Seminario Biología Molecular

2. BY
MARIA ALEJANDRA PALACIO VELASQUEZ
JUAN NICOLAS SARMIENTO NARANJO
MEDICINE STUDENTS
III SEMESTER

3. INTRODUCTION

4. CALPAIN
Cytoplasmic
cysteine
protease
Requiring
calcium ions
for activity
• Signal
transduction
• Cell
proliferation
• Cell cycle
progression
• Apoptosis
Funtions

5. APOPTOSIS
Programmed
Cell Death
Mediated by
proteolytic
enzymes called
caspases
Initiated by
extracellular or
intracellular
death signals

6. P38 MAPK
Signaling
pathway
Allows cells to
interpret
External signals
Respond
appropriately
way

7. HEAT STRESS
Body’s means of
controlling internal
temperature
Starts to fail

8. ACUTE LUNG INJURY
MOST COMUN CAUSE
INFECTION BY
GRAM NEGATIVE BACTERIALS
LPS
INDUCDE
CALPAIN ACTIVATION PHOSPHORYLATION
OF p38 MAPK
ENDOTHELIAL CELLS APOPTOSIS
ACTIVE CASPACE 3
DNA FRAGMENTS
HEAT STRESS

9. OBJETIVE

10. This study investigated how calpain
activation mediated apoptosis and
whether heat stress regulated
calpain activation in LPS-stimulated
PMECs.

11. METODOS Y
MATERIALES

12. CULTIVO PMECs
(Células endoteliales pulmonares
microvasculares)
Experimento realizado con el fin de
aislar células de un organismo en
condiciones especificas que permitan su
supervivencia y crecimiento, y donde se
tenga control de su desarrollo.
Se utilizaron células endoteliales microvasculares de
ratones para poder manipular de manera practica y
realizar control de los procedimientos realizados.

13. FLUORESENCIA
Técnica para localización de proteínas
dentro de una célula, y su posterior
observación por microscopía de
fluoresencia. Un fluorocromo se define
como la sustancia capaz de emitir luz a
cierta longitud de onda especifica.
• Caspasa 3: se usó fluoresencia para estudiar la actividad de la Caspasa 3,
iniciadora de la via extrínseca de la apoptosis.
• Calpaina: Se utiliza un sustrato fluorescente que permite marcar la proteasa
Calpain.

14. ELISA
Técnica usada para estudiar la
unión de un anticuerpo frente
a un antígeno en la muestra
establecida, junto con la
enzima que corresponde a la
señal de la unión frente al
complejo antígeno-anticuerpo.
Se utilizó para reconocer el DNA libre en la muestra causado por la
fragmentación, y de esta manera determinar si hubo apoptosis causado
por la sepsis bacteriana.

15. TRANSFORMACIÓN
Procedimiento por el cual las células de
un cultivo se mezclan con un vector de
DNA recombinante, donde
posteriormente la célula incorporará el
DNA plasmídico, y se reproducirá con
esta variable.
Células endoteliales microvasculares pulmonares fueron infectadas
con Adenovirus recombinante donde se observó el proceso de
transformacion con la transferencia del gen.

16. WESTERN BLOT
-IMMUNOBLOT
Proceso para detectar una proteína
particular la cual combina la resolución
de la electroforesis en gel, especificidad
de anticuerpos y sensibilidad de
pruebas enzimáticas. Separa e identifica
una proteína particular.
Se uso con el fin de observar la expresión de
Calpain y p38 MAPK, usando anticuerpos
específicos.

17. RESULTADOS

18. El estrés por calor inhibe la apoptosis de las PMECs
estimulada por la LPS

19. El choque térmico disminuye la expresión y activación
de la calpaina en las PMEC.

20. El shock térmico atenúa la apoptosis inducida por la
Calpain

21. El shock térmico inhibe la fosforilación de MAPKs
inducida por LPS

22. Activación de la Calpaina promueve la fosforilacion de
P38

23. DISCUSSION

24. AUTHORS WHAT DID THEY SAY? YES NOT
Joyeux-Faure M
and el at.
“heat shock has been widely recognized to
protect cardiomyocytes against
ischemia/reperfusion-induced injury”
Wong HR and el
at.
“The heat-shock response attenuated LPS-
mediated apoptosis in cultured sheep
pulmonary artery endothelial cells”
Bouchama A
and el at.
Moulin M and
el at.
“Severe heat stress has been reported to have
a direct cytotoxic effect, such as in
heatstroke”
Chen G and el
at.
Heidemann SM
el at.
Heat pre-treatment has been demonstrated
to attenuate inflammation and pulmonary
microvascular leakage in mouse and rat
models of endotoxemia or sepsis

25. CONCLUSION

26. Bacterial infection has the capacity to induce
apoptosis in a tissue.
Heat stress, as a physiological way, allows
prevent apoptosis.
Calpain are very important to induce an
apoptotic process.
The Calpastain, an endogenous inhibitor of
Calpain, reduced acute lung injury.

27. By
María Alejandra Palacio Velásquez

28. • Juan Nicolás Sarmiento Naranjo

29. Bibliografia
• PROTEÍNAS DE CHOQUE TÉRMICO, MUERTE CELULAR
Y RESPUESTA ANTITUMORAL. S. Fiorentino , A.
Barreto , A. Asea. Revista de la Facultad de Ciencias
Vol. 12 N° 2, 5-22. Pontificia Universidad Javeriana.
• Biología Celular y Molecular. Lodish, H., Berk, A., et.
Al. 5 Edición, Editorial Panamericana.