Este documento describe diferentes pruebas para detectar casos de tuberculosis drogorresistente. Explica las pruebas fenotípicas como el método de proporciones en medio sólido y los medios líquidos como BACTEC. También cubre las pruebas genotípicas como Genotype MTBDRplus y GeneXpert MTB/RIF. Concluye recomendando pedir pruebas rápidas a todos los pacientes y usar BACTEC, MODS o GeneXpert para muestras con baciloscopía negativa cuando se requiera un resultado rápid

1. DETECCION DE CASOS DE TB
DROGORRESISTENTE
JOSÉ GABRIEL CORNEJO GARCIA
MEDICO NEUMOLOGO
HOSPITAL ARZOBISPO LOAYZA

2. Tipos de Prueba de Sensibilidad
Pruebas Fenotípicas Pruebas Genotípicas

3. Fenotípicas Genotípicas
• Modelo viabilidad
celular
• Observación
directa o indirecta
de Mtb en
presencia de
antibióticos
• Presencia de genes
específicos de Mtb
• Secuencias
genéticas
relacionadas a la
presencia de Mtb y
mutaciones
asociadas a
resistencia

4. Pruebas fenotípicas
• El gold estándar
es el método de
proporciones en
medio sólido de
Lowenstein-
Jensen.
• Se evalua la
relación en el
número de
colonias.
<1% susceptible
>1% resistente

5. Tiempo para obtener resultado de
una prueba de sensibilidad
Proporciones Lowenstein-Jensen
INH02-baja Resistente
INH1-alta Resistente
EMB/ETB Sensible
SM-alta Sensible
RIF Resistente
PZA Resistente

6. Es necesario pruebas de
sensibilidad rápidas
• También pueden ser fenotípicas o genotípicas.
• Estas deben tener las siguientes características:
▫ 1. Alta sensibilidad y especificidad.
▫ 2. Bajo costo
▫ 3. Facilidad técnica.
▫ 4. Bajo riesgo en bioseguridad

7. PS rápidas fenotípicas
• Las pruebas disponibles son:
▫ Medios líquidos: BACTEC 460 y BACTEC 960
o MGIT.
▫ Griess.
▫ MODS.

8. • Los medios líquidos tienen mayor sensibilidad
que los medios sólidos ( Lowenstein-Jensen).
• El resultado puede estar en 10-15 días y la PS en
otros 10-15 días.

9. BACTEC TB 460 MGIT

11. GRIESS
• Es una prueba fenotípica desarrollada en el
Instituto Central de Tuberculosis de Moscú.
• Es un método colorimétrico basado en la acción
de la nitrato reductasa.
• Se utiliza medios de L-J al cual se agrega
NaNO3.
• Se requiere que el esputo sea positivo y de un
volumen mínimo de 3 ml.

12. En 2 tubos con medio
de cultivo se agrega
0,2 ml de sedimento
del esputo
En otros 2 tubos a lo
anterior se agrega en
uno H y en el otro R en
concentraciones críticas

13. • Luego de 28 días de incubación se agrega el
reactivo, con la finalidad de detectar la
conversión de nitratos a nitritos, que es la
actividad de la enzima nitrato reductasa.

15. • En el Perú la prueba fue validada en el 2003 por
el Instituto Nacional de Salud y por el
Laboratorio del Estado de Massachusetts.
• Esta disponible desde el 2006.

17. MODS
• El MODS o Microscopic
Observation Drug
Susceptibility, es un
método fenotípico basado
en medio líquido.
• El crecimiento de M.
tuberculosis es mas
rápido en medios
líquidos.
• El crecimiento se observa
por el crecimiento y
formación de cordones.

18. • Por lo tanto puede servir tanto para el
diagnóstico de tuberculosis y al agregar
antibióticos a las muestras y comparando con los
controles también para tuberculosis MDR.
• Requiere el uso de microscopio de luz invertida.
• El resultado se puede dar en 7 días.
• El costo es de 2 dólares por muestra.

22. Pruebas rápidas genotípicas
• Principalmente basadas en la amplificación de
ácidos nucleicos siendo la técnica mas usada la
reacción en cadena de la polimerasa ( PCR ).
• Estas pruebas pueden servir para el Dx y como
prueba de sensibilidad.
• No sirven para monitorizar el tratamiento
porque se puede detectar ácidos nucléicos de
micobacterias no viables.

23. Genotype MTBDRplus
• Se puede usar en cepas aisladas en medios
sólidos o líquidos ( método indirecto ).
• También en muestras de esputo frotis positivo
( método directo ).
• Detecta mutaciones en el gen rpoB ( resistencia
a R ), en el gen katG ( resistencia a altas dosis
de H), y en el gen inhA ( resistencia a bajas
dosis de H).
• Los resultados pueden estar en 72 horas.

24. H R
Sens 91,4% 98,4%
Espf 99,7% 99,1%

25. Genotype MTBDRsl
• Es un método genotípico de utilidad en la
detección rápida de casos XDR.
• Evalúa la resistencia a quinolonas por detección
de mutaciones en el gen gyr A que codifica la
enzima DNA girasa.
• La resistencia a aminoglicósidos es por mutación
en el gen rrs que codifica el RNA 16S.
• Ademas detecta resistencia a E por mutación en
el gen embB que codifica el arabinosil
transferasa.

27. GeneXpert MTB/RIF
• Es una prueba rápida genotípica completamente
automatizada.
• Es un test que sirve para el diagnóstico de TB y
de resistencia a R, por medio de PCR en tiempo
real para amplificar una secuencia específica del
gen rpoB.
• Se puede realizar en muestras con baciloscopía
positiva o negativa.

28. • La monorresistencia a R es poco común, la
presencia de resistencia a R esta asociado en más
del 90% a MDR.
• Por lo que el GeneXpert sirve también para el
diagnóstico temprano de MDR.

29. • Los reactivos necesarios para la lisis bacteriana,
extracción de acido nucléico, y amplificación; así
como la muestra se colocan en un cartucho
plástico.
• El volumen necesario de muestra para el estudio
es de solo 1 ml.

30. • El único paso manual es el agregar un buffer
bactericida a la muestra de esputo antes de
colocarlo en el cartucho.
• El riesgo en bioseguridad es mínimo, debido a
que no se libera aerosol.
• Luego el cartucho es colocado en el dispositivo
GeneXpert.

32. Sensibilidad HIV (+) 93,9%
Sensibilidad HIV (-) 98,4%
P= 0,02

33. CONCLUSIONES:
• Se debe pedir PS rápidas a todos los pacientes.
• En muestras Bk positivas se puede pedir
cualquier tipo de prueba.
• En muestras Bk negativas se puede pedir
BACTEC, MODS, o Xpert; las que también
sirven para Dx de TB.
• Si se requiere un resultado con mucha rápidez se
sugiere Genotype, Xpert, o MODS.

34. • La desventaja de Xpert es que no evalúa la
resistencia a H.