El documento investiga la correlación entre los trastornos de la espermatogénesis y el contenido de ARNm CYP2E1 en los testículos de ratas con alcoholismo experimental o diabetes tipo 1. Se utilizaron modelos de ratas con alcoholismo crónico y diabetes inducida. Los resultados mostraron que el consumo crónico de alcohol y la diabetes dañan la función reproductiva a través de la producción de ROS mediada por CYP2E1, y que el alcoholismo crónico aumenta la glucemia, lo que vincula sus efectos con los de la diabetes en la

1. Paola Rangel
Daniel Rodríguez
Tercer semestre
2014
UPB

2. INTRODUCTION
Spermatozoa
Primordial
germ cells
Mitosis
Meiosis
Spermatocytogenesis
Spermatidogenesis
Spermiogenesis

3. ALCOHOLISM
It is a condition that creates a strong need for
alcohol, so that there is a physical dependency on it,
manifested through certain withdrawal symptoms
when intake is not possible

4. DIABETES
Is a chronic condition that is
triggered when the body loses its
ability to produce enough insulin
or use it effectively.
RESULT
a person with
diabetes does not
absorb glucose
properly
hyperglycemia
damaging the tissues

5. causes the
potentially lethal
complications for
health

6. Diabetes type
1: insulin
deficient
Diabetes type 2: insulin
resistance
Diabetes insipidus:
ADH complete
deficient or
relative deficient,
or its resistance

7. • CYP2E1: a member of the cytochrome P450 mixed-function
oxidase system, is involved in the metabolism of
xenobiotics in the body.
- Is an important enzyme for the conversion of ethanol to
acetaldehyde and to acetate in humans.

8. OBJETIVE
The aim of the study as investigate the correlation
between spermatogenesis disorders and CYP2E1
mRNA contents in testes of rats with experimental
alcoholism or type 1 diabetes

9. MATERIALES Y MÉTODOS
• Animales: usaron ratas wistar por recomendación de la
convención europea para la protección de animales
vertebrados utilizados para la experimentación y otros
fines específicos y aprobado por el comité de cuidado y
uso de animales institucionales.
 La isoforma CYP2E1 está presente en humanos y en los
ratones de laboratorio.

10. • Modelos experimentales:
1. Modelo de alcoholismo: Emplearon la autoadministración
voluntaria de alcohol en ratas. Se les dio agua con una
solución de etanol al 15% durante 150 días.
 Esto fue utilizado para la reproducción del modelo de
alcoholismo crónico experimental.

11. 2. Modelo de diabetes tipo 1: las ratas fueron inyectadas
con una dosis intraperitoneal única de STZ en tapón de
citrato.
 Para evaluar el estado diabético inducido.

12. Estimación del estado del epitelio
espermatogénico:
Lo fijaron en
una solución
al 10% de
formalina
neutra,
deshidratado
en soluciones
de etanol y
embebidos en
parafina
Se tiñeron
las placas
con
hematoxilina
y eosina.
Se observó al
microscopio en
100X y 400X
La determinación del
índice espermatogénico
se basó en los tipos y %
de células germinales en
cada etapa presentado
en el epitelio seminífero

13. Escala
1
Solo
espermatogonias
presentes
2
Espermatogonias
y espermatocitos
presentes
3
Espermatogonias,
espermatocitos y
espermatides
presentes
4
Espermatogonias,
espermatocitos y
espermatides redondas
presentes con hasta 25
espermatides tardías por
túbulo

14. * Simultáneamente los cambios cualitativos del epitelio
espermatogénico:
Células de
exfoliación
Epitelio de
descamación de la
membrana basal y
del túbulo
 Se usó para la evaluación de parámetros morfológicos y
morfo métricos y los índices de espermatogénesis
Presencia de
regiones de
células libres “
ventanas”

15. PCR RT-PCR
 Amplificación
directa de un
gen o un
fragmente de
DNA o
indirecta de
un RNA
presentes en
mezclas de
diversas
fuentes
 Amplificación del
RNA a través de
la síntesis previa
de su DNA copia.
 Usa una
transcriptasa
inversa seguido
de varios ciclos
de PCR
convencional.
Con ello se puede
determinar la
expresión de genes
en diversos tejidos.

16. Desnaturalización:
-Incubación breve a
una Tº entre 90-97ºC
Alineamiento:
-Hibridación de las
hebras sencillas del DNA
primers y DNTp’s.
- Tº de 37-65ºC
Síntesis:
-DNA polimerasa elonga los
primers.
- La replicación ocurre en dirección
5’-3’ a partir del extremo 3’OH de
cada cebador.

17. - Electroforesis en gel de agarosa al 2%:
se refiere a la migración de partículas o solutos cargados en un
medio liquido, bajo la influencia de un campo eléctrico.
Los productos de la PCR fueron:
Separados por electroforesis
en gel de agarosa al 2%
Aclarados con bromuro de
etidio
Visualizados bajo un
transiluminador UV

18. RESULTADOS

23. DISCUSSION
AUTHOR COMENT YES/NO
La vignera s,
Condorcili RA,
Balercia G, Vicari E,
Calogero AE (27)
Experimental evidence
suggests that etanol is
toxic for Leydig cells,
although dose-dependent
effects of
alcohol on humans
spermatogenesis are
not well Known
Yes
Schoeller Erica,
Albanna Gabriella,
Frolova Antonina,
Moley Kelle (38)
Whether the effects of
diabetes on fertility are
mediated thourgh
testicular insulin
insufficiency or thourgh
systemic effects of
diabetes
Yes

24. AUTHOR COMENT YES/NO
Cederbaum AL (41) With respect to reactive
oxygen species (ROS)
formation, CYP2E1
appears to stand out
against other CYP-enzymes,
becouse it
obviously possesses a
higher oxidase-activity
Yes
Fujii J, Tsunoda S, That almost regardlees of
the exact celular target of
ROS within the
reproductive system, the
most common
morphological
consequence of such
injury is a general
disturbance of
spermatogenesis,
becouse of its great
sensitivity
Yes

25. CONCLUSIONS
Cellular injury in testicles is
caused by ROS that are
produced in the process of
metabolism catalyzed by
CYP2E1.
The chronic alcohol
consumption beside the
consequences on liver
function, has negative
effects on the
hypothalamus pituitary
testicular axis, leading to
damage to the reproductive
function.

26. Diabetes affects
reproductive function
but is not known
specifically in which
stage of
spermatogenesis.
The chronic alcoholism
leads to an increase of
glycemia, linking this
process with the effects
of diabetes on the
alteration of testicular
function.

27. PAOLA RANGEL

28. Daniel Rodríguez