscular
Efectos
Pressorios
Liberación
catecolaminas
Efectos
Antiinflamatorios

COMPONENTES Massa molecular
%
(veneno seco)
Referências
PEPTÍDEOS
Melitina 2,840 40-50 Neumann et al., 1952
Apamina 2,036 2-3 Habermann et al., 1965
Peptídeo MCD 401 2,588 2-3 Fredholm, 1966
Adolapina 11,500 1.0 Shkenderov, 1982
Inibidor de protease 9,000 < 0.8 Shkenderov, 1973
Secarpina 0.5 Gauldie et al, 1976
Tertiapina 0.1 Gauldie et al, 1976
Melitina F 0.01 Gauldie et al, 1976
Procamina A, B 1.4 Nelson and O’Connor,
1968
Minimine 6,000 2-3 Lowy et al, 1971
Cardiopep < 0.7 Vick et al, 1974
ENZIMAS
Hialuronidase 38,000 1.5-2.0 Neumann & Habermann
Fosfolipase A2 19,000 10-12 Habermann & Neumann,
1957
Glucosidase 170,000 0.6 Shkenderov et al, 1979
ácido fosfomono-
esterase
55,000 1.0 Shkenderov et al, 1979
Lisofosfolipase 22,000 1.0 Ivanova et al, 1982
AMINAS ATIVAS
Histamina
Dopamina 0.13-1.0 Owen, 1971
Norepinefrina 0.1-0.7 Owen, 1982
COMPONENTES NÃO
PEPTÍDEOS

Fosfolipídeo 6 < 2.0 O’Connor et al, 1967
LIPÍDEOS
Carboidratos: Glicose &
Frutose
4.5 O’Connor et al, 1967
AMINOÁCIDOS
Ácido r-aminobutírico < 0.5 Nelson & O’Connor, 1968
Ácido B-aminoisobutírico < 0.01 Nelson & O’Connor, 1968

Fosfolipasa A (enzima)
• Actividad radioprotectora;
• mastocitolítico;
• La liberación de histamina;
• Presionando la presión arterial;
• Propiedades antigénicas;
• Este es el más alergénico de veneno de
abeja;
• Efecto antagonista en staphylococos
alfa-toxina y la toxina del tétanos;
• Efecto antitumoral;
• Está presente en la membrana
biológica
Hialuronidasa
• Ataque Polímeros selectivamente de
ácido hialurónico a los tejidos;
• Aumento de la permeabilidad capilar
(Neumann y Habermann);
• De respuesta y de propagación
propiedades inmunes de la tela;
• antigénica
• anafilatogene
Apamina
(polipéptido con 18
aminoácidos)
• antigénica;
• propiedades anti-inflamatorias

Melitina
(polipéptido que también se
compone de ácidos 26
aminoácidos que representan el
40-60% de veneno de abeja)
• antibacteriano;
• antifúngico;
• enfermedad de Lyme contra (en el experimento in
vitro)
• antitumoral;
• inhibidor del sistema nervioso central;
• sinapsis musculares y nerviosas bloqueador gangliais;
• contracción del músculo estriado y el músculo liso;
• La liberación de histamina;
• mastocitololísico;
• Radioprotección (irradiaçãoX; estudió en ratones,
Shipman y Cole, 1967);
• aumento de la permeabilidad vascular;
• hemólisis;
• bajar la presión arterial;
• antiinflamatorio;
• melitina (que representa el 40-60% de las sustancias
del veneno de abeja) no tiene propiedades
antigénicas (Orlov); ? Sin embargo, según Artemov,
los enemigos de las abejas adqueriam inmunidad
específica;
• estimulación de la hipófisis - axi suprarrenal aumenta
tanto las catecolaminas y cortisol (Brooks et al.);
• aumenta el nivel de cortisol en plasma;
• Se opera en las membranas biológicas.
• En la actualidad, este es uno de los más potentes
agentes anti-inflamatorios conocidos, y se puede
utilizar para tratar la artritis y el reumatismo.

