Este documento describe numerosas técnicas para evaluar el sistema inmunológico, incluyendo la cuantificación de células y proteínas inmunes, pruebas de función como quimiotaxis y fagocitosis, y métodos para evaluar la inmunidad innata, celular y humoral adquirida como citometría de flujo, ELISA e inmunoelectroforesis. También cubre la evaluación de alergias, problemas autoinmunes, moléculas MHC e identificación genética y epigenética.

1. EVALUACION DEL SISTEMA
INMUNOLOGICO
Castro Lugo Omar Alonso
Arrieta Madrid José Luis
Dr. Jorge Velázquez Gálvez

2.  En laboratorios clínicos se dispone de numerosas
técnicas para determinar fallas en los mecanismos
de respuesta inmune
 En lab de investigación se puede:
 Evaluar el funcionamiento de una cel en un sistema.
 La ausencia o alteración en la expresión de una
citoquina o enzima.
 Detectar anormalidades de algún mecanismo
específico mediante biología molecular

3. EVALUACIÓN DE LA INMUNIDAD INNATA
 Se deben cuantificar y evaluar las células del
sistema inmune y algunas proteínas
 Cels del sistema inmune: Es posible cuantificar el
numero, las subpoblaciones, el fenotipo y sus
funciones de respuesta a la quimiotaxis, fagocitosis
y participación en la inflamación.
 Proteínas: Se deben estudiar las de la fase aguda
como la
CRP, interferones, citoquinas, quimioquinas y
factores del sist de complemento

4.  Recuento diferencial y morfología de las
diferentes células: La evaluación de un leucograma o
un extendido de sangre permiten detectar anormalidades y
tener una idea de la morfología y num de plaquetas.
 Evaluación de la quimiotaxis: La migración de PMN
frente a un estímulo quimiotactico se mide con el
empleo de la Cámara de Boyden.
 Prueba de la agarosa:
 Ventana cutánea de Rebuck: Prueba que establece si
la llegada de PMN y MØ ocurre en cantidad y frecuencia
adecuada.

5.  Evaluación de la fagocitosis: Cuantifica en num
de PMN y de MØ y su funcionalidad.
 Recuento de los glóbulos blancos:La presencia de un
num adecuado de neutrófilos no es garantía de defensa. La
quimioluminicencia es una técnica que se basa en la
medición de la radiación electromagnética que emiten los
PMN luego de la ingestión de microorganismos.

6.  Evaluación del sist de complemento
 Dosificación individual de factores: En lab de
investigación se pueden medir cada uno de los 20
componentes diferentes del sistema. Su dosificación se hace
por la técnica de inmunodifusión radial
 Evaluación de la inflamación:
 Eritrosedimentación: Índice inespecífico de la existencia
de inflamación, un valor normal descarta una infección
bacteriana
 Dosificación de la CRP: Mide la concentración de la
proteína C reactiva, cuyos niveles incrementan notoriamente
durante la inflamación aguda.
 Prueba de liberación de histamina: Evalúa la
degranulación de los mastocitos y basófilos.

7. EVALUACIÓN DE LA INMUNIDAD CELULAR
ADQUIRIDA
 Evaluación de los L:
 Extendido de sangre: Permite establecer la
ausencia, disminución o incremento de los L, asi como
alteraciones en su morfología.
 Recuento total de L en sangre periférica: Menos de
1000 L uL indica deficiencia, más de la cifra indica infección
 Estudio de subpoblaciones de L: Es necesario los sig
pasos
- La separación de los L de las demas cels sanguíneas se logra
por medio de centrifugación por densidad diferencial para lo
cual se emplean concentraciones variables de Ficoll-hipaque

8. -Marcar las diferentes subpoblaciones por medio de AcMc
conjugados con fluorocromos contra las diferentes moléculas
CD que caracterizan las dif subpoblaciones de L.
-Citometría de flujo es una técnica de análisis celular que se
basa en pasar una suspensión de cels por delante de un láser
focalizado, el impacto produce señales ópticas que
corresponden a diferentes parámetros celulares y que son
captadas por distintos detectores, éstos convierten a dichas
señales en electrónicas que posteriormente se digitalizan
para permitir cuantificar el num de L.

