APUNTES GRATIS

1. Universidad Católica
“Redemptoris Mater”
Facultad De Ciencias Médicas
Asignatura: Química Orgánica. Docente: Lic. Marilú Cerda.
Fecha de entrega: viernes, 29 de noviembre del 2013. Grupo:“A “delaboratorio.Carrera:1° de Medicina
General.Grupo:E5. Sección:“A”.
Indicadores:
1. Determina la actividadenzimáticadela glucosaoxidasa.
2. Calculalacantidadde glucosaen el plasma.
3. Determina la temperatura óptimade la glucosaoxidasa.
4. Adquiere habilidadesenlapráctica de laboratorio.
Equipos: Espectrofotómetro,centrifuga,baño maría.
Materiales: Tubosde ensayo,pipetas,micro pipetas, gradillas,jeringas descartables,algodón y torniquete.
Reactivos:solución enzimática dela glucosa oxidasa,Solución patrón para glucosa oxidasa,agua destilada y alcohol.
Actividad de Laboratorio n°1 Experimento:
Determinación de la actividad enzimática de la glucosa oxidasa.
Principio: Colorimétrico esdecirque entremás glucosase oxidaenun periodo determina,mas oxigeno esproducido
y másproducto coloreado esformado.
Fundamentos teóricos:
La enzima que estudiamosen el pasado laboratorio sellama GLUCOSAOXIDASA y pertenece a los oxidoreductasas. Es
una enzima de origen vegetal,producida poruna especie del hongo microscópico. Esuna enzima con especificidad
absolutacon respecto a su único sustrato – glucosa.La glucosaoxidasa cataliza en el organismo delhongo la siguiente
reacción: GLUCOSA Þ ÁCIDOGLUCONICO + PEROXIDOdehidrogeno
Peróxido dehidrogeno,siendo altamente tóxico,inmediatamenteesdegradadocon ayuda dela otra enzima –
peroxidasa,según esquema:
PEROXIDOde hidrogeno Þ AGUA + OXIGENO
Ambasreaccioneses posiblerepetir “in vitro”, es decir en condicionesartificiales,fuera del cuerpo del hongo.El
problema practico consisteen quetécnicamentedetectar los cambios,provocadosporla actividad enzimática (tales
como disminución de la concentración deglucosa o el crecimiento de la concentración deagua y oxigeno) esmuy difícil.
Este problema se resuelve,si acoplarla última reacción (catalizada por peroxidasa) con una reacción más:
OXIGENO + AMINOANTIPIRINA Þ PRODUCTOCOLOREADO
La concentración delproducto coloreado fácilmentesemide con la ayuda deun aparato,llamado espectrofotómetro.

2. Fundamentos del método: consisteen que se a pasa luzblanca a travésde una solución coloreada,algunas
longitudes deonda se absorbeenergía radiantedeuna u otra longitud deonda,setrata deuna propiedad característica
de todaslassustancias,tan invariablecomo los puntosde ebullición o de fusión.Muchoscompuestosno son coloreados
pero pueden absorberluzen la región visible si se someten a la acción deun reactivo apropiado.
Solución patrón: En este caso contiene100 mg de glucosa en 100 ml de solución.
Obtención de la muestra de sangre:
Se obtuvieron 3ml de sangreloscuales fueron almacenadosen un tubo con EDTA dela campanera declasesWendy,la
muestra de sangretomada fuecentrifugada a 4000 rpm durante5 minutos,para balancearel rotor se ubicó al lado
contrario del tubo quecontenía la muestra un tubo con agua.
Preparación de los reactivos:
Se dispuso dedostubosdeensaya con solución reactiva para medir la glucosa,a cada tubo se agregó 10 microlitros de
la muestra de plasma obtenido dela centrifugación dela sangrey se esperó 10 minutos.
Procedimiento:
1. Se preparó 2 tubosdeensayo uno para el patrón y otro para el blanco,luego se agregó 2ml de solución
enzimática,se mezcló bien el contenido delos tubos he inmediatamenteseapuntó la hora exacta del comienzo
de la reacción,duranteeste periodo se observó el desarrollo especifico del color en la solución.
Resultadosexperimentales: Discusión.
1. ¿Por qué la coloraciónde lasolucióncambiaconel tiempo?
Debido a factoresexternos talescomo la temperatura que son losque más influencia tienen en los procesos
enzimáticos.
2. ¿Por qué la absorbanciaenla primerasmedicioneses menor que en las posteriores?
El cambio en la coloración quese debe a quela temperatura quetiene n los tubos esambientalporlo cual el
proceso de metabolización esmáslento.
3. ¿Por qué la absorbanciaenlasúltimasmedicioneses la misma?
Debido a que no hay enzimasqueayuden a sintetizar los sustratos o la enzima esta tan concentrada queno
tiene sustratosquesintetizar.
4. De acuerdoa la cinética de MichaelisMeten,expliquede que depende laactividadenzimática
Depende de la concentración de cada sustrato y de condicionesambientalestalescomo temperatura y fuerza
iónica.
5. Comose puedecambiar lacinética si se alcanzala velocidadmáximade la enzima?
Añadiendo otra enzima querecibirá el nombrede coenzima

