Este documento resume los pasos clave para aislar ADN. Explica que se usa un detergente para romper las membranas celulares y liberar el ADN, sal para precipitar las proteínas, calentamiento para desnaturalizar enzimas, enfriamiento rápido para evitar degradación del ADN, trituración para romper paredes celulares, ablandador de carne para romper histonas, filtración para separar restos celulares del ADN y etanol frío para precipitar el ADN aislado.

1. ADN
La
molécula
de la vida

2. El ADN es un ácido nucleico
Biomoléculas orgánicas formadas por C, H, O, N y P.
Polímeros de monómeros llamados nucleótidos.
Dos tipos: ADN y ARN. Ambos en todas las células.
En virus solo existe uno de los dos tipos.
Función: almacenar y transmitir la información genética.
ADN
ARN

3. ¿Quién aisló por primera vez el
ADN?
Nacimiento 13 de agosto de 1844 Basilea
Fallecimiento agosto de 1895 Davos
Nacionalidad Suizo
Campo Biología y Medicina
Conocido por Ácidos nucleicos
Friedrich Miescher

4. ¿Dónde se encuentra el ADN en los seres
vivos?

5. También en las mitocondrias hay
ADN

6. Composición química del ADN
Monosacárido

7. ADN. Estructura

8. Aislamiento de ADN.
Análisis de procedimientos y resultados
Para romper las paredes celulares y permitir que el
citoplasma escape de la célula.
1.- ¿Para qué cortamos o aplastamos la muestra?

9. Aislamiento de ADN.
Análisis de procedimientos y resultados
El detergente rompe las membranas plasmáticas y nucleares y el ADN es
liberado de la célula.
2.- ¿Para qué añadimos?
Detergente

10. Aislamiento de ADN.
Análisis de procedimientos y resultados
3.- ¿Para qué añadimos?
Una vez que la célula se ha roto, los niveles iónicos cambian. Las
proteínas de las membranas, que han quedado liberadas por acción del
detergente, tienen ahora carga positiva y son atraídas por las cargas
negativas de los grupos fosfato del ADN. Esto supondría un problema para
la extracción del ADN. Al añadir sal, se produce la precipitación proteica y
se disminuye su unión al ADN.
NaCl

11. Aislamiento de ADN.
Análisis de procedimientos y resultados
4.- ¿Para qué calentamos a 60ºC?
Con ello conseguimos que las enzimas (nucleasas) que se
encuentran en las células se desnaturalicen y no puedan
romper el ADN.
Y ¿por qué durante 15 minutos exactamente?
Para que el ADN no se deteriore.

12. Aislamiento de ADN.
Análisis de procedimientos y resultados
5.- ¿Por qué enfriamos la mezcla rápidamente después del
baño maría?
Para disminuir las reacciones químicas y evitar que alguna
nucleasa remanente pueda destruir el ADN.

13. Aislamiento de ADN.
Análisis de procedimientos y resultados
6.- ¿Por qué es necesario triturar la muestra?
El licuado o batido destruye las
paredes y membranas celulares y el
ADN es liberado de la célula.

14. Aislamiento de ADN.
Análisis de procedimientos y resultados
Con el ablandador de carne (enzimas) conseguimos romper
las proteínas (histonas) a las que está unido el ADN.
7.- ¿Para qué añadimos?
Ablandador
de carne

15. Aislamiento de ADN.
Análisis de procedimientos y resultados
8.- ¿Para qué filtramos?
Conseguimos que se queden en
el filtro los restos celulares de
gran tamaño y que pase el ADN a
través de él.

16. Aislamiento de ADN.
Análisis de procedimientos y resultados
El etanol forma una capa encima del filtrado.
El alcohol deshidrata el ADN haciendo que
su densidad disminuya y se sitúe en la
interfase entre los dos líquidos. El ADN es
insoluble en etanol frío pero soluble en etanol
a temperatura ambiente.
Alcohol
(Etanol)
muy frío
9.- ¿Para qué añadimos?