Péptido desgranulador del
mastócitos
• En algunos estudios con animales,
en estudios comparativos con
hidrocortisona, este péptido era 100
veces más potente, mientras que un
agente anti-inflamatorio; la artritis
inducida por adyuvante. (Simics p
13)
Cardiopep
• aumento tanto en la fuerza
contráctil (beta-adrenérgico) y la
frecuencia cardíaca con poco o
ningún efecto sobre la circulación
coronaria (Brooks et al.);
propiedades anti-arrítimicas (Brooks
et al.); estimulación pituitaria - la axi
suprarrenal aumenta tanto las
catecolaminas y cortisol (Brooks et
al.)
Adolapina
• analgésico (Shkenderov, 1982);
• antiinflamatório (Shkenderov, 1982)

Prospección, calificación y validación de proveedores
Recogida y estandarización de veneno de abeja y sus fracciones
(tipificación)
Caracterización química del veneno de abeja
Las pruebas químicas para la identificación, purificación y cristalización
de proteínas en el veneno de abeja
Normalización
Separación y
purificación
de proteínas
Registro de
PATENTES
La validación de los procesos químicos
Cristalización

Se obtiene de proveedores y
socios auditados en este
proyecto
Inspección de la información
técnica sobre el producto:
1. Nombre del producto:
2. Aplicación
3. Empleo
4. Almacenamiento
5. Nombre químico
6. uso de Concentración
7. Características físicas y
químicas
8. Información adicional
Observación
9. Lote
El proceso de obtención, purificación, la normalización de las fracciones del veneno de abejas y
cristalización de proteínas proporciona una evaluación de la calidad de activos y garantiza la
reproducibilidad de los procesos de producción y producto terapéutico.
Obtención de la Apitoxina Normalización del veneno
de abeja y fracciones
LEC - IACT
Certificación de informes
analíticos
Responsabilidad 1. Equipe de gestão de processos e de fornecedores da MEDLEX
2. Equipe técnica assessora do LEC - IACT
Obtención de fracciones
del veneno de abeja
Las fracciones activas
obtenidas por socio
tecnológico de la LEC
(España)

Obtención de la Apitoxina

1. Aumento de la productividad de 1.000% en comparación con los equipos y las prácticas en Brasil y en el
mundo.
2. Aumentar la calidad de veneno de abeja.
3. Menos desgaste durante el proceso de recolección, tanto para el apicultor, así como las abejas.
INFORMACIÓN SOBRE EL EQUIPO:
- 10 grandes placas colectoras equivalentes a 40 placas de conocidos en el mercado.
- 20 porta objetos de vidrio.
- 01 balanza de precisión digital.
- 01 raspador apitoxina de porta objetos de vidrio.
- 01 tamiz.
- 01 caja de envío para el kit de recogida + 01 caja interior que mantiene la mayoría de las 40 hojas
adicionales
- 01 sistema de impulsos (instalado dentro de la caja de envío).
- Sistema de 01 que detecta y pitidos cortos.
- Sistema de secado 01 para más apitoxina las cuchillas.
Colector inteligente del veneno
Obtención de la Apitoxina

Laboratorio de Estudios Cristalográficos LEC
Iact, Csic,ugr, Av. de las Palmeras 4, 18100 Armilla, Granada,
Espanha Telefone:+34 958 18 16 43

Ensayos Biológicos
Los ensayos biológicos permiten la definición de la calidad de la formulación de control,
el producto, para ensayos de eficacia y validación de producto clínico.
Farmacoténico
Responsabilidad
1. Equipe Administrativa e de marketing da Industria Parceira
2. Equipe do Laboratório da MEDLEX
3. Equipe de produção da Industria Parceira e Assessoria MEDLEX
4. Equipe da Garantia da qualidade MEDLEX - UNIBAN
1. Estudio de
mercado
Competitividad
Viabilidad
Necessidad
2. Desarrollo de la
Formulación
Forma
farmacêutica
Embalaje
Bula
3. Lote de
producción piloto
Validación de
los procesos
POPs de la
productón
4. Control de
calidad
Farmacotécnico
Fisico-quimico
Quimico
Nano-emulsión
del veneno de
abeja y / o
fracciones

