Universidad de Carabobo - Facultad de Ciencias de la Salud sede Carabobo - Bioanálisis. Parasitología. Módulo V, Tema 12: Tripanosomas americanos. Aspectos diagnósticos de enfermedad de Chagas y Rangeliosis.

1. FACULTAD DE CIENCIAS
DE LA SALUD
ESCUELA DE
BIOANÁLISIS
Universidad de Carabobo
Facultad de Ciencias de la Salud
Escuela de Bioanálisis
Asignatura Parasitología

2. MSc. Diana Graterol
Tripanosomas americanos.
Aspectos diagnósticos de enfermedad
de Chagas y Rangeliosis
 Tripanosomiasis americana y
Rangeliosis.
 Taxonomía, Morfología y Ciclo
Evolutivo.
 Mecanismos Patogénicos, Patología
y Sintomatología.
 Diagnóstico clínico y de laboratorio.
 Epidemiología, Tratamiento y
Profilaxis.
 Caracteres morfológicos de
Rhodnius prolixus, Triatoma maculata,
Panstrongylus geniculatus.

3. 3
Tripanosomiasis
El género
Trypanosoma es un
protozoos flagelado
que se encuentra en
la sangre.
Las especies de Trypanosoma de importancia médica
son:
– Trypanosoma evansi, producen la enfermedad “mal de las
caderas” en equinos.
– Trypanosoma vivax, producen la enfermedad del sueño en
ganado bovino.
– Trypanosoma cruzi, produce la enfermedad de Chagas.
– Trypanosoma rangeli, no patógeno en humanos, pero
produce alteraciones en los canes y equinos.
La enfermedad de Chagas es causada por Trypanosoma cruzi,
parásito descubierto en Brasil por Carlos Chagas en 1909.

4. Trypanosoma cruzi
4
BERENICE (1.909)
2 años
Fiebre
Hepatomegalia
Esplenomegalia
D. Clínico: Malaria
Examen Sangre: Protozoario Flagelado

5. Tripanosomiasis americana
5
Dr. CARLOS CHAGAS (1909)
Único en descubrir completamente todos los
aspectos de una enfermedad infecciosa inclusive
antes de reconocerla como una entidad clínica.
Patógeno, vector y hospedador, las
manifestaciones clínicas y la epidemiología

6. Clasificación Taxonómica
6
Trypanosoma cruzi
Reino: Protista
Sub-reino: Protozoa
Phylum: Euglenozoa (motilidad por flagelos)
Clase: Kinetoplastea
Sub-clase: Metakinetoplastina
Orden: Trypanosomatida
Familia: Trypanosomatidae
Género: Trypanosoma
Trypanosoma cruzi
Trypanosoma rangeli

7. Morfología T. cruzi
7
Axonema
Kinetoplasto
Axonema
Kinetoplasto
Forma de hoja (fusiforme)
Forma evolutiva encontrada en el vector
(triatominos)
15-20 micras x 2-3 micras
Presencia de flagelo libre (extremidad anterior)
Kinetoplasto en barra (porción central)
Capacidad replicativa (fisión binaria)
NO posee capacidad invasiva
Sensible a fagocitosis macrofágica (no evade a
los lisosomas de la fagocitosis) y a la lisis
mediada por el complemento
Epimastigote

8. Morfología T. cruzi
8
Cuerpo alargado con forma de C ó S
15-20 micras x 2-3 micras
Presencia de flagelo libre (extremidad anterior) y una
membrana ondulante
Kinetoplasto redondo (extremidad posterior) o
puntiforme en T. rangeli
NO posee capacidad replicativa
Capacidad invasiva
Resistente a fagocitosis macrofágica
Resistente a lisis mediada por el complemento
Sanguíneo: forma infectante para el triatomino
Metacíclico: forma infectante para el hombre u otros
vertebrados
Axonema
Flagelo
Núcleo
Kinetoplasto
Acidocalcisomas
Microtúbulos
subpeliculares
Axonema
Flagelo
Núcleo
Kinetoplasto
Acidocalcisomas
Microtúbulos
subpeliculares
El más grande corresponde al de T. rangeli
Tripomastigote
(Metacíclico,
Sanguíneo)

9. Morfología T. cruzi
9
Flagelo
Bolsa flagelar
Kinetoplasto
Microtúbulos