Este documento describe el proceso de obtención de anticuerpos monoclonales. Explica brevemente la teoría de la selección clonal y los antecedentes históricos del desarrollo de este método. Luego detalla los aspectos técnicos clave como la inmunización, fusión celular, tamizaje, clonación, caracterización y purificación. Finalmente, resume algunas de las principales aplicaciones de los anticuerpos monoclonales en diagnóstico, detección de moléculas y conjugación.

1. OBTENCION DE
ANTICUERPOS
MONOCLONALES
Esmeralda Murcia

2. TOPICOS
1. Antecedentes
2. Aspectos técnicos
3. Aplicaciones

3. TEORIA DE LA SELECCION
CLONAL
 El Ag activa un clon específico preexistente de
linfocitos B induciendo proliferación
 Cada linfocito B sintetiza unicamente una clase
de inmunoglobulina específicica para el antígeno
Burnet, F.M. Australian Journal of Science 20:67-69, 1957.

5. SE BUSCA
Fuente contínua de Ac
Especificidad pre-definida

6. ANTECEDENTES
1962 Fusión por el virus Sendai Okada
1962 Inducción de plasmacitomas Potter y Boyce
1964 Medios selectivos HAT Littlefield
1970 Cultivo continuo de plasmacitomas Horibata y Harris
1973 Fusión de células de mieloma Cotton y Milstein

7. INMORTALIZACION DE
CELULAS B
Cultivo continuo de células fusionadas
secretoras de anticuerpos con
especificidad predefinida
Köhler, G. Milstein,C. Nature 256 :1 495-7. 1975

8. TOPICOS
1. Antecedentes
2. Aspectos técnicos
3. Aplicaciones

9. ASPECTOS TECNICOS
Inmunización
Fusión
Tamizaje
Clonación
Caracterización
Purificación

10. INMUNIZACION
Ag
Inmunización primaria
Inmunización secundaria
Inmunización in vitro

11. FUSION
Biológica: Virus Sendai
Química: Polietilenglicol
Física: Electrofusión

12. CELULAS
LINFOCITO B P3 X63 Ag8.653
 BALB/c  Tumoral plasmática
 Crecimiento limitado  Crecen in vitro
 Anticuerpos  c-myc
 HGPRT+  HGPRT-
ESPECIFICIDAD INMORTALIDAD

14. SINTESIS DE NOVO
5- aminoimidazol 4-carboxinucleótido UMP
A A
DHFR DHFR
Acidos Acidos
GMP IMP AMP TMP
Nucleicos Nucleicos
HGPRT HGPRT APRT TK
G H A T
VIA DE SALVAMENTO

15. TAMIZAJE
ELISA
RIA
Inmunofluorescencia
Inmunoblot

16. CLONAJE
Agar semi sólido
Dilución límite
Sorter (Citómetro
de flujo)

18. EXPANSION
IN VITRO IN VIVO
Cultivo celular Ascitis
Larga escala Manipulación
Mayor costo Menor costo
Adaptación Purificación
10-60µg/ml 1-10 mg/ml

19. CARACTERIZACION
Ouchterlony
ELISA isotyping

20. PURIFICACION

21. APLICACIONES
MOLECULAS ASOCIADAS A SUPERFICIE
 Diagnostico de infecciones.
 Diagnóstico e inmunolocalización de tumores.
 Determinación de tipos celulares.

22. APLICACIONES
MOLECULAS SOLUBLES
 Determinación y/o cuantificación de proteínas,
hormonas, enzimas medicamentos y drogas
entre otros.

23. CONJUGACION

25. AcMo anti - β tubulina

26. AcMo anti-FNTα