Ensayos Farmacológicos y Imunológicos
Los ensayos biológicos permiten la validación de la eficacia terapéutica del producto e investiga mecanismos de
acción. Todas las pruebas deben seguir las Buenas Prácticas de Investigación Científica (BPPC)
Farmacológico
Responsabilidad Equipe técnica da UFPel e pesquisadores associados
2013. 4 meses/ 2014. 8 meses
Ìmunológico
Edema de pata Edema de
Orelha
ArtriteDosagens Cultura RAW
264.7
Carragenina
Bradicinina
óleo de
cróton
capsaicina
ácido
araquidônico
Adjuvante de
Freund
Citocinas
Griess p/ NO
MTT p/
viabilidade
Prostagl. E2
Pleurisia
IL 1β
Substância P
Dextrana
Carragenina
Substancia P
Bradicinina
Histamina
Rota rod
Análise
Macrosc.
PGE2
PGE2
Ativ. COX-2 Ativ.NFkBCOX-2 e
iNOS
W.B e RT-
PCR
Registro de
PATENTESEl análisis estadístico Dossiê do proyeto para relatório final
Tiempo de ejecución

Ensayos Farmacêuticos e Imunológicos
Farmacológico
Edema de pata
Carragenina
Bradicinina
Prostagl. E2
Substância P
Dextrana
 Ratones machos suizos serán utilizados con un peso entre 25 y 30 g
proporcionada por las instalaciones de los animales de la Universidad
Federal de Santa Catarina.
 Los animales se mantendrán en la habitación con temperatura
controlada (23-25 ° C) en un ciclo de luz-oscuridad de 12 horas con
acceso libre al agua y piensos.
 Todos los experimentos se llevarán a cabo de acuerdo con las
normas de manipulación experimental de animales de laboratorio y las
reglas para la investigación en animales conscientes (Zimmermman,
1983), aprobado por el Comité de Ética de la UFSC.
Apitox - gel (3 dosis de actualidad)
La indometacina (10 mg / kg, V.O.)
 La pata derecha: agente flogisto;
 Lecturas de el volumen de las patas en los días 15, 30, 60, 120, 240
y 360 min.
 Grabado de la diferencia entre las patas como el índice de efecto
antiedematogenico.

Ensayos Farmacéuticos e Imunológicos
Farmacológico
Edema de
Orelha
óleo de
cróton
capsaicina
ácido
araquidônico
 Ratones machos suizos utilizados se mantendrán bajo las
condiciones experimentales descritas anteriormente
 Apitox - gel (3 dosis de actualidad)
 La indometacina (10 mg / kg, V.O.)
 La aplicación tópica de agentes flogísticos en la oreja derecha;
 Lecturas de el volumen de las orejas en el momento respectivo de 6
horas en animales tratados con aceite de crotón, 30 minutos en los
animales tratados con capsaicina y 60 minutos para los animales
tratados con ácido araquidónico.
 Grabada la diferencia entre las orejas como el índice de efecto
antiedematogenico.
Modelo Experimental descrito em Prostaglandins,1991;41(5):515-26.
Extract and compounds obtained from Mandevilla velutina inhibit arachidonic acid-induced ear oedema in mice, but
not rat stomach contraction.
Calixto JB, Zanini Júnior JC, Cruz AB, Yunes RA, Medeiros YS.
Departmento de Farmacologia (CCB) Universidade Federal de Santa Catarina, Brasil.

