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- 1. PRÁCTICA 8
- 2. ROL DEL LABORATORIO EN EL DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO - ETIOLÓGICO DE LAS INFECCIONES URINARIAS ALTAS Y BAJAS 22/06/2020 2
- 3. • Invasión, multiplicación y colonización del parénquima renal y/o sus vías de excreción, por microorganismos patógenos. • ITU origen monobacteriano: Escherichia coli (85% de los casos). • Pacientes c/sonda polimicrobianas. • Pacientes diabéticos, inmunosuprimidos o que están recibiendo tratamiento con antibióticos suele aislarse Candida spp. • obstrucción de vías urinarias, vejiga neurogénica • Infección endógena vs. exógena Infección Tracto Urinario - ITU 22/06/2022
- 4. Etiología ITU – Escherichia coli : 85% casos: A,B1,B2,C,D,E. – Otros: Enterobacter , Proteus, Klebsiella, Pseudomonas aeruginosa Staphylococcus saprophyticus, Enterococcus faecalis. 22/06/2022
- 5. 22/06/2020 5
- 6. UROCULTIVO FASE PRE ANALÍTICA • Solicitud de urocultivo. • La muestra debe ser colectada en frasco estéril. • El traslado al laboratorio debe ser en el plazo de una hora. Cuando esto no sea posible debe refrigerarse a 4ºC durante un tiempo máximo de 24 horas. • Tipo de muestra. 22/06/2020
- 7. UROCULTIVO FASE PRE ANALÍTICA Tipos de muestra • Orina chorro medio: 3-4 hrs. • Cateterismo vesical: vejiga neurogenica • Punción supra púbica: Neonatos con ecog. • Pacientes con sonda: Nunca del extremo distal. Inmovilizados, obesos, niños sin control de esfínteres. 22/06/2020
- 8. Colección: Las muestras se deben obtener antes de iniciar el tratamiento antibiótico, si no es así registrar el tratamiento antimicrobiano que sigue el paciente, o 72 horas de finalizado el tratamiento. ADULTO LACTANTES 22/06/2020 En niños pequeños sin control de esfínteres, es práctico el empleo de bolsas colectoras que se aplican con un adhesivo después de lavar el área perineal y genital.
- 9. UROCULTIVO FASE ANALITICA • Tinción Gram. • Examen Sedimento: Centrifuga 10 ml de orina lamina, laminilla Observa 22/06/2020
- 10. Flujograma de trabajo Prueba de Nitritos: Permite valorar, en forma rápida (2 min), la presencia de bacterias en la orina ™Tiras reactivas (Dipstick) ™Orina de 4- 8 horas de retención ™Sensibilidad: 50% (rango: 16 – 72%) ™Especificidad: 98% (rango 95 – 100%) 22/06/2020
- 11. UROCULTIVO FASE ANALITICA MATERIALES Asas de Siembra 1µl ó 10µl. Medios de cultivo. Discos de antibióticos 22/06/2020
- 12. UROCULTIVO 22/06/2022 Método del asa calibrada : 0.001 ml (3mm de diámetro)
- 13. Cultivo microbiológico La metodología de la inoculación de la muestra en medios de cultivo o siembra microbiológica depende de la forma de obtención de la muestra: Orina de segunda micción y orina obtenida de catéter: Se siembra con asa de 0.001 ml (El desarrollo de una colonia en el cultivo debe multiplicarse por 1000). Para orinas obtenidas por punción vesical.- Se siembra con asa de 0.01 ml (El desarrollo de una colonia en el cultivo se debe multiplicar por 10 ). INTERPRETACION 0.001 ml ó 1UL 0.01 ml ó 10 UL (1 colonia = 1000 ufc/ml). (1 colonia = 100 ufc/ml) y 22/06/2020
- 14. UROCULTIVO FASE ANALITICA LECTURA Asa 1µl – 1col – 1000ufc/ml Asa 10µl – 1 col -100 ufc/ml 22/06/2020
- 15. Es un medio de cultivo diferencial que permite el crecimiento de uropatogenos: Gram -/+ levaduras. El Azul de Bromotimol cambia de color por la fermentación ácida de la Lactosa. La Cistina favorece el crecimiento de las Enterobacteriáceas y el bajo contenido en electrolitos reduce la difusión de Proteus. MEDIO CLED ( CISTINA, LACTOSA, DEFICIT ELECTROLITOS)
- 16. MEDIO AGAR MC CONKEY El Agar MacConkey contiene cristal violeta y sales biliares como inhibidores de organismos Gram positivos. Las colonias aisladas de bacterias que fermentan la lactosa son rosadas. Las colonias que no fermentan la lactosa permanecen incoloras
- 17. MEDIO AGAR EMB (AGAR EOSINA Y AZUL DE METILENO) El uso de la eosina y del azul de metileno permite la diferenciación de las colonias fermentadoras de lactosa de las no fermentadoras. La sacarosa está incluida en el medio para detectarlos que fermentan más rápidamente la sacarosa que la lactosa. Colonias de color azul a negro con centros obscuros y brillo metálico. Otros coliformes como Enterobacter presentan colonias mucosas de color rosa.
