1. FUNDACIÓN BARCELO
INSTITUTO UNIVERSITARIO DE
CIENCIAS DE LA SALUD
FACULTAD DE MEDICINA
BIOQUÍMICA, INMUNOLOGÍA Y
NUTRICION NORMAL
3° AÑO
GUÍA DE TRABAJOS PRÁCTICOS
ELISA indirecto

2. Significación clínica:
La enfermedad de Chagas es una infección parasitaria producida por el Trypanosoma cruzi. El
diagnóstico de laboratorio depende del estadio en el cual se encuentre la enfermedad. Durante
la fase aguda, se efectúa directamente mediante la comprobación de los parásitos en sangre o
por métodos inmunológicos que detecten IgM. Durante la fase crónica, se pueden usar métodos
inmunológicos como hemaglutinación inmunofluorescencia, ensayo inmunoenzimático o
Western blot.
Fundamento del método:
El Chagatest ELISA es un ensayo inmunoenzimático in vitro para la detección cualitativa de
anticuerpos anti-T.cruzi en muestras de suero o plasma humanos. (Figura 1).
Figura 1: Fundamento del método

3. La muestra se diluye en la policubeta, cuyos pocillos están sensibilizados con seis antígenos
recombinantes específicos de los estadios epimastigote y tripomastigote del T. cruzi. (Figura 2).
Figura 2: Ciclo vital del Tripanosoma Cruzi.
Si la muestra contiene anticuerpos específicos, éstos formaran un complejo con los
antígenos y permanecerán unidos a la fase sólida. La fracción no unida se elimina por lavado y
luego se agrega el conjugado (anticuerpo monoclonal anti-IgG humana conjugada con
peroxidasa), el cual reacciona específicamente con los anticuerpos anti-T.cruzi
inmunocapturados. El conjugado no unido se elimina por lavado. La presencia de peroxidasa
unida al complejo se revela mediante el agregado del sustrato cromogénico tetrametilbencidina.
Las muestras reactivas desarrollan color celeste. La reacción enzimática se detiene mediante el
agregado de ácido sulfúrico, produciendo un viraje del color celeste al amarillo (Figura 3).

4. Protocolo para el Chagatest recombiante
50 min 37 °C
20 min 37 °C
20 min temperatura ambiente oscuridad
Para el práctico se largarán 3 pocillos por grupo:
Blanco: sin muestra.
Control positivo: suero humano inactivado conteniendo anticuerpos anti- T.cruzi.
Control negativo: suero humano inactivado.