9.  Clasificación del grado de desarrollo de los L: Con
AcMc que reconozcan los diferentes CD presentes en la
membrana de los L y los MØ es posible determinar el grado
de madurez de las diferentes cels.
 Evaluación de las cels NK: Para cuantificarlas se
pueden separar de otras cels mononucleares por gradientes
de Ficoll-hipaque y por medio de AcMc contra CD16, CD56 y
CD57.
 Estudio de las citoquinas:
 Deteccion de citoquinas y su cuantificación: Existen juegos de
reactivos para detectar y cuantificar c/u de las citoquinas.

10. EVALUACION DE LA INMUNIDAD HUMORAL
ADQUIRIDA
 Existen distintos métodos para cuantificar las Ig o evaluar las
reacciones Ag-Ac.
 El 20% de las proteínas plasmáticas son Ig.
 Medición de las diferentes clases de Ig: Se hace por
medio de electroforesis que permite evidenciar diferencias
muy marcadas de ellas
 Inmunoelectroforesis: Técnica que pone en evidencia la
falta de alguna clase de Ig.
 Dosificacion individual de la Ig G, A y M: La
cuantificación de la IgM específica contra Ag bacterianos sirve
para detectar infección aguda, su presencia en el cordón
umbilical indica que hubo infección en VIU

11.  Dosificación de la IgE: Sus concentraciones plasmáticas
son pequeñas y no dosificables por la inmunodifusión radial
por lo cual se acude a la nefelometría, procedimiento que se
basa en la dispersión de una radiación que atraviesa las
partículas

12. EVALUACIÓN DE LA INMUNIDAD HUMORAL
ADQUIRIDA
 Evaluación de las reacciones antígeno-anticuerpo: los
métodos in vitro buscan, en primer lugar identificar Ac, y
en segundo lugar cuantificarlo. Se puede detectar por
medio de pruebas:
 Reacciones de precipitación: son las que ocurren entre
moléculas de un Ag soluble y el Ac correspondiente.
 inmunodifusion doble (Oschterlony): permite la detección
de Ac-Ag específicos y la evaluación de su reacción
cruzada.
Por el uso de tres diferentes patrones: identidad, no
identidad e identidad parcial.

14. EVALUACIÓN DE LA INMUNIDAD HUMORAL
ADQUIRIDA
 Inmunodifusion radial simple (SRID, Manzini): se usa
para cuantificar Ac. El suero que se cree que los
contiene se deposita en los pozos y se usa el gel que
contiene Ag.
 Aglutinación: este proceso ocurre cuando los Ac están
dirigidos a Ag que están en las superficies de células o
formando parte de membranas de microorganismos y el
Ac produce una agregación de diferentes células.
 Prueba de coombs: es una prueba de hemaglutinación
que detecta Ac contra los glóbulos rojos.

16. EVALUACIÓN DE LA INMUNIDAD HUMORAL
ADQUIRIDA
 Detección de Ag y de Ac: los Ag son identificados por
los Ac permitiéndose su detección y su cuantificación
sin importar que la muestra este en muy pequeñas
cantidades que se dificulte por medios químicos.
 Prueba de citotoxinas: técnica que permite la detección
e identificación de Ac específicos por la lisis de células
blanco en presencia del complemento.
 Radioinmunoensayo (RIA): se usa para detectar Ag o
Ac usando reactivos radiomarcados. Es una prueba
muy sensible pero contaminante del medio ambiente.

