La técnica de Western blot permite la detección y caracterización de proteínas a través de la separación de proteínas por electroforesis, la transferencia a una membrana, y el reconocimiento de antígenos específicos por anticuerpos. Puede usarse para determinar la presencia, niveles, o tamaño de una proteína en particular en una muestra, y se emplea comúnmente para detectar enfermedades como la encefalopatía espongiforme bovina y la enfermedad de Lyme.

1. WESTERN BLOT

2.  La técnica de inmunotransferencia (immunoblotting o Western
blot) es un sistema rápido y muy sensible para la detección y
caracterización de proteínas que se basa en la especificidad de
reconocimiento entre antígeno y anticuerpo. Implica la separación
por electroforesis en geles de poliacrilamida y una transferencia
cuantitativa e irreversible a una membrana, de las proteínas de una
mezcla compleja (lisado total celular). Los antígenos que se han
transferido a la membrana son reconocidos por anticuerpos
monoclonales policlonales específicos de ellos.

5. Directo:
• El anticuerpo primario marcado se une al antígeno de la membrana
y reacciona con el sustrato originando una señal detectable. En el
método directo de detección, el anticuerpo primario que se utiliza
para detectar el antígeno sobre la superficie de la membrana, debe
ir marcado con una enzima

6. Indirecto
• El anticuerpo primario sin marcar reacciona con el antígeno. Luego,
un anticuerpo secundario marcado se une al primario y reacciona
con el sustrato. En el método indirecto, se añade primero un
anticuerpo primario sin marcar contra el antígeno de la superficie
de la membrana; posteriormente se añade un anticuerpo
secundario marcado contra el anticuerpo primario.

7.  Se usa principalmente para determinar la presencia o ausencia de
una proteína concreta en una muestra. También nos puede ser útil
para determinar los niveles de dicha proteína en esa muestra, o el
tamaño de esta proteína, ya que en determinadas enfermedades el
problema no es la ausencia total de una molécula sino su reducción
o la expresión de una forma truncada de dicha proteína.

8.  Enfermedades Inflamatorias
 Enfermedades Infecto-Contagiosas
 Perfil de Citoquinas en Modelos Experimentales
 Factores de Crecimiento
 Proteínas de Secreción
 Se emplea como prueba definitiva de la encefalopatía espongiforme bovina,
comúnmente llamada "enfermedad de las vacas locas".
 Algunas clases de la prueba para la enfermedad de Lyme usan el Western blot.
 En veterinaria, ocasionalmente se emplea el Western blot para confirmar la
presencia del FIV en gatos.
 Aunque el VIH suele detectarse mediante la técnica ELISA, el Western Blot se
usa como prueba confirmatoria cuando el ELISA da un resultado positivo en
un grupo que no es de riesgo o en una población donde la prevalencia del
virus es muy baja.

9.  Mediante el Western blot se buscan los anticuerpos anti-VIH en una
muestra de suero humano. Se transfieren a una membrana las proteínas
de células que, se sabe, están infectadas por el VIH. Entonces, se incuba
el suero que hay que probar con esta membrana. Este paso es
equivalente a la incubación con el anticuerpo primario; si hay
anticuerpos anti-VIH en el suero, serán estos los que realicen el papel de
anticuerpo primario. Se lava, para eliminar los anticuerpos no unidos, y
la membrana se vuelve a incubar con un anticuerpo secundario anti-
humano unido a una enzima-señal. La aparición de bandas indica la
presencia de proteínas contra las cuales el suero del paciente contiene
anticuerpos, es decir, el paciente es seropositivo.