Farmacológico Ìmunológico
Pleurisia
Carragenina
Substancia P
Bradicinina
Histamina
Dosagens
Citocinas
PGE2
COX-2 e
iNOS
W.B e RT-
PCR
Ratones machos suizos utilizados se mantendrán bajo las
condiciones experimentales descritas anteriormente
 Azul de Evans (i.v.)
Apitox - gel (3 dosis de actualidad)
La dexametasona (0,5 mg / kg, s.c.)
 Aplicación intrapleural de agentes flogısticas;
 Recoger el fluido derramado en la cavidad pleural para evaluar el
número total de células para la evaluación de las tasas de
extravamento y de separación de plasma para las mediciones
bioquímicas: MPO; IL-4, IL-5, CCL11, IFN-γ y LTB4; IL-1β y TNF-α;
Ensayo de PGE2 (ELISA)
 La extirpación quirúrgica de los pulmones para análisis de
transferencia Western que evalúa y cuantificación de la expresión de
COX-2 y iNOS.
 “reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real (RT-PCR)" en
el homogeneizado de pulmón y el lavado pleural para evaluar la
expresión de la COX-2 y iNOS mRNA.

Farmacológico
Artrite
Adjuvante de
Freund
Rota rod
Análise
Macrosc.
 Se utilizará ratas Wistar machos, mantenido bajo las condiciones
experimentales recomendados por COBEA.
 Inyección subcutánea única de adyuvante completo de Freund (50
uL) en conjunto tibiotarsal del pie derecho;
 Gel Apitox (3 dosis tópicas) 21 días consecutivos una vez al día.
 Diclofenac sódico (10 mg / kg, po) 21 días consecutivos una vez al
día.
 Lecturas en volumen pies diariamente a las 8 am durante los 21 días
consecutivos de tratamiento.
 Grabado de la diferencia entre las patas como el índice de efecto
antiedematogenico.
 Registro fotográfico de principio macroscópica y al final del
experimento.
Pletismômetro LE 7500, serie 6063/02, Letica Scientific Instruments)
Rota Rod/RS, LE-8500, serie 1218/06, Letica Scientific Instruments)

Ìmunológico
Cultura RAW
264.7
Griess p/ NO
MTT p/
viabilidade
IL 1β
PGE2
Ativ. COX-2
Ativ.NFkB
 Se utilizarán Células RAW 264.7 (ATCC, Maryland, EE.UU.),
cultivadas en Dulbecco modificado esencial medio con 4 mM de L-
glutamina y 4,5 g / l de glucosa (DMEM, Biobras, Campinas, SP, Brasil)
suplementado con 10% suero bovino fetal inactivado (Gibco / BRL Life
Technologies, Eggenstein, Alemania).
 Las células se mantuvieron a 37 ° C, 5% de CO2 y se utiliza para
experimentos de entre 5 y 20 pasajes en crecimiento confluente y se
estimularon con 1μg / ml de LPS (E. coli, serotipo 055: B5 Sigma-
Aldrich, São Paulo, Brasil).
 Apitoxina estandarizado disuelto en DMEM se incubaron durante 20
h con LPS.
 Sobrenadante de los cultivos será utilizado para la determinación de
NO; interleucinas 1 y prostaglandina E2 por ELISA en el
sobrenadante directamente o después de tratamiento de las células
con ácido acetilsalicílico para la evaluación de la actividad COX-2.
 Las células utilizadas para la evaluación de la COX-2 de expresión
por Western blot; para evaluar la actividad de unión de NF kappa B
(ensayo de movilidad electroforética); y la evaluación de la viabilidad
celular por MTT.

