¡Hola! Estas son las diapositivas utilizadas en el seminario de Biología Molecular presentado por el estudiante de III semestre de medicina de la UPB Camilo Hernández Uribe.
2. KLEBSIELLA
PNEUMONIAE
Gram-positive, facultative anaerobic, immotile,
usually encapsulated, bacillary bacteria, spread in
the environment and found in the mucous
membranes of mammals.
WHAT IS IT?
They have high resistance to beta-lactam
antibiotics, mainly due to the production of beta-
lactamases (BLEE and carbapenemases).
CHARACTERISTICS
3. Pyroptosis represents a form of
regulated cell death triggered by
proinflammatory signals and
associated with inflammation that
relies on Caspase-1 activation.
PYROPTOSIS
WHAT IS IT? WHAT IT IS FOR?
4. GENERAL OBJECTIVE
"We aimed to compare the cytotoxic effects of
hvKp and classical K. pneumoniae (cKp) in
murine macrophages".
5. MÉTODOS
2.7 Immunoblotting
Detección proteína específica que implica el uso de electroforesis
en gel para separar las proteínas de la muestra en donde se
expone a un anticuerpo específico contra la proteína en estudio.
2.8 Aislamiento del ARN y reacción en cadena de la
polimerasa cuantitativa en tiempo real (qRT-PCR)
-Medición [proteínas] con ácido bicinconínico
-Separación cantidades iguales mediante electroforesis en gel
-Transferencia a membranas incubadas con un Ac específico
Permite analizar la expresión génica y compararla en
distintas condiciones.
-Detección del gen de expresión genética de la catepsina
6. MÉTODOS
2.9 Análisis de citometria de flujo
2.12 Análisis e inmunofluorescencia
Células suspendidas en un líquido son pasadas individualmente al
frente de una fuente de luz intensa (generalmente un láser) y los
datos de la luz reflejada, y en la mayoría de los casos, de la
fluorescencia, son recogidos y organizados en un archivo.
-Análisis del ciclo celular
-Análisis contenido de ADN
Adición de anticuerpos específicos sobre extensiones de
muestras clínicas realizadas sobre un portaobjetos.
-Tinción de núcleos
-Tinción de células infectadas
7. RESULTADOS
Figura 1. F
Figura 1. G
Niveles expresión ↓ (*) con la infección por cKp ≠ hvKp.
Niveles de caspasa-1 ↑ en los BMDM infectados por cKp. Esto,
confirmo la ocurrencia de piroptosis mediada por GSDMD
durante la infección por hvKp y cKp.
Infección por cKp mostró una > fluorescencia de GSDMD
escindida ≠ hvKp.
Esto demuestra que infección por hvKp en BMDM ↓ niveles
de piroptosis mediada por GSDMD ≠ cKp.
8. RESULTADOS
Figura 3. A
Figura 3. B
En las células cKp ↑ la caspasa-1, activa la apoptosis, mata a la
célula y ↓ su luminiscencia. En resumen, la actividad de la
caspasa-1 es > en células cKp que en las hvKp.
En la muestra WT que no presenta la actividad de la
caspasa-1, se puede identificar la presencia de macrófagos
≠ en la muestra donde hay escisión de la caspasa-1, se
evidencia ausencia de células.
9. AUTOR OPINION AGREE / DISAGREE
23. Codo AC, et al.
"A54970 Kp strain inhibited pyroptosis to survive
in the host, leading to bacterial dissemination".
AGREE
50. Zhao Y, et al.
"Additionally, thrombospondin-1-deficient mice
showed increased bacterial clearance and
survival compared with WT during Kp infection".
AGREE
23. Codo AC, et al.
"Meanwhile, the A54970 clinical strain inhibited
pyroptosis and inflammasome activation
through the production of IL-10".
AGREE
DISCUSSION
10. CONCLUSIONS
01
To enable progress in the understanding of
normal pathological and biological processes,
allowing the development of therapies and
treatments targeting specific cellular molecular
pathways.
02
To make a more accurate and increasingly less
invasive diagnosis of diseases that are currently
difficult to manage or that simply do not have a
diagnostic method that allows for their future
management.
