presentacion

1. SALES DE WOLFRAMIO
ÁCIDO FOSFOTÚNGSTICO
Pablo Cruz
MayarlingTroncoso
Microscopía Electrónica 2015
Universidad de Chile
Facultad de Medicina
Departamento deTecnología
Médica
EscuelaTecnología Médica

2. Wolframio-Tungsteno
 Metal escaso en la corteza terrestre
 Color gris, altamente duro y denso
 Reconocido también como tungsteno

3. Información
Electronegatividad 2,36 (Pauling)
Calor específico 130 J/(kg·K)
Conductividad
eléctrica
18,9 × 106 m-1·Ω-1
Conductividad
térmica
174W/(m·K)
Propiedades físicas
Estado de la materia Sólido
Punto de fusión 3683 K (3410°C)*
Punto de ebullición 6203 K (5930°C)*
Entalpía de
vaporización
82456 kJ/mol
Entalpía de fusión 35,4 kJ/mol
Presión de vapor 4,27 Pa a 3680 K
General
Nombre, símbolo,
número
Wolframio
(tungsteno),W, 74
Serie química Metal de transición
Grupo, periodo,
bloque
6 ,6 , d
Densidad, dureza
Mohs
19.250 kg/m3, 7,5
Apariencia
Blanco grisáceo, brilloso
Propiedades atómicas
Masa atómica 183,84 gr/mol*
Radio medio† 135 pm
Radio atómico calculado 193 pm
Configuración
electrónica
[Xe]4f14 5d4 6s2
Estados de oxidación
(óxido)
6, 5, 4, 3, 2 (levemente
ácido)
Estructura cristalina
Cúbica centrada en el
cuerpo
Propiedades del Wolframio

4. Ácido Fosfotúngstico
 Primer colorante electrónico utilizado en 1945 por Hall y sus
colaboradores.
 En 1956 se empezó a usar como colorante de rutina.
 En una molécula de acido fosfotúngstico se almacenan 12
átomos de tungsteno. Presenta gran peso molecular y
resistencia al bombardeo de electrones.

5. Ácido Fosfotúngstico
 Fórmula química W12O40 H3P.
 Peso molecular es de 2880,17 gr/mol.
 Normalmente se presenta en forma hidratada.
 Utilizado como medio de contraste en MET para virus,
nervios, polisacáridos y otros tejidos.
 Es corrosivo, no especialmente tóxico y ligeramente irritante.

6. Comercialmente
 Se expende en forma de cristales blanco amarillentos sin olor.
 Muy buena solubilidad en agua.
 Óxidos de tungsteno o fósforo son inflamables se apaga por
agua nebulizada o extintores de polvo seco anhidro
carbónico.
 Evitar calor en almacenaje

7. Condiciones de almacenaje
-Área de Almacenamiento Zona de almacenaje general de reactivos y soluciones químicas.
Almacenamiento en bodegas y/o cabinas, diseñadas para contener
productos químicos con seguridad.
Lugar fresco a frío, seco y con buena ventilación.
Señalización del riesgo.
-Precauciones Especiales Almacenar separadamente de condiciones y productos incompatibles.
Proteger contra el daño físico.
Mantener los envases cerrados y debidamente etiquetados.

8. Residuos
 Se pueden eliminar a través de las aguas residuales, por el desagüe u
otra alternativa segura, una vez que se acondicionen de forma tal de ser
inocuos para el medio ambiente.
 Posibilidades:
- Diluir con Agua en una proporción 1:5 y después neutralizar hasta pH 6-
8, adicionando una solución de Sodio Hidróxido al 30%. La solución
salina resultante se diluye con más agua en una proporción 1:10 y
posteriormente se elimina en las aguas residuales o por el desagüe.
- Es importante considerar para la eliminación de residuos, que se realice
conforme a lo que disponga la autoridad competente respectiva,
solicitándose previamente la autorización correspondiente

9. Bioseguridad
 Riesgos para la salud
-Efectos de sobreexposición
-Inhalación Irritaciones moderadas en el tracto respiratorio.
-Contacto con La Piel Irritaciones.
Posible efecto corrosivo.
-Contacto con los Ojos Irritaciones.
Posible efecto abrasivo.
-Ingestión Nocivo leve.
Irritaciones en boca y tracto gastrointestinal en general.
Grandes cantidades producen dolor abdominal, vómitos y diarrea.
DL50 (oral - rata): 3300 mg/kg.