Ensayos Biológicos
Los ensayos biológicos permiten la validación terapéutica, la eficiencia y el producto investiga mecanismos de
acción.
Farmacológico
8 meses
Ensayo clínico de acción
antirreumática
Ensayo clínico para otros
procesos inflamatorios
Hospitales socios de la MEDLEX
o consultas externas acreditadas
Hospitales socios de la MEDLEX
o consultas externas acreditadas
Tiempo de ejecución

Los productos farmacéuticos a
base de propóleos y veneno de
abeja
Parte 5:

Cosméticos que contienen propóleo
Condicionador
Própolis e Jaborandi
350ml
US$ 5.71
Shampoo Própolis e
Jaborandi
350ml
US$ 5.80
Gel de Própolis 70g
US$ 3.86
Jabón Glicerinado de
Própolis 90g
US$ 1.97
Gel de Própolis 70g
US$ 3.71

Productos Especiales contienen propóleos /
apitoxina
Crema de Própolis
Plus 65g
US$ 3,81
Spray de Própolis
Sem Álcool e Sem
Açúcar 33ml
US$ 2.71
Extracto de Própolis
30ml
US$ 2.86
Doctor Bee Creme
sem Cânfora 40g
US$ 5.71

Cytopropolis Bio
Chance 360
capsulas
US$ 192.00
Propocaps 90
Cápsulas
US$ 12.71
Ox Free 90 Cápsulas
US$ 17.71
Propoglicontrol
90 Cápsulas
US$ 26.85
apitoxina

Aromatizante bucal
30 ml
US$ 12.50
Línea Dental – Gel Dental 90g,
Enguague Bucal 250ml e Spray Bucal
30ml
US$ 6.28, US$ 7.00, US$ 3,33
Propoglicontrol
90 Cápsulas
US$ 26.85
apitoxina

Melitinase Plus 50 g
US$ 10.50
Xarope Propokids 200ml
US$ 7.58
apitoxina

Parte 6: Clase práctica para preparación de los extractos de
propóleos y su normalización:
Padronização extrativa:
300g de resina propolis em 700ml de etanol 96GL para preparar
1L da mistura que fica em percolação por 30 dias.
Após filtração se consegue em média 500ml de extrato a 15% de
resíduo seco e 150g de borra.
Se o preço da resina bruta é US$ 30,00/kg
Para produzir 500ml de extrato a 15% custa US$1.00
Para produzir um frasco de 30ml = 6 cents
Se pode vender este produto à 3.00 US$
500ml rendem 16 francos = US$ 50.00
Lucro por quilo de própolis US$ 20.00
Clases prácticas

Parte 7: Clase Práctica para la preparación de productos
farmacéuticos de base formulaciones propóleo:
Padronização extrativa:
Para a solução padronizada o custo por mL de própolis é 0.002
Para xarope de própolis o custo é 13 cents propolis e 10 cents
outros companentes (85g de açucar para 100ml água), com custo
final de 23 cents.
Se pode vendar um frasco de xarope por US$ 7.00
com 500 ml de extrato se pode produzir 75 frascos + US$ 530.00
Lucro por quilo de própolis US$ 500.00 para o preparo do
xarope.
Clases prácticas

Parte 7: Clase Práctica para la preparación de productos
farmacéuticos de base formulaciones propóleo:
Lucro por quilo de própolis US$ 2.500 para o preparo do
Cytopropolis.
Clases prácticas
Cytopropolis Bio Chance
360 capsulas
US$ 192.00
Que te parece?

Dudas y contactos:
Universidade Anhanguera de São Paulo
Programa de Mestrado Profissional em Farmácia
Grupo de Pesquisa e Desenvolvimento de Biomedicamentos
Rua Maria Cândida, 1813, Vila Guilherme - São Paulo, SP
Prof. Niraldo Paulino
E-mail: niraldop@yahoo.com.br
(11) 2967-9147 (48) 9986-6003
Medical Lex Gestão de Informações e Cursos Ltda.
Av. Desemb. Vitor Lima, 260 sala 908, Ed. Madson
Center Trindade - Florianópolis/SC - CEP 88040-400.
Fone 48 32261616 diretoria@medlex.com.br

MUCHAS GRACIAS...
Una selección de campeones ... Como las
abejas !!!

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