18. EVALUACIÓN DE LA INMUNIDAD HUMORAL
ADQUIRIDA
 Ensayo inmunoenzimatico
(ELISA): es una técnica de
inmunoensayo en la cual un
antígeno inmovilizado se
detecta mediante un anticuerpo
enlazado a una enzima capaz
de generar un producto
detectable como cambio de
color o algún otro tipo. Sirve
para detectar el VIH/SIDA.

20. EVALUACIÓN DE LA INMUNIDAD HUMORAL
ADQUIRIDA
 Anticuerpos fluorescentes: se
acude a esta técnica cuando
el Ac no se puede evidenciar
por los sistemas directos de
precipitación, aglutinación o
fijación del complemento. Es
la mas sensible y detecta
pequeñas cantidades de Ac
que se haya fijado a células o
tejido o que este en solución.

22. EVALUACIÓN DE LA INMUNIDAD HUMORAL
ADQUIRIDA
 Fijación del complemento: muchas reacciones Ag-Ac tienen la
característica de activar el complemento, y este lesiona y destruye la
célula o microorganismo que obra como Ag.
Las reacciones Ag-Ac que activan el complemento no muestran
ninguna manifestación.
Se necesita un indicador que consiste en glóbulos rojos de carnero y
Ac contra ellos.
Si en la reacción Ag-Ac activa o se fija el complemento, se consumirá
en la primera fase y no habrá lisis. Pero si al estudiarlo no hay reacción
por falta de Ac, no habrá fijación del complemento y quedara disponible
para ser activado por la reacción Ag-Ac del sistema indicador y habrá
lisis de los glóbulos rojos de carnero.
Esta prueba de fijación de complemento era importante en la prueba
de Wassermann, antes empleada en el diagnostico de la sífilis.

24. EVALUACIÓN DEL ESTADO ALÉRGICO
 Dosificación de IgE: las Ig se mide por nefelometría.
 Dosificación de IgE especifica: juegos de reactivos comerciales
permiten, por radioinmunoensayo, dosificar Ac de la clase IgE
específicos contra diferentes alérgenos.
 Recuento de eosinófilos: se puede hacer en sangre, en secreción
nasal, en esputo o por medio de coloraciones especiales en tejidos.
 Intradermorreacciones: Reacción inflamatoria cutánea que se
produce cuando en la dermis se inyecta una sustancia que se
comporta como antígeno; se utiliza para conocer el grado de
receptividad o la inmunidad del paciente hacia la toxina inyectada y
para determinar la naturaleza alérgica de una enfermedad

25. IDENTIFICACIÓN DE MOLÉCULAS DEL MHC
 Reacción en cadena de polimerasa, PCR: método
utilizado en la actualidad para tipificar antígenos
clase II.

26. EVALUACIÓN DE PROBLEMAS AUTOINMUNES
 La evaluación de un proceso autoinmune demanda un
amplio soporte de laboratorio. Es necesario evaluar
mediante los procesos de inflamación, del sistema de
complemento e identificar por inmunoflourecencia la
presencia de Ac contra determinados Ag.
 Determinación de Ac antinucleares
 Dosificación de complejos inmunes: los complejos
inmunes pueden estar libres en el plasma o adheridos a
GR. El método que mas se aproxima para medirlos es
evaluarlos indirectamente por el C1q del
complemento, a la cual le tienen gran afinidad, mide
luego la cantidad de IgG.

27. EVALUACIÓN GENÉTICAS Y EPIGENICAS
 Por distintos métodos como:
 Cariotipos: permite identificar todos los genes para ver si hay
carencias, anormalidades individuales o trasposiciones.
 Microarreglos: por el genoma humano permite preparar
microarreglos, con los cuales se puede establecer la carencia
o anormalidad de los genes que participan en la respuesta
inmune.
 Detección de RNA
 Modificaciones de histonas y acetilación del DNA: estas
técnicas permiten identificar alteraciones en la cromatina y en
las histonas y así establecer si partículas pequeñas de RNA
se han unido al DNA para activar o reprimir la expresión de un
gen determinado.