10. En caso de emergencia
-Inhalación Trasladar a la persona donde exista aire fresco.
En caso de paro respiratorio, emplear método de reanimación cardiopulmonar.
Si respira dificultosamente se debe suministrar Oxígeno.
Conseguir asistencia médica de inmediato.
-Contacto con la piel Lavar con abundante Agua, a lo menos por 10 minutos.
Utilizar de preferencia una ducha de emergencia en caso de ser necesario.
Sacarse la ropa contaminada y luego lavarla.
De mantenerse la lesión, recurrir a una asistencia médica.
-Contacto con los Ojos Lavarse con abundante Agua en un lavadero de ojos, entre 10 y 15 minutos
como mínimo, separando los párpados.
De persistir el daño, derivar a un servicio médico.
-Ingestión Lavar la boca con bastante Agua.
Dar a beber abundante Agua.
Derivar a un centro de atención médica de inmediato.

11. - Otros efectos
 Riesgo de incendios
-Cancerígeno No hay evidencias.
-Mutágeno No hay evidencias.
-Teratógeno No hay evidencias.
-Otros Efectos Daño a riñones.
-Condición de Inflamabilidad No combustible.
-Productos de Combustión Óxidos de Fósforos y Óxidos deTungsteno.
-Medios de Extinción En general, uso de extintores de Polvo Químico Seco, Espuma
Química y/o Anhídrido Carbónico.
AplicarAgua en forma de neblina.

12. Equipos de protección

13. Tipos de contraste
 Contraste Negativo
-Soluciones acuosas al 1% p/v, pH 7,0 (ajustado con KOH 1N),T.A. durante 5 minutos.
-Muestras (suspensiones) son colectadas sobre una membrana de soporte (mb.
Fomvar), se añade una gota de suspensión, se retira el exceso y se añade una gota de
solución de
contraste.
 Contraste positivo
-Soluciones acuosas 1% p/v, pH entre 2,0 y 4,0,T.A. durante 3 a 5 minutos
Ej: Ácidos nucléicos: solución 1% p/v, disuelto en etanol 70% a pH 2.
Colágeno: solución 1% p/v, disuelto en agua destilada a pH 4,2.
-Se utilizan muestras incluidas en resina, por lo que a la grilla con cortes se pone
sobre una gota de medio de contraste sobre parafilm en una cámara de tinción

14.  Tinción positiva: iones del metal pesado reaccionan con
macromoléculas de la muestra incrementando su
contraste.
 Tinción Negativa: la macromolécula no es teñida sino
rodeada por el contrastante electrón-denso, presenta
contraste negativo, es decir electrón-transparente en
contraste con un fondo electrón-denso.

15. Interacciones con el tejido
 Tinción positiva: a pH acido (pH 2.0 aprox),el metal se disocia
y se comporta como catión uniéndose a proteínas (COO-) o de
hidratos de carbono.