- 18. Método Recuento (UFC/ml) Interpretación Punción suprapúbica Cualquier crecimiento de bacilos gram negativos Diagnóstico positivo C. Vesical >50 mil Diagnóstico positivo 10 mil a 50 mil Infección probable según patógeno y cuadro clínico <10 mil Infección poco probable Mitad de micción >100 mil 100 mil a 10 mil <10 mil Infección probable Dudoso Infección poco probable INTERPRETACIÓN DEL UROCULTIVO 22/06/2020
- 20. Causa de Urocultivos Falsos + FALSOS POSITIVOS • Toma de muestra sin usar técnica de chorro medio • Mala higiene • Contaminación con secreción vulvovaginal • Heces en lactantes • Jabón contaminado • Recipiente no estéril • Orinas no conservadas refrigeradas 22/06/2020
- 21. Causa de Urocultivos Falsos - FALSOS NEGATIVOS • Tratamiento antibiótico previo • Arrastre de antisépticos utilizados en la higiene • Obstrucción ureteral completa (anomalías o litiasis) • Orinas con pH muy bajo o muy alto <5 o > 8 • Baja densidad urinaria < 1003 • Microorganismos diferentes a entero patógenos: tuberculosis Mycobacterium 22/06/2020
Notas del editor
- El urocultivo es el examen de laboratorio utilizado para cuantificar el número de bacterias presentes en la orina, es un procedimiento indispensable en el diagnóstico y tratamiento de infecciones urinarias. Las infecciones de vías urinarias pueden dividirse en dos categorías anatómicas: la infección de vías bajas (uretritis cistitis y prostatitis) y la infección de vías urinarias altas (pielonefritis).
- Epidemiología Las ITU son de las enfermedades más frecuentes, en particular en mujeres. Su prevalencia es dependiente de la edad y el género. Se calcula que 20% o más de la población femenina sufre alguna forma de ITU en su vida. La infección en la población masculina es rara hasta el quinto decenio de la vida, cuando el crecimiento de la próstata empieza a obstaculizar el vaciamiento de la vejiga. En los ancianos de ambos sexos las intervenciones quirúrgicas ginecológicas o prostáticas, la incontinencia, la instrumentación y el sondeo uretral crónico favorecen tasas de ITU de 30 a 40% Las alteraciones anatómicas y funcionales del tracto urinario son responsables de ITU complicadas e incluyen cirugía urogenital, sonda vesical permanente u otros tipos de catéteres de uso prolongado, obstrucción de vías urinarias, vejiga neurogénica o reflujo vesicoureteral. Las enfermedades de base, tales como diabetes mellitus o estados de inmunosupresión, son otros factores predisponentes. En los pacientes mayores concurren muchos de los factores de riesgo antes mencionados, y además hay que añadir el deterioro mental y tratamientos antimicrobianos más frecuentes. En los varones de entre 15 y 50 años la ITU es poco frecuente y suele estar asociada a una alteración urológica subyacente. En los varones mayores de 50 años los síntomas se deben mayoritariamente a la prostatitis crónica y los factores de riesgo están relacionados con la obstrucción de las vías urinarias de distinta índole o cateterismo prolongado.
- La etiología de las ITU depende de muchos factores, tales como la edad, el sexo, las enfermedades de base, la presencia de trastornos funcionales o anatómicos del tracto urinario, el origen comunitario o nosocomial de la ITU, el uso de cateterismo prolongado o intermitente, instrumentación, antecedentes de hospitalización reciente, institucionalización o tratamientos antibióticos previos. La mayoría de las ITU están causadas por Escherichia coli uropatógeno, responsable de 70-95% de casos de cistitis y pielonefritis no complicadas. Se han descrito seis grupos filogenéticos de E. coli: A, B1, B2, C, D y E. La mayoría de las cepas de E. coli involucradas en ITU pertenecen al filogrupo B2 y poseen múltiples factores de virulencia.
