¿Qué es más importante, la carga genética con la que se nace o la nutrición? (primera parte), INFO,JULIO1947@GMAIL.COM El Suero Intra Metabólico, auxiliar en enfermedades patológicas... Por Ana Cecilia Becerril* El pescado contiene lisina y cloruro de magnesioDurante mucho tiempo se ha venido sospechando que determinadas patologías tenían su origen en procesos relacionados con el sistema inmunitario. Sin embargo, hasta tiempos muy recientes no ha sido posible definir con exactitud ciertos mecanismos patogénicos, si bien esa definición, en la mayoría de los casos no implicó contemporáneamente el diseño de una terapia eficaz para los mismos. El llegar a la conclusión científica que el asmático, el artrítico, el alérgico y determinada clase de cirróticos, por poner algunos ejemplos significativos, todos ellos eran víctimas de un proceso de desbordamiento de su capacidad inmunitaria, sólo significó llegar al umbral del problema, observarlo y tener que confesar la impotencia para abordarlo. Sólo ha sido posible aliviar esas patologías mediante maniobras terapéuticas sintomáticas, dejando el problema de fondo sin resolver. Un ejemplo emblemático de todo ello es sin duda el Síndrome de Inmuno Deficiencia Adquirida (SIDA), patología moderna con gran eco social y científico, el cual ha permitido estudiar en profundidad los mecanismos del sistema inmunológico humano. Pero como tantas veces ha sucedido en medicina, lo que tiene apariencia de modernidad y novedad, no es más que nueva forma de acercamiento y definición de problemas muy antiguos, cuando no arcaicos. Los grandes médicos de la antigüedad vislumbraron, sin los grandes medios, diagnósticos de los que hoy disponemos, que muchas patologías degenerativas eran resultantes de un proceso autoinmune. Esto ha llevado a muchos especialistas a volver sus ojos hacia terapias tradicionales, en ocasiones no sólo alternativas a la ciencia oficial sino subversivas de los postulados científicos, buscando en esas fuentes soluciones a problemas de gran envergadura en los órdenes humano, económico y social; ese tipo de patologías son insidiosas para el individuo, cuestan fortunas sus tratamientos y significan una carga social importante. Sin embargo, la experiencia ha demostrado que esas terapias, no han mejorado la situación de los pacientes y no constituyen una verdadera alternativa al arsenal terapéutico de la moderna farmacopea,

1. ESTUDIO TOXICOLOGICO
NUTRISIM
• Div. Neurociencias. Lab. Desarrollo -
Envejecimiento, Enfermedades
Neurodegenerativas.
• CIBO-IMSS. Guadalajara, México
• Dr. en Ciencias. Genaro G. Ortiz.

2. NUTRISIM
• Arginina
• Lisina
• Colina
• Cloruro de Amonio
• Cloruro de Calcio
• Cloruro de Magnesio

3. ESTUDIO TOXICOLOGICO
NUTRISIM
• 100 ratas (250 g. de peso) de la cepa
Wistar
• Grupos de 10 ratas por dosis administrada
• La administración será por vía
intraperitoneal

4. ESTUDIO TOXICOLOGICO
NUTRISIM
• Curvas de Kaplan Meyer
• Análisis histopatológico y Macroscópico
post- morten
– Hígado
– Riñón
– Pulmón
• Análisis Bioquímico

5. ESTUDIO TOXICOLOGICO
NUTRISIM
Dosis Administrada
• 0.1 ml
• 0.2 ml
• 0.3 ml
• 0.4 ml
• 0.5 ml
• 1 ml
• 2 ml
• 3 ml
• 4 ml
• 5 ml

6. Resultados
Por Observación
• No se presentó ninguna muerte.
• Ninguna alteración en su patrón de conducta

7. Resultados
Hematología y Bioquímica
• En todos los animales estudiados no se
apreció ninguna modificación de los valores
normales tanto de la citología hemática
como de la química sanguínea.

8. Resultados
Análisis Estructural
• Los órganos estudiados: hígado, pulmón y
riñón; no mostraron ninguna modificación
en el patrón citoestructural como
citoarquitectónico

9. Resultados
Análisis Morfológico
• No se apreció ninguna alteración en la
laparotomía y toracotomía; no encontramos
líquidos en cavidades ni datos de
degeneración, congestión o edema en
ninguno de los grupos estudiados.

10. Estudio Estructural y
Bioquímico del posible efecto
protector del Nutri-Sim en
cerebros de Gerbos (Mongolian
gerbils - Meriones unguiculatus)
sometidos a isquemia-reperfusión.

11. Dr. Rolando Romero Dávalos
Lic. Luis Alfredo Romero Tirado.
BIO-SIM S. A. de C. V., México
Div. Neurociencias. Lab. Desarrollo -
Envejecimiento, Enfermedades
Neurodegenerativas.
CIBO-IMSS. Guadalajara, México
Coordinador Dr. Genaro G. Ortiz.