16. Interacciones con el tejido
 Tinción negativa
-Sal de metal pesado se introduce en regiones hidrofílicas de la muestra.
-Basado en el principio de no reacción entre tejido y medio de contraste, donde
el material se deposita en los alrededores de la muestra
-Haz de electrones pasa a través de la muestra pero no por el background
metálico

17. Aplicaciones
 Contraste negativo
-Suspensiones de virus
-Suspensiones de bacterias
-Suspensiones de macromoléculas
-Cortes de nervios
 Contraste positivo
- Cortes en resina

18. Suspensiones de virus

19. Suspensiones bacterias

20. Suspensiones de membranas

21. Bibliografía
 Técnicas de Microscopía Electrónica en Biología, Santander,
Aguilar, S.A de ediciones , 1969.Pag 509-553.
 John J. Bozzola,Lonnie Dee. Electron Microscopy: Principles
andTechniques for Biologists. 1992.
 Ficha de seguridad química winkler, ácido fosfotúngstico.
 J. E. SHERIDAN.THE APPLICATION OF ELECTRON MICROSCOPYTOTHE
STUDY OF SOME INTERESTING SPIRAL MICROORGANISMS FOUND IN
POND WATER COLLECTED AT OTARI PLANT MUSEUM, WELLINGTON
 WILLIAM P. EFFECTS OF PHOSPHOTUNGSTATE NEGATIVE STAINING ON
THE MORPHOLOGY OFTHE ISOLATED GOLGI APPARATUS

22.  Ácido fosfotungstico deWolfarth-Botterman(1956)
-primeros usos de colorantes electronicos (1945) Hall et all.
Problemas del plomo formación de carbonato de plomo que
contaminaba los tejidos sol: aumentar alcalinidad,eliminar aire.
Reynols citatro como agente reductor para retener plomo y ste no
formara los precipitados de carbonato insoluble. (plomo + dioxido de
carbono)
Objetivo del contraste con sales, aumentar el contraste de
estructuras subcelulares.(poca dif de contraste entre ellas)
Factores que afectan la dispersión de electrones: densidad del tejido,
espesor y peso atomicco.

23.  La union de Sales pesadas aprovechan el peso atomico de los
metales para aumentar el contraste.
 Contraste mediante técnica de sombreado. detalles de la
superficie y no de la ultraestructura.(se evapora un
metal(miligramos) sobre un filamento incandecente de tungsteno.
Emisión del vapor en angulo agudo para que los agregados se
depociten en un lado del relieve.iluminación lateral.)
 Variación del angulo se hace conociendo la altura de la estructura a
sombrear y asi poder calcular la longitud de la sombra.

24.  Colorantes según su momento de aplicación
 Marcacion selectiva de metales para estructuras.: ac.
Fosfotungstico fibras colagenas elasticas y mucina. Glucogeno
en secciones oxidadas.
 Tinción con acido fosfo tungstico. Fue el primer colorante
electroncio qu se utilizo en 1945 por hall y colaboladores. En 1956
se empezo a usar como colorante de rutina. En una molecula de
acido dosfotungstuco se almacenan 24 atomos de tungsteno. Gran
peso molecular y resistencia al bombardeo de electrones .
 Es muy selectivo para estructuras extracelulares como colageno
elastina mucopolisacaridos y laminas basales.

25.  Preparación de la solución colorante
 Sol acuosa o alcoholica (acetona mejor penetracion del colorante)
 Concentración 0,1-10% comumente 1 y 2 % aumentando tiempo de exposicion tejido a la
sol. Según watson 1958 la solucion es mas efectiva si se alcaliniza con KOH
 Procedimiento tinción flotación de rejillas(puede interaccionar con cobre) con los cortes
hacia la solucion o por inmersión total. Si el proceso dura varias horas dejar cortees sin
rejillas.
 Tincion por bloque o despues de la fijación el colorante se va con el proceso de
inclusion.
 La penetración del colorante puede favorecerse con calor.
 Tiempo de tinción menos de 10 min a 1-5 horas.
 Si esta muy concentradose lava con h2o , si es muy diluida se deja secar no mas.

26.  Estructuras que se tiñen.
 APT acuoso 10% 1 hr colageno
 APTALCOHOLICA 0,1-0,5% elastina
 APT CORTES 2% de H2O2 30 a 60 min y luego 1 % acido
peryocio 20-40 min - solucion 5 % en acetona durante 15
min.

27.  Según la guia del minsal los metles pesados son reciduos de
peligrosidad categoria 1