Este documento resume un estudio que investigó si el tratamiento con o-, p- o m-aminofenol induce la actividad del factor de transcripción ERα en células tumorales de tiroides. Los resultados mostraron que los aminofenoles incrementan la actividad metastásica de las células tumorales en los hígados de ratones, y que el o-aminofenol lo hace en mayor proporción. Las conclusiones fueron que los aminofenoles son tóxicos y deben restringirse para prevenir cáncer de tiroides, especialmente en mujeres, y que
3. INTRODUCTION
Thyroid cancer
It appears
more in
women
Thyroid cancer is
a malignant
tumor that
grows inside the
thyroid gland.
The thyroid has
a shape similar
to that of a
butterfly and is
located in the
neck, above the
trachea.
It is
responsible
for
regulating
the body's
metabolism
4. OBJETIVE
• This study was done to verify if the
treatment with o-, p- or m-
aminophenol induces the activity of
the ERα transcription factor in thyroid
tumor cells
5. MATERIALES Y MÉTODOS
Ensayo del reportero del gen de la luciferasas
• Los ensayos de indicador de
luciferasa le permiten
investigar la actividad del
promotor al medir la salida de
luz de la enzima luciferasa
que se expresa bajo el control
de su promotor de interés.
Fundamento ¿Para qué?
• Para mirar los mecanismos
de la regulación y
expresión génica de las
células BHP10-3, además
del funcionamiento del gen
ERα a través de la
luminiscencia.
6. MATERIALES Y MÉTODOS
Anticuerpos y Western Blot
Fundamento ¿Para qué?
El western blot separa las
proteína transfiriéndolas de un
gel a la membrana
electroforéticamente.
Se basa en la especificidad de
reconocimiento entre
antígenos y anticuerpos para
identificar las proteínas
Se usa para detectar una
proteína especifica en un
extracto crudo, mediante
el uso de anticuerpos.
7. MATERIALES Y MÉTODOS
PCR-RT
Fundamento ¿Para qué?
Se retro-transcribe una hebra
de ARN en ADN
complementario (ADNc)
usando la transcriptasa
inversa, para luego poder
amplificar el ADN.
Se hizo para ver el
reclutamiento de Erα en
sus elementos de unión al
ADN
8. MATERIALES Y MÉTODOS
Estudio en animales
Se hizo en ratones
hembra desnudos de
4 a 6 semanas de
vida
Se les inyectaron las
células BHP10-3 en
los hígados a través
de la vena porta
Se les inyectaron
50μg/kg de o-, p- o m-
aminofenol cada 2 días
Los ratones
recibieron 200μCi de
fluorodeoxiglucosa
radio marcada 18F
Los ratones fueron
sacrificados y se les
extrajo el hígado
para evaluar en
avance del tumor
9. RESULTADOS
Westernblot
• El GAPDH se usa como muestra de control.
• A mayor concentración del aminofenol hay mayor expresión de ciclina D
• En concentraciones bajas del m-aminofenol la expresión del ER α es menor, en
para el o-aminofenol y para el p-aminofenol la expresión es muy similar sin importar
las concentraciones.
10. RESULTADOS
PCR-RT
• Cuando se agregan o-, m- o p-aminofenol no hay interacción con la IgG
• A 10nM de E2 hay expresión del gen Erα; pero cuando se pone a reaccionar con las
diferentes concentraciones de los aminofenoles, se necesitan dosis muy altas para que
haya expresión.
11. RESULTADOS
PCR-RT
• Al combinar cualquiera de los aminofenoles con DMSO, o con el siRNA de control hay
expresión de Erα.
• La expresión del Erα es un poco menor con las combinaciones hechas al p-
aminofenol.
• Ni los aminofenoles, ni sus combinaciones interaccionan con la IgG.
12. RESULTADOS
En los hígados de los ratones a los que se les habían inyectado las
células BHP10-3 se puede evidenciar que los aminofenoles
incrementan la actividad metastásica de estas células; y que el o-
aminofenol lo hace en mayor proporción que los demás
aminofenoles.
13. DISCUSSION
Author Contribution Yes or Not
Yang et al. Besides endocrine system disorders,
environmental pollution and the abuse of
chemicals also disrupt normal tyroid gland
function and promote the progress of tyroid
cancer.
Zhang et al. Aminophenols are components of hair dyes and
are often considered low in toxicity. However,
Zhang et al. reported that BPA and estrogen
induce the proliferation of thyroid tumor cells in
an ERα-dependent manner.
Adam et al.
and
Rubio et al.
Thyroid cancer is markedly more common in
women than men, and ERα is considered to be a
contributor to the development of thyroid cancer
14. CONCLUSIONS
• Aminophenols are toxic compounds that
must be restricted in their use to prevent
the increase of thyroid cancer, especially in
the female population.
• The ERα should be approached as a goal
for the creation of therapies to combat
thyroid cancer in women, because their
interaction with aminophenols reduced the
proliferation of BHP10-3 cells.
Notas del editor
Las células BHP10-3 se siembran en DMEM y en suero fetal bovino al 0.5%.
Se transfectan con lipofectamine 2000.
Se co-transfectan con la luciferasa.
Los anticuerpos son proteínas producidas por el sistema inmune de un animal (Ig) que son capaces de detectar proteínas ajenas (Ag) y unirse específicamente a ellas.