12. La Enfermedad Isquémica
Cerebrovascular ( EVC )
• Patología que surge como resultado de
la alteración de los vasos sanguíneos
que suministran su flujo al cerebro.
• 3° causa de muerte en el mundo.

13. FACTORES
• Hipertensión
• Cardiopatías
• Tabaquismo
• Diabetes mellitus
• Consumo de alcohol
• La vida sedentaria
• La obesidad
• Anticonceptivos orales.

14. ISQUEMIA - REPERFUSION
• La isquemia es la ausencia o disminución del aporte
sanguíneo por un determinado tiempo, que lleva a un
daño celular, en ocasiones no muy específico y
delimitado. Por otro lado, la reperfusión, es el período
que sigue a la isquemia, y que se caracteriza por una
reoxigenación cerebral acompañada del restablecimiento
del aporte sanguíneo. Así pues, durante la isquemia se
genera un daño al producirse radicales libres y en la
reperfusión el daño puede ser mayor cuando se
distribuyen estos radicales libres a través de la sangre.

15. HIPOTESIS
• El Nutri-Sim protegerá del daño oxidativo
al cerebro de gerbos después de la isquemia
reperfusión.

16. HIPOTESIS NULA
• El Nutri-Sim no protegerá al cerebro
del daño oxidativo generado al realizar
isquemia-reperfusión en gerbos.

17. OBJETIVO GENERAL
• Estudiar el efecto antioxidante del
Nutri-Sim en cerebros de gerbos
(Mongolian gerbils: Meriones
unguiculatus) despues de realizar
isquemia-reperfusión.

18. Objetivos particulares
• Demostrar que existe daño neuronal (agudo
y crónico) al realizar el modelo de
isquemia-reperfusión en gerbos.
• Demostrar que existe estrés oxidativo en el
modelo de isquemia-reperfusión en gerbos.
• Estudiar el papel Nutri-Sim como protector,
en los procesos de isquemia-reperfusión
cerebral.

19. VARIABLES
• Independientes
– Nutri-Sim
• Dependientes
– Peroxidación de Lípidos de Membrana
– Oxido Nítrico (Nitratos y Nitritos)
– Glutatión Peroxidasa
– Estructura celular

20. MATERIAL
• 120 animales de la especie Meriones
unguiculatus (Gerbos)
• Anestésicos
– Droperidol
– Ketamina

21. DETERMINACIONES
• Concentración de proteínas totales:
Método Bradford.
• Peroxidación de lípidos de membrana, 4-
Hidroxialquenos (HA) y malonaldehídos
(MDA)
• Oxido Nítrico, método de Griess
• Glutatión Peroxidasa

22. GRUPOS A ESTUDIAR
1. Testigo
2. Testigo Manipulado
3. Isquemia-Reperfusión
4. Isquemia Reperfusión mas Nutri-Sim
5. Nutri-Sim

23. PROCEDIMIENTO
• Grupos 3 y 4 se someterán a una isquemia de
5 minutos
• A los 90, 120 minutos y 7 días de
reperfusión se sacrificarán con una N de 8
animales por cada tiempo.
• Rápidamente se extraerá el cerebro y sangre
del animal para realizar los estudios
experimentales

24. TECNICAS
• Anestesia con droperidol 2.5 mg/Kg S.C
• 5 minutos después se inyecta ketamina
50mg/Kg I.M.
• Tricotomía de cuello.
• Incisión horizontal sobre la base del cuello, se
diseca hasta llegar a carótidas de ambos
lados, se separa con una seda (se les colocan
pinzas para la isquemia y se retiran a los 5
minutos).

25. ESTUDIO ESTRUCTURAL
• Fijaremos por inmersión con paraformaldehido
al 4 % amortiguado en solución de Fosfatos
0.1M
• Se deshidratarán en alcoholes en forma
ascendente y se incluirán en paraplas-plus se
cortarán a 6 micras y se teñirán con
hematoxilina y eosina.
• Se analizarán en un foto microscopio Zeiss
Axioscop del que se tomarán fotografías.

26. ESTUDIOS BIOQUIMICOS
• Se realizarán en homogenizados de cerebro (area hipocampal).
• Se utilizarán los kits comerciales de la casa Oxford Biomedical Research
para medir peroxidación lipídica, Glutatión peroxidasa.
• Para la determinación de nitritos y nitratos se utilizará el reactivo de
Griess.
• Se toma tejido homogenizado descongelado 1:10, se centrifuga 14,000
rpm por 10 minutos a 4º C, se guardan alícuotas a -20ºC para calcular los
niveles de nitritos y nitratos (utilizaremos la enzima de la casa Sigma).
• Se incuban en placas a temperatura ambiente por 20 minutos. A 10 ml de
muestra se les agrega 10 ml de Griess (sulfanilamida 1%, 5% de ácido
fosfórico y NEDA 0.1% en 1:1).
• Se lee a una absorbancia de 550nm. La concentración de nitritos y
nitratos ( 0-15 nmol/ml) se calcula por comparación con las absorbancias
de las disoluciones estándar, conocidas de nitrato y nitrito sódico en agua.