3. 6. ¿Cómose interpreta el datoobtenidode la muestra? Justifique.
El valorde glucosa obtenido fuede168 mg/dlla cual da como resultado una hiperglucemia posprandial que
se definecomo el valorplasmático de glucosa obtenido a las doshorasposterioresa la ingestión de comida,
hecho querespalda la compañera a la que se le extrajo la muestra sanguínea.
Actividad de Laboratorio n°2 Experimento:
Acción de la temperatura sobre la actividad enzimática de la glucosa oxidasa.
Procedimiento:
Se prepararon 4 tubos de ensayos a los cuales se les agrego 2 ml de solución enzimática, luego fueron
expuestos a diferentes temperaturas:
 Tubo n° 1 fue expuesto a 0°c Hielo.
 Tubo n° 2 fue expuesto a 70°c.
 Tubo n° 3 fue expuesto a una temperatura ambiente.
 Tubo n°4 fue expuesto a una temperatura de 37°c.
Fueron expuestosa estastemperaturasdurante5minutos,luego se prosiguió a añadir a cada tubo la solución patrón,se
mido la absorbancia que ocurrió en cada tubo.
Resultadosexperimentales: Discusión.
1. Represente de una formagráficalos cambiosde laglucosaoxidasaa diferentes temperaturas.
2. ¿Para qué se dejó reposar lostubosde ensayodurante 5 minutosantesde añadirlasoluciónenzimática?
La mayoría delas enzimasson,pues,muy termolábilesy habitualmenteessuficienteaplicar una temperatura de40 a
80°C por 2 a 5 minutos,a fin de destruirsu actividad.
¿A qué se deben las diferenciasen el comportamientode lareacción enzimáticaen cada tubo?
Se debea los cambiosde temperaturasa losque fueron sometidos.
3. ¿Cuál es la temperatura óptimapara la enzimaglucosaoxidasa? ¿porqué?
La temperatura óptima para la mayoría de las reaccionesenzimáticasestá,con pocasexcepciones,entre30°C y 40°C,
en quela actividad esmáxima.

4. 4. ¿A qué se debe labaja actividadenzimáticaenla temperatura del hielo?
La desnaturalización a altatemperatura esirreversible, debido a quese rompen las fuerzasdébilesde enlace al
aumentarla vibración térmica de los átomoscomponentes,fenómeno quedaña la estructura tridimensional.
5. ¿Qué pasaen estadode fiebre con las enzimas?
El aumento detemperatura acelera también la inactivación de la enzima por desnaturalización térmica.Para
muchasenzimasla región de inactivación térmica extensiva está muy próxima dela temperatura óptima.
Conclusión:
“Las enzimas actúan en condicionesóptimasde sustrato y temperatura y Ph”
Elaborado Por:
 Fernanda Pineda Gea.
 Monica Bolaños
¡Gracias por su tiempo, que tenga un buen día!