Batería de identificación de entero bacterias

1. ENTEROBACTERIAS

2.  Principio: la oxidasa en presencia de O2, citocromo c y un
reactivo para oxidasa (oxalato de dimetil-p-fenilendiamina)
oxida el reactivo a un compuesto coloreado – indofenol.
 Procedimiento: Discos de oxidasa
-Discos húmedos impregnados con
H2O destilada estéril – caja petri
-Colonias de un medio sólido
 Resultados: color rosado a púrpura en segundos

3.  Precauciones:
◦ Precaución con Pseudomonas spp.– no todas las especies
son positivas.
◦ Utilizar asa o aguja de inoculación de PLATINO o plástico.
No asas o agujas de inoculación de otros materiales (Hierro)
– usar hisopos o palillos. – Falsos positivos.
◦ Falsos negativos en cultivos mixtos con Pseudomonas y
Neisseria especies. Pseudomonas spp. produce una
sustancia que inhibe la producción de oxidasa por Neisseria
spp.

4.  Principio: capacidad de fermentar glucosa, lactosa y sacarosa,
producir gas y ácido sulfhídrico (H2S).
 Tiosulfato de sodio (Fe3+) y H2S – Sulfuro de Hidrogeno
(negro)
 Indicador: Rojo fenol (ácido-amarillo)
(alcalino-rojo)
 Color del medio: rojo
 Inoculación:picar el fondo y extender sobre la superficie del
medio.
 Incubación: 18 a 24 horas a 37ºC

5.  Precauciones:
◦ Leer los tubos entre 18 a 24h
◦ Precipitado negro de H2S en gran cantidad – asumir que
existe una condición ácida en el fondo.
◦ Escribir correctamente los resultados.
◦ Al hacer punción no usar asa de inoculación – falsos
positivos de formación de gas.

6. 1-Pico alcalino/fondo ácido (pico rojo/fondo amarillo): el
microorganismo solamente fermenta la glucosa. K/A

7. 2-Pico ácido/fondo ácido (pico amarillo/fondo amarillo): el
microorganismo fermenta glucosa, lactosa y/o sacarosa. A/A

8. 3-Pico alcalino/fondo alcalino (pico rojo/fondo rojo): el
microorganismo es no fermentador de azúcares. K/K

9. 4-La presencia de burbujas, o ruptura del medio de cultivo,
indica que el microorganismo produce gas a partir de Glucosa
5-El ennegrecimiento del medio indica que el
microorganismo produce ácido sulfhídrico

10.  Principio: capacidad para utilizar citrato como única fuente de
carbono y fosfatos de amonio como única fuente de nitrógeno,
produciendo alcalinidad.
 Indicador: azul de bromotimol (ácido-amarillo - no se observa)
(alcalino-azul de Prusia oscuro)
 Color del medio: verde
 Inoculación:extender sobre la superficie del medio.
 Incubación: 24 a 48 horas a 35-37ºC

11.  Precauciones:
◦ Falsos positivos o coloración amarilla pálida– inóculo es muy
grande.
◦ Falsos positivos – cuando se arrastra carbohidratos o
proteínas de otros medios – inocular primero este medio o
flamear el asa.
◦ La intensidad del color puede variar.

12.  Positivo:
◦ Crecimiento con intenso color azul en el pico de flauta.
◦ En algunas especies que se sabe que son Citrato positivo:
Crecimiento de colonias pero sin cambio de color del medio
– falta de tiempo de incubación 24h
 Negativo: sin crecimiento y/o ningún cambio en el color verde

13.  Principio: capacidad para hidrolizar la urea en dos moléculas
de amoniaco por acción de la ureasa con alcalinidad resultante.
 Indicador: Rojo fenol (ácido-amarillo)
(alcalino- rosado rojo)
 Color del medio: amarillo-naranja
 Inoculación: Líquido: inóculo denso y agitar con suavidad.
Sólido: estriar
 Incubación: 6 (Proteus spp.) 18 y 24h (algunas cepas de
Klebsiella spp., Enterobacter spp.) a 35-37ºC

14.  Precauciones:
◦ No calentar ni autoclavar la urea – se descompone por
calentamiento.
◦ Temperatura de incubación, cantidad de sustrato utilizado o
ambos pueden alterar la producción de ureasa.

15.  Positivo:
◦ Color rosado-rojo en todo el medio (líquido o sólido),
◦ Color rosado-rojo solo en pico de flauta.
 Rosado intenso y rápido – Proteus spp.
 Rosado débil – Klebsiella pneumoniae
 Negativo: amarillo o amarillo pálido

16. MOVILIDAD
 Principio: ver la movilidad de las bacterias que contienen
flagelos. Existen bacterias móviles que producen variantes
inmóviles.
 Color del medio: morado-lila (semisólido)
 Inoculación: punción con aguja de inoculación- verticalmente
 Incubación: 18 y 24h a 35-37ºC
 Precauciones:
◦ No agitar bruscamente el tubo – falsos negativos

17.  Positivo:
◦ Microorganismos que migran desde la línea de siembra y
difunden en el medio, produciendo turbidez en todo el
tubo.
 Negativo: crecimiento solo a lo largo de la línea de
inoculación, resto del medio permanece claro

18. INDOL
 Principio: capacidad del microorganismo de separar indol a
partir del triptófano. El indol es detectado por el uso de un
reactivo.
 Reactivo: R. de Ehrlich (Alcohol etílico) – xileno o eter
R. de Kovacs (Alcohol amílico) – ESTE VAMOS A USAR
 Color del reactivo: amarillo pálido
 Modo de uso: R. de Kovacs 3-5 gotas de reactivo y agitar el
tubo con suavidad.
 Incubación: 24 a 48 horas a 37ºC
 Precauciones:
◦ Reactivos, deben estar en frasco ambar y refrigerados 4 a
8ºC. Estabilidad de semanas.