- Etapa pre-analítica Antes de iniciar el estudio de la muestra, el microbiólogo debe conocer algunos datos concernientes al paciente: edad, género, factores predisponentes, síntomas, antecedentes de ITU, tratamiento actual o previo con antibióticos 3 dias sin administración de antibióticos Muestra de la 1era mañana Limpieza de genitales noche anterior se toma muestra en la 2da micción envases esteriles apropiados Conservación y trasporte de la muestra: La muestra para urocultivo debe refrigerarse a 4 – 8 ºC inmediatamente después de recolectada. Si el traslado al laboratorio demora más de 15 minutos, debe colocarse el recipiente con la orina dentro de un contenedor con hielo. Este procedimiento permitirá que el número de microorganismos permanezca relativamente constante por un tiempo no mayor de 24 horas
- Recolección de la muestra Adultos que controlan esfínteres(micción normal) Se elimina el primer chorro de orina y luego se recolecta en un envase estéril el chorro medio miccional, entre 15 a 30 ml y luego se sigue con la micción normal El tiempo de retención deseado es por lo menos 3 o 4 horas, siendo la muestra más representativa la primera orina de la mañana. Niños y adultos que no controlan esfínteres Al acecho: se aplica a los lactantes y es similar al descrito para los pacientes que controlan esfínteres. El operador deberá esperar el momento de la micción y recogerá en un envase estéril lo que seguramente será la porción media del chorro miccional. Punción suprapúbica: se reserva para casos especiales por ejemplo: pacientes cuyos urocultivos previos presentan resultados conflictivos, neonatos graves,entre otros. Deberá ser realizada por médicos entrenados. Cateterización: Debe ser realizada por personal entrenado y se recomienda en enfermos con vejiga neurogénica, lactantes entre otros. La muestra recolectada debe ser la porción media del chorro de orina que sale por la sonda. Enfermos sondados: Nunca tomar la orina que fluye del extremo distal de una sonda que no es nueva. En caso de estar recién colocada tomarla directamente del extremo distal en un recipiente estéril. . El sondaje sólo se considera indicado cuando no es posible obtener muestra por micción media, como es el caso de pacientes inmovilizados, obesos, con alteraciones neurológicas y en niños sin control de esfínteres. Punción de la sonda: se realiza en aquellos pacientes con sonda permanente. Se obtura la sonda con una pinza “ad hoc”, se espera unos minutos, se desinfecta la parte externa de la sonda en la zona proximal con alcohol yodado y se punza con una jeringa estéril, colocando posteriormente el contenido en un envase estéril. La punción-aspiración suprapúbica permite obtener orina directamente de la vejiga a través de la pared vesical y es la técnica de elección en pacientes en los que no es posible obtener orina libre de contaminantes. Resulta especialmente útil y fácil de realizar en niños y suele realizarse bajo control ecográfico
- Etapa analítica Procesamiento de la muestra: antes de iniciar el estudio de la muestra, el microbiólogo debe conocer algunos datos concernientes a la misma. Muestra: tipo de recolección: chorro medio, punción suprapúbica, sonda (punción, sonda nueva). Conservación. Examen directo 1. Examen macroscópico: olor, color, aspecto, pH, densidad. 2. Examen microscópico: estudio del sedimento (en fresco): se centrifuga entre 10 - 15 ml de orina a 3000 rpm durante 10 min, el sedimento obtenido se coloca entre lámina y laminilla y se observa al microscopio con objetivo de 40X
- Nitritos. Muchos microorganismos causantes de ITU, principalmente Enterobacterales, son capaces de metabolizar los nitratos a nitritos. La presencia de nitritos en la orina es muy específica de presencia de infección urinaria (especificidad de 85-98%), aunque su sensibilidad es, por diversas razones, limitada (45- 60%). Una es que hay microorganismos que no poseen esta propiedad (Enterococcus spp.), y hay otros que, aunque reducen los nitratos a nitritos, también metabolizan los nitritos a gas (P. aeruginosa), por lo que estos últimos no se suelen detectar
- 4. Cultivo y recuento de colonias: Permite diferenciar la verdadera bacteriuria de una contaminación. Se conocen varios métodos para determinar la cantidad de microorganismos. • Método de dilución en tubo o método de Kass: Es un método poco práctico, muy laborioso, está basado en diluciones 1:100 y luego 1:10.000 de la orina, depositadas en placas estériles a las que se les agrega el agar fundido. Después de varios pasos se observa el crecimiento en las diferentes placas. • Método del asa calibrada: Es un método práctico, sencillo y económico, que consiste en sembrar la orina sin centrifugar con un asa calibrada a 0.001 ml (3mm de diámetro) o 0,01 ml (4mm de diámetro) En la elección de los medios de cultivo debe considerarse la recuperación de la mayoría de los patógenos, con el menor costo posible. Generalmente se recomienda la utilización de un agar sangre (AS) y un agar CLED o un medio selectivo diferencial como MK o EMB. En niños incluir un agar chocolate suplementado para la recuperación de Haemophilus.
- El uso de la eosina y del azul de metileno permite la diferenciación de las colonias fermentadoras de lactosa de las no fermentadoras. La sacarosa está incluida en el medio para detectarlos que fermentan más rápidamente la sacarosa que la lactosa. Los coliformes que utilizan la lactosa y/o sacarosa producen colonias de color azul a negro con centros obscuros y brillo metálico. Otros coliformes como Enterobacter presentan colonias mucosas de color rosa.