Seminario 4-cromatografía

BENEMÉRITA UNIVERSIDAD
AUTÓNOMA DE PUEBLA
Facultad de Ciencias Químicas
Lic. En Químico Farmacobiólogo
Laboratorio de Química Orgánica l
Seminario No. 4: CROMATOGRAFÍA
Verano 2015
Alumnas: Carmen Guadalupe Márquez Hernández
Pilar Berenice Vargas Aquino
1Lab. Química Orgánica l

1. Descripción general de la
cromatografía
Es un método físico de separación en la cual los
componentes de una mezcla más o menos compleja
se distribuyen entre dos fases, una que es fija (fase
estacionaria) y la otra que se mueve en una
dirección definida (fase móvil), IUPAC
recommendations, 1993

a) principios físicos
inversamente proporcional a la afinidad
por la fase estacionaria
Viajando a
una
distancia
que es
Se moverá
con la fase
móvil
La
sustancia
de interés
se adherirá
a la fase
estacionari
a o

b) Fase móvil
• La fase móvil puede ser un gas o un líquido,

c) Fase estacionaria
• sólo puede ser un líquido o un sólido

d) Coeficiente de partición
• K = CS/CM
• donde CS, y CM son las concentraciones de soluto
en la fase estacionaria y móvil, respectivamente.
Cuando K = 1, el soluto se encuentra igualmente
distribuido entre las dos fases. El coeficiente de
reparto determina la v

• 2. Clasificación de los
métodos cromatográficos

• Cromatografia de
particion:
• Esta técnica se basa en la
retención del analito en
una columna sólida sobre
la cual hay distribuida una
capa fina de un
disolvente afín al analito;
• una fase móvil liquida o
gaseosa y la estacionaria
esta mediado por el
analito, que se reparte
entre ambas y queda al
final disuelto en la fase
estacionaria.

Cromatografia de intercambio ionico

Cromatografía de exclusión.
• Una variante de la cromatografía de permeación
en gel o cromatografía de exclusión, es cuando se
realiza para la exclusión de iones. Mediante esta
modificación, se tienen separaciones que
dependen de factores como tamaño de partícula
de la resina, forma iónica e incluso distribución de
isómeros. Esto permite separar especies que de
otra forma eluirían al mismo tiempo. Las
separaciones se llevan a cabo en resinas de
intercambio con base en poliestireno de alta
capacidad como eluyentes, ácidos minerales
diluidos

3. Cromatografía de adsorción

4. Descripción las características de las
principales fases estacionarias.

a) Gel de sílice
• Es una sustancia química de aspecto cristalino,
porosa, inerte, no tóxica e inodora, de fórmula
química molecular SiO2 nH2 O, insoluble en agua ni
en cualquier otro solvente, químicamente estable,
sólo reacciona con el ácido fluorhídrico y el álcali.

• Gracias a su composición química única y a su
estructura física, el gel de sílice posee unas
características incomparables con otros materiales
similares, por ejemplo la alta absorción, funcionamiento
termal estable, característica física estable, fuerza
mecánica relativamente alta, etcétera.
• El gel de sílice también puede diferenciar la adsorción
de diferentes moléculas actuando como un absorbente
selectivo.
• se utiliza para separar sustancias más polares (alcoholes,
aminas, ácidos carboxílicos)

Alumina
• La alúmina u óxido de aluminio es un adsorbente
ligeramente básico debido a que en el proceso de
extracción de la alúmina a partir de la bauxita
quedan algunas moléculas de hidróxido de
aluminio adheridas a la alúmina, dándole a ésta un
carácter básico. No consigue un desarrollo tan alto
de la sustancia depositada como el gel de sílice.
• se utiliza para separar compuestos relativamente
apolares (hidrocarburos, haluros de alquilo, éteres,
aldehídos y cetonas

• La alúmina puede ser tratada químicamente para
conseguir alúminas ácidas, básicas y neutras.
Puede contener aglomerantes y/o indicadores
ultravioletas. Es un adsorbente de carácter polar,
de tal forma que retendrá con mayor avidez a los
componentes polares.

polaridad y punto de ebullición
Hexano
Tetraclorom
etano
clorofor
mo
Diclorometano
Acetato
de etilo
Acetona
2-
Propanol

polaridad y punto de ebullición
En general, estos
disolventes se
caracterizan por
tener bajos puntos
de ebullición y
viscosidad, lo que
les permite moverse
con rapidez.
Raramente se
emplea un
disolvente más polar
que el metanol.
El orden de elución
de un compuesto se
incrementa al
aumentar la
polaridad de la fase
móvil o eluyente.

6.- Cromatografía en capa fina a) Usos
• Determinar el grado de pureza de un compuesto.
• Comparar muestras.
• Realizar el seguimiento de una reacción.

Procedimiento.

6.- Cromatografía en capa fina
b) Procedimiento.

i. Preparación de la cuba
cromatográfica
1. Se rodea la cuba
con papel absorbente
dejando una
ventanita.
2. Colocar el solvente
de desarrollo.
Esperar que se moje
el papel.
3. Tapar la cuba y
dejar 5 a 10 minutos
para que se sature
con los vapores de la
mezcla de solventes.

i. Preparación de la cuba
cromatográfica

ii. Elección de la fase estacionaria y la fase
móvil

iii. Aplicación de la muestraRecortar una tira de papel
cromatográfico de
aproximadamente 2,5 cm
de ancho por 6 ó 7 cm de
largo y marca una línea, a 1
cm de la base, paralela a la
misma.
Sembrar, utilizando tres capilares
diferentes, los tres extractos por
separado a unos 3 – 5 mm del borde de la
placa y equidistantes entre sí.
Tocar el extracto alcohólico con
el extremo delgado del capilar.
El líquido asciende.
Tocar el centro de la
línea de siembra con el
capilar, con mucho
cuidado para no romper
o dañar el papel
cromatográfico.
Repetir 3 o 4 veces la operación de
siembra para generar una buena
concentración.

iii. Aplicación de la muestra

iv. Desarrollo de la cromatografíaIntroducir el
papel
cromatográfico
sembrado de
manera que el
solvente no
toque la zona de
siembra.
Tapar
inmediata
mente.
Dejar ascender
el solvente por
el papel hasta
que se
encuentre
entre 1 y 0,5
cm de su borde
superior.
En ese
instante,
retirarlo de
la cuba.
Dejar secar y
marcar el
contorno de
mancha
observada

iv. Desarrollo de la cromatografía

v. Detección (tipos de reveladores)

vi. Determinación del Rf

7. Cromatografía en capa fina
preparativa
• Se utiliza para la
separación y
aislamiento de los
componentes de una
mezcla en cantidades
comprendidas entre 100
– 200 mg.

7.- Cromatografía en capa fina
preparativa
 Se transfiere a un matraz erlenmeyer
 Añadir un disolvente en el cual sea soluble el producto.
 Se filtra el gel de sílice
 Y una vez eliminado el disolvente
 Tenemos el producto puro

8. Cromatografía en columna

8. Cromatografía en columna b)
Procedimiento

i. Preparación de columna
Colocar una bolita de algodón
en el fondo de la columna para
evitar que se desprenda el gel
de sílice.
Sujetar la columna con dos
pinzas y nos aseguramos de
que esta recta.

ii. Elección de la fase móvil
La fase
estacionaria se
deposita en el
interior de una
columna de
vidrio que
termina con
una placa
porosa que
impide su paso.

iii. Elección de la fase móvil
La mezcla se
deposita en la
parte superior
de la fase
estacionaria ,
mientras que la
fase móvil,
atraviesa el
sistema.

iv. Llenado de la columna
Verter la pasta
en la columna
asegurándose
de que la llave
está cerrada
Una vez bien
compactada, abrimos la
llave para que el
disolvente caiga hasta
que queden unos 5 mm
por encima de la sílice.

v. Aplicación de la muestra
Con ayuda de una
pipeta Pasteur
echamos con
cuidado la muestra
resbalando por las
paredes de la
columna
Procedemos a llenar
la columna con el
disolvente (hexano)

vi. Elución de la columna
 Si el disolvente
es muy polar la
elución será
muy rápida y
generalmente
habrá poca
separación de
los
componentes
de la mezcla.
 Si por el
contrario el
disolvente es
muy apolar, no
eluirán los
compuestos de

“CROMATOGRAFÍA EN
CAPA FINA ”• Objetivo
• Aplicar la tecnica cromatografia en capa fina CCF para el analisis de productos
• quimicos. Utilizar el equilibrio de particion y adsorcion en tecnicas cromatograficas
para
• separar dos compuestos diferentes.
• MATERIAL Y REACTIVOS
• Material
• 􀀀 3 tubos capilares
• 􀀀 cubas cromatograficas
• 􀀀 placas de cromatografia en CCF de aprox. 2 X 5 cm
• 􀀀 4 vasos de precipitados de 50 mL
• 􀀀 lampara de luz UV
• Reactivos
• Disolucion de acetanilida al 1 %
• Disolucion de nitrobenceno al 1 %
• Acetato de etilo
• Hexano

Se dispone de tres disoluciones, previamente preparadas
de acetanilida (A), nitrobenceno (N) y una mezcla de
ambos (M).
Se introduce un tubo capilar en la disolucion (A), tomando
una pequeña cantidad de la misma y por su extremo se
coloca en una placa CCF, con gel de silice como
adsorbente, una mancha a unos 6 mm del borde izquierdo
de la placa y a 4 mm del borde inferior.

• A la misma altura, en el borde derecho se
coloca con otro capilar una mancha de la
solucion (N) y en la parte central 30 de la placa
una mancha de la solucion M de nuevo con un
capilar diferente (!Cuidado, no confundir los
capilares de cada disolucion!).
M
M

• Se deja secar y se introduce la placa en el
interior de una cuba cromatografica
conteniendo 3 mL de acetato de etilo/hexano
50:50, de modo que el disolvente no toque la
zona en la que se encuentran las manchas.

• Se tapa la cuba y cuando el disolvente ha migrado
hasta llegar a 4 mm del borde superior se saca la
placa y se marca el nivel del disolvente en un
extremo de la misma.
• Se deja secar y se revela la placa en una lámpara de
luz ultravioleta o en una cámara de yodo,
localizando la posición de cada mancha. Se miden
las distancias recorridas por el frente del disolvente y
para cada mancha, y se calcula el valor de Rf. Se
repite todo el proceso utilizando como eluyente
acetato de etilo/hexano 20:80; acetato de
etilo/hexano 80:20. Intentar con otros eluyentes y
elegir cuál es el mejor

Propiedades fisicas y toxicas de reactivos
Propiedades físicas Propiedades tóxicas
ACETANILIDA
Fórmula
molecular Masa
molecular
ESTADO FISICO;
ASPECTO:
Punto de fusión:
Punto de
ebullición:
C8H9NO
135.16
sólido blanco de
olor característico
113-115 ºC
302-304 ºC
Irritante, especialmente para los ojos.
Por ingestión puede provocar náuseas,
vómitos, arritmias, hipotensión,
dificultades respiratorias, espasmos.
Riesgo de explosión del polvo.
Inflamable. Mantener alejado de
fuentes de ignición.
NITROBENCENO
Fórmula
molecular
Masa molecular:
ESTADO FÍSICO;
ASPECTO:
Punto de
ebullición: Punto
de fusión:
C6H5NO
123.1
Líquido aceitoso,
amarillo pálido, de olor
característico.
211°C
5°C
Dolor de cabeza. Labios o uñas
azulados. Vértigo. Náuseas.
Debilidad. Confusión mental.
Convulsiones. Pérdida del
conocimiento.
Combustible. En caso de incendio se
desprenden gases tóxicos e irritantes.
Por encima de 88°C pueden formarse

Propiedades físicas y tóxicas de reactivos
ACETATO DE ETILO
FORMULA:
PESO
MOLECULAR:
Aspecto:
Punto de
ebullición: Punto
de fusión: -
C4H8O2
88.1 g/mol
líquido incoloro
con olor a frutas
77°C
- 83 °C
Inhalación: Causa dolor de cabeza, náuseas
e incluso, pérdida de la conciencia.
Contacto con ojos: Una exposición
prolongada causa el oscurecimiento de las
córneas. Contacto con la piel: El contacto
constante o prolongado a este compuesto,
provoca resequedad, agrietamiento,
sensibilización.
HEXANO
FORMULA:
PESO
MOLECULAR:
Aspecto:
Punto de
ebullición: Punto
de fusión:
C6H14
86.17 g/mol
líquido incoloro con un
olor parecido al del
petróleo
69°C
- 95.6 °C
Inhalación: Causa tos y cansancio.
Contacto con ojos: Causa irritación y
enrojecimiento.
Ingestión: Causa náusea, vómito e
irritación de la garganta.
Compuesto altamente inflamable,
cuyos vapores pueden viajar a una
fuente de ignición pueden explotar en
una área cerrada.

Propiedades físicas y
tóxicas de reactivos
ETÉR DE PETROLEO
Aspecto:
Punto de
ebullición:
Peso molecular:
Líquido, incoloro
30-60 °C
87 -114 g/mol
Por inhalación de vapores: Irritaciones
en vías respiratorias.
Por ingestión: nauseas. Riesgo de
aspiración al vomitar, neumonía.
Por absorción: dolores de cabeza,
vértigo, ansiedad, espasmos, pérdida
del conocimiento, paro cardiovascular.
Los gases / vapores pueden formar
mezclas explosivas con

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