19.  Positivo:
◦ En segundos aparece un anillo rojo o fucsia brillante.
 Negativo: No hay ningún anillo. Aparece una capa del color
del reactivo (amarillo).
 Variable: color anaranjado (escatol precursor del indol)

20. ORNITINA
 Principio: capacidad del microorganismo para descarboxilar un
aminoácido (ornitina – ornitina descarboxilasa) y formar una
amina produciendo alcalinidad del medio.
 Indicador: purpura de bromocresol
(ácido-amarillo)
(alcalino- púrpura)
 Color del medio: purpura
 Incubación: 24 a 48 horas a 37ºC

21.  Positivo:
◦ Color del medio: púrpura
 Negativo: color amarillo en el fondo del tubo que puede ser
púrpura al final.

22.  Principio: capacidad del microorganismo para descarboxilar
un aminoácido (LISINA) y formar una amina (Cadaverina)
produciendo alcalinidad del medio. Produce gas y ácido
sulfhídrico (H2S). Desaminación de la lisina esto produce un
ácido alfa-ceto-carbónico
 Tiosulfato de sodio (Fe3+) y H2S – Sulfuro de Hidrogeno
(negro)
 Indicador: purpura de bromocresol
(ácido-amarillo)
(alcalino- púrpura)
 Color del medio: purpura
 Inoculación: punción y estriado en pico de flauta
 Incubación: 18 a 24 horas a 37ºC

23. 1- Decarboxilación de la lisina:
Positivo: Pico violeta/fondo violeta.
Negativo: Pico violeta/fondo amarillo.

24.  2-Desaminación de la lisina:
Pico rojizo/fondo amarillo. Esto sucede con cepas del género
Proteus, Providencia y alguna cepas de Morganella spp.

25.  3-Producción de ácido sulfhídrico
Positivo: Ennegrecimiento del medio
 4-Producción de gas

26.  Principio: capacidad del microorganismo para desaminar
(fenilalanina deaminasa) la fenilalanina (ac. Fenilpirúvico)
produciendo acidez del medio.
 Reactivo: Cloruro férrico 10%
 Color del medio: amarillo pálido
 Color del reactivo: amarillo
 Inoculación: estriado en pico de flauta
 Incubación: 18 a 24 horas a 37ºC
 Modo de uso: Cloruro férrico 5 gotas al tubo inclinado –
esperar 1 a 5 min.

27.  Diferenciar Morganella morganii biogrupo 1 y 2, Proteus spp.
y Providencia spp., de la mayoría de otros miembros de la
familia Enterobacteriaceae
 Positivo: desarrollo de color verde pálido a intenso en el pico
de flauta y en el líquido de condensación.
Negativo: sin cambios de color. El medio permanece amarillo
debido al color del reactivo cloruro férrico.

28.  Principio: Identificación de organismos que fermentar la glucosa,
pero rápidamente convierten los productos ácidos en acetoina y
2,3-butanodiol. Al añadir los reactivos de VP la acetoina (si está
presente) es convertida a diacetil, que reacciona con los
nucleótidos de guanidina de la peptona para producir un color
rojo.
 Reactivo: alfa naftol al 5% en alcohol etílico absoluto e hidróxido
de potasio al 40%.
 Color del medio: amarillo claro
 Color del reactivo: ligeramente pardo o cobre
 Inoculación: suspender las colonias en el caldo
 Incubación: 18 a 24 horas a 37ºC
 Modo de uso: Añadir 0,6 ml de alfa naftol y 0.2 ml de hidróxido
de potasio. No agitar el tubo. Dejar a temperatura ambiente
durante 10-15 minutos.

29.  Positivo: Desarrollo de un color rojo en pocos minutos.
Negativo: Sin cambio de color después de la adición del
reactivo.

30.  Principio: Identificación de organismos que fermentar la
glucosa, con generación de productos ácidos (ác. Láctico, ác.
Acético y ác. succínico) que confieren un pH bajo al caldo de
cultivo. Al adicionar rojo de metilo en un medio ácido se
identifica una coloración roja.
 Reactivo: rojo de metilo al 0.04 %
 Color del medio: amarillo claro
 Color del reactivo: amarillo claro
 Inoculación: suspender las colonias en el caldo
 Incubación: 18 a 24 horas a 37ºC
 Modo de uso: Añadir 5 gotas rojo de metilo. NO agitar el
tubo. Observar la coloración.

31.  Positivo: Desarrollo de un color rojo en pocos minutos.
Negativo: Sin cambio de color después de la adición del
reactivo.

32.  Greenwood, D., et al., (2007). Medical Microbiology.17th Edition.
England. Elsevier.
 Jean F. MacFaddin. (2003). Pruebas Bioquímicas para la
Identificación de Bacterias de Importancia Clínica. Argentina:
Panamericana.