27. RESULTADOS
• PEROXIDACIÓN DE LÍPIDOS
• ÓXIDO NÍTRICO
• GLUTATIÓN PEROXIDASA
• MORFOLOGÍA
– ANÁLISIS MACROSCÓPICO
– ANÁLISIS MICROSCÓPICO

28. PEROXIDACIÓN DE LÍPIDOS
LIPOPEROXIDACION MDA-4OHA, 90 MIN
40
35
30
25
20
15
10
5
0
nM/mg/Pr
TESTIGO MANIPULADO ISQUEMIA ISQUEMIA + NS NUTRI-SIM

29. PEROXIDACIÓN DE LÍPIDOS
LIPOPEROXIDACION MDA-4OHA, 120 MIN
80
70
60
50
40
30
20
10
0
nM/mg/Pr
TESTIGO MANIPULADO ISQUEMIA ISQUEMIA + NS NUTRI-SIM

30. PEROXIDACIÓN DE LÍPIDOS
LIPOPEROXIDACION MDA-4OHA, 7 DIAS
16
14
12
10
8
6
4
2
0
nM/mg/Pr
TESTIGO MANIPULADO ISQUEMIA ISQUEMIA + NS NUTRI-SIM

31. ÓXIDO NÍTRICO
OXIDO NITRICO, 90 MIN (Nitratos y Nitritos)
250
200
150
100
50
0
nM/mg/Pr
TESTIGO MANIPULADO ISQUEMIA ISQUEMIA + NS NUTRI-SIM

32. ÓXIDO NÍTRICO
OXIDO NITRICO, 120 MIN (Nitratos y Nitritos)
300
250
200
150
100
50
0
nM/mg/Pr
TESTIGO MANIPULADO ISQUEMIA ISQUEMIA + NS NUTRI-SIM

33. ÓXIDO NÍTRICO
OXIDO NITRICO, 7 DIAS (Nitratos y Nitritos)
100
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
nM/mg/Pr
TESTIGO MANIPULADO ISQUEMIA ISQUEMIA + NS NUTRI-SIM

34. GLUTATIÓN PEROXIDASA
GLUTATION PEROXIDASA, 90 MIN
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
Desaparición NADPH / Min /mg/Pr
TESTIGO MANIPULADO ISQUEMIA ISQUEMIA + NS NUTRI-SIM

35. GLUTATIÓN PEROXIDASA
GLUTATION PEROXIDASA, 120 MIN
0.8
0.7
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
Desaparición NADPH / Min /mg/Pr
TESTIGO MANIPULADO ISQUEMIA ISQUEMIA + NS NUTRI-SIM

36. GLUTATIÓN PEROXIDASA
GLUTATION PEROXIDASA, 7 DIAS
0.4
0.35
0.3
0.25
0.2
0.15
0.1
0.05
0
Desaparición NADPH / Min /mg/Pr
TESTIGO MANIPULADO ISQUEMIA ISQUEMIA + NS NUTRI-SIM

37. MORFOLOGÍA
Células Piramidales
30
25
20
15
10
5
0
TESTIGO NUTRI-SIM ISQUEMIA
5´Perfusion 90´
ISQUEMIA
5´Perfusion
120´
ISQUEMIA
5´Perfusion 7
días
NUTRI-SIM
ISQUEMIA
5´Perfusion 90´
NUTRI-SIM
ISQUEMIA
5´Perfusion
120´
NUTRI-SIM
ISQUEMIA
5´Perfusion 7
días

38. MORFOLOGÍA
Células Hipercromáticas
25
20
15
10
5
0
TESTIGO NUTRI-SIM ISQUEMIA
5´Perfusion 90´
ISQUEMIA
5´Perfusion
120´
ISQUEMIA
5´Perfusion 7
días
NUTRI-SIM
ISQUEMIA
5´Perfusion 90´
NUTRI-SIM
ISQUEMIA
5´Perfusion
120´
NUTRI-SIM
ISQUEMIA
5´Perfusion 7
días

39. MORFOLOGÍA
Células Gliales
20
18
16
14
12
10
8
6
4
2
0
TESTIGO NUTRI-SIM ISQUEMIA
5´Perfusion 90´
ISQUEMIA
5´Perfusion
120´
ISQUEMIA
5´Perfusion 7
días
NUTRI-SIM
ISQUEMIA
5´Perfusion 90´
NUTRI-SIM
ISQUEMIA
5´Perfusion
120´
NUTRI-SIM
ISQUEMIA
5´Perfusion 7
días

40. TESTIGO

41. ISQUEMIA 90´

42. ISQUEMIA 120´

43. ISQUEMIA 7 DIAS

44. ISQUEMIA + NS 7 DIAS

45. EFECTO PROTECTOR DE
NUTRI-SIM