OBTENCION DEANTICUERPOSMONOCLONALESEsmeralda Murcia
TOPICOS 1. Antecedentes 2. Aspectos técnicos 3. Aplicaciones
TEORIA DE LA SELECCIONCLONAL El Ag activa un clon específico preexistente de  linfocitos B induciendo proliferación Cada...
SE BUSCA    Fuente contínua de Ac    Especificidad pre-definida
ANTECEDENTES1962 Fusión por el virus Sendai          Okada1962 Inducción de plasmacitomas          Potter y Boyce1964 Medi...
INMORTALIZACION DECELULAS B  Cultivo continuo de células fusionadas  secretoras de anticuerpos con  especificidad predefin...
TOPICOS 1. Antecedentes 2. Aspectos técnicos 3. Aplicaciones
ASPECTOS TECNICOS  Inmunización  Fusión  Tamizaje  Clonación  Caracterización  Purificación
INMUNIZACION                     Ag  Inmunización primaria  Inmunización secundaria  Inmunización in vitro
FUSION Biológica:   Virus Sendai Química:     Polietilenglicol Física:      Electrofusión
CELULAS       LINFOCITO B               P3 X63 Ag8.653    BALB/c                    Tumoral plasmática    Crecimiento l...
SINTESIS DE NOVO         5- aminoimidazol 4-carboxinucleótido                UMP                          A               ...
TAMIZAJE           ELISA           RIA           Inmunofluorescencia           Inmunoblot
CLONAJEAgar semi sólidoDilución límiteSorter (Citómetro        de flujo)
EXPANSION    IN VITRO           IN VIVO Cultivo celular   Ascitis Larga escala      Manipulación Mayor costo       Menor c...
CARACTERIZACION        Ouchterlony       ELISA isotyping
PURIFICACION
APLICACIONES MOLECULAS ASOCIADAS A SUPERFICIE    Diagnostico de infecciones.    Diagnóstico e inmunolocalización de tumo...
APLICACIONES MOLECULAS SOLUBLES  Determinación y/o cuantificación de proteínas,   hormonas, enzimas medicamentos y drogas...
CONJUGACION
AcMo anti - β tubulina
AcMo anti-FNTα
Anticuerpos monoclonales
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Anticuerpos monoclonales

  1. 1. OBTENCION DEANTICUERPOSMONOCLONALESEsmeralda Murcia
  2. 2. TOPICOS 1. Antecedentes 2. Aspectos técnicos 3. Aplicaciones
  3. 3. TEORIA DE LA SELECCIONCLONAL El Ag activa un clon específico preexistente de linfocitos B induciendo proliferación Cada linfocito B sintetiza unicamente una clase de inmunoglobulina específicica para el antígenoBurnet, F.M. Australian Journal of Science 20:67-69, 1957.
  4. 4. SE BUSCA Fuente contínua de Ac Especificidad pre-definida
  5. 5. ANTECEDENTES1962 Fusión por el virus Sendai Okada1962 Inducción de plasmacitomas Potter y Boyce1964 Medios selectivos HAT Littlefield1970 Cultivo continuo de plasmacitomas Horibata y Harris1973 Fusión de células de mieloma Cotton y Milstein
  6. 6. INMORTALIZACION DECELULAS B Cultivo continuo de células fusionadas secretoras de anticuerpos con especificidad predefinida Köhler, G. Milstein,C. Nature 256 :1 495-7. 1975
  7. 7. TOPICOS 1. Antecedentes 2. Aspectos técnicos 3. Aplicaciones
  8. 8. ASPECTOS TECNICOS Inmunización Fusión Tamizaje Clonación Caracterización Purificación
  9. 9. INMUNIZACION Ag Inmunización primaria Inmunización secundaria Inmunización in vitro
  10. 10. FUSION Biológica: Virus Sendai Química: Polietilenglicol Física: Electrofusión
  11. 11. CELULAS LINFOCITO B P3 X63 Ag8.653  BALB/c  Tumoral plasmática  Crecimiento limitado  Crecen in vitro  Anticuerpos  c-myc  HGPRT+  HGPRT- ESPECIFICIDAD INMORTALIDAD
  12. 12. SINTESIS DE NOVO 5- aminoimidazol 4-carboxinucleótido UMP A A DHFR DHFRAcidos Acidos GMP IMP AMP TMPNucleicos Nucleicos HGPRT HGPRT APRT TK G H A TVIA DE SALVAMENTO
  13. 13. TAMIZAJE ELISA RIA Inmunofluorescencia Inmunoblot
  14. 14. CLONAJEAgar semi sólidoDilución límiteSorter (Citómetro de flujo)
  15. 15. EXPANSION IN VITRO IN VIVO Cultivo celular Ascitis Larga escala Manipulación Mayor costo Menor costo Adaptación Purificación 10-60µg/ml 1-10 mg/ml
  16. 16. CARACTERIZACION Ouchterlony ELISA isotyping
  17. 17. PURIFICACION
  18. 18. APLICACIONES MOLECULAS ASOCIADAS A SUPERFICIE  Diagnostico de infecciones.  Diagnóstico e inmunolocalización de tumores.  Determinación de tipos celulares.
  19. 19. APLICACIONES MOLECULAS SOLUBLES  Determinación y/o cuantificación de proteínas, hormonas, enzimas medicamentos y drogas entre otros.
  20. 20. CONJUGACION
  21. 21. AcMo anti - β tubulina
  22. 22. AcMo anti-FNTα

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