El documento describe el virus varicela-zóster (VZV), el cual causa varicela y herpes zóster. Se evaluó la efectividad del uso de pruebas ELISA de sándwich en la detección de inmunidad positiva o negativa contra el VZV. Se expresó y purificó la proteína gE recombinante del VZV y se desarrolló un ELISA de doble antígeno gE. Este ELISA demostró ser altamente específico para detectar sueros negativos y puede usarse para evaluar la inmunidad contra el VZV.

1. MARÍA CAMILA OSPINA JIMÉNEZ
SARA TORO CORREA

2. INTRODUCTION

3. VARICELLA ZOSTER
GROUP: Group I (dsDNA)
ORDER: Herpesvirales
FAMILY: Herpesviridae
SUBFAMILY: Alphaherpesvirinae
GENUS: Varicellovirus.
SPECIES: Human herpesvirus 3 (HHV-3)

4. VARICELLA ZOSTER
Is a human alpha herpes virus witch causes
varicella and herpes zoster (HZ) upon infeccion.
Primary infection with VZV causes varicella,
while reaction latent virus results in HZ.

5. VARICELLA ZOSTER
Varicella can be complicated by
skin, pneumonia,
encephalomyelitis and myelitis.

6. VARICELLA ZOSTER
Catching chickenpox. It's
also called the varicella
vaccine, because
chickenpox is caused by
the varicella-zoster virus.
The vaccine is made from a
live but weakened, or
attenuated, virus.

7. VARICELLA ZOSTER

8. IMMUNITY

9. ELISA

10. VARICELA ZOSTER
VIRUS
VIRUS ENTERS INTO
THE CELL
PRESENCE OF CYTOKINES
ATTRACTION OF
NEUTROPHILS AND
MACROPHAGES
PHAGOCYTOSIS
ANTIGENS
PRESENTATION TO A
T HELPER LYMPHOCYTES
T CYTOTOXIC
LYMPHOCYTES AND B
LYMPHOCYTES
RECOGNIZE THE
ANTIGEN
STIMULATION OF
CELLULAR AND
HUMORAL IMMUNITY
T LYMPHCYTES HELPS B
LYMPHOCYTES TO
PRODUCE ANTIBODYES

11. OVERALL OBJECTIVE

12. EVALUATE THE EFFECTIVENESS OF THE
USE OF ELISA SANDWICH TESTS IN THE
DETECTION OF IMMUNITY POSITIVE OR
NEGATIVE AGAINST THE VARICELLA ZOTER
VIRUS

13. MATERIALES Y METODOS

14. MATERIALES Y METODOS: CELULAS,
VIRUS, SUERO Y GLICOSIDASAS
Células de Spodoptera
frugiperda
Medio CCM3 con 2% de suero bovino fetal
Células epiteliales de pigmento
retiniano humano
Medio de Eagle modificado con 10% de FBS
Cepa vacuna oka ARPE 19
Vaculovirus Clontech
125 sueros humanos Beijing Wantai Biological Pharmacy Enterprise
240 sueros humanos
Instituto Nacional de Diagnóstico y Desarrollo de Vacunas en
Enfermedades infecciosas
Suero VZV positive calibrado Glicosidasa y Rnasa B = New Engkand Biolabs

15. MATERIALES Y METODOS: EXPRESION Y PURIFICACION DE
LA IgE
Fragmento gE marcado con His se expreso usando el vacuovirus
rgE agregado al sobrenadante del cultivo
Dos bandas se purificaron con una columna de Ni – NTA
Separacion de bandas por columna de flujo rápido de DEAE

16. MATERIALES Y METODOS: ANALISIS DE GLICOSILACION
Proteina igE
purificada y
Rnasa B
• Digestion con péptido N glicosidasa F (PNGasa F), endoglicosidasa
H (Endo H) u O glicosidasa y neuroaminidasa.
Analisis
• SDS- PAGE y coloración azul brillante de Coomasie.

17. MATERIALES Y METODOS: ELISA INDIRECTO BASADO
EN GPS VZV (GP ELISA) Y gE (gE ELISA)
Fijación de
antígenos al
soporte
insoluble.
Lavado
Adición del
suero
problema con
anticuerpos.
Lavado
Adición de
anti-
anticuerpos
conjugados
con una
enzima
Adición de
substrato
sobre el cual
pueda actuar
la enzima
marcadora
Lectura visual o
colorimétrica

18. MATERIALES Y METODOS: ELISA INDIRECTO BASADO
EN GPS VZV (GP ELISA) Y gE (gE ELISA)
Se emplea en ensayos de competición de antígeno

19. ELISA DOBLE DE ANTIGENO gE
Fijación de
soporte
insoluble de
anticuerpos
específicos del
agente patógeno
a detectar
Adición de la
muestra
problema que
contiene el
agente patógeno
diagnostico.
Adicion de
anticuerpos
específicos del
antígeno a
detectar
(epitopo
diferente).
Adicion de anti
cuerpos
conjugados con
una enzima anti-
anticuerpos .
Adicion del
substrato y
lectura de
resultados.

20. ELISA DOBLE DE ANTIGENO gE
Detección de infecciones. Ayuda diagnostica.

21. PRUEBA FAMA
Validada inicialmente como un
indicador especifico de VZV.
Células infectadas con V-OKA fueron
recolectadas cuando el efecto
citopatico estaba presente en
aproximadamente 70-80% de las
células.
Después de varios procesos se
colocaron en un portaobjetos y se
incubaron con dos sueros humanos
diluidos.
Isotiocianato de fluoresceína (FITC)
conjugado de cabra anti IgG humano
pre-mezclado se incubo con las
células junto con Azul de Evans y se
observo al microscopio.

22. RESULTADOS

23. EXPRESSION, PURIFICATION AND ANALYSIS OF
RECOMBINANT gE PROTEIN

24. PERFORMANCE OF gpELISA, gE ELISA, AND DOUBLE gE
ANTIGEN SANDWICH ELISA IN THE DETECTION OF HUMAN
VZV POSITIVE AND VZV NEGATIVE SERUM

25. CHARACTERISTICS OF THE DOUBLE gE ANTIGEN
SANDWICH ELISA IN HUMAN SERUM DETECTION

26. EVALUATION OF HUMAN SERUM USING DE DOUBLE gE
ANTIGEN SANDWICH ELISA COMPARED TO THE FAMA TEST
AND A COMMERCIAL ELISA KIT

27. QUANTITATIVE
EVALUATION OF
POPULATION INMUNITY
TO VZV USING THE
ESTABLISHED DOUBLE gE
ANTIGEN SÁNDWICH
ELISA

28. DISCUSSION

29. Author Yes or not
Guris et al. 2008
“Immunization with varicella
vaccine has dramatically reduced
the incidence of varicella”.
Keller et al. 1986
“VZV-positive sera have been shown
to contain a high
titre of gE-specific antibodies”
Sauerbrei et al.2012
" Commercial tests adopt a similar
indirect ELISA format but use
different coating antigens"
Wasmuth and Miller 1990
"The effective antigen in VZV gps
varies from batches and should be
standardized with an in-house panel
serum"

30. CONCLUSION

31. The vaccine for chickenpox
has decreased the
incidence of varicella in
many countries. However,
in many others it is not
included within the
vaccination scheme and it
is necessary to change this
aspect to decrease the
number of patients
affected and the
complications that the
virus generates.
The varicella virus has the
ability to trigger processes
of cellular and humoral
immunity in the body and
its main marker is the IgE
antibody used for testing.
FAMA test continues being
the main for to evaluate
the immunity that the body
has against the varicella
zoster virus
The double gE antigen
sandwich ELISA can be
used to evaluate who has
immunity to vzv, because
this test was demonstrated
to be highly specific to
detect negative sera.

32. MAPA CONCEPTUAL DE SARA TORO

34. MAPA CONCEPTUAL DE MARÍA CAMILA OSPINA

36. GRACIAS POR SU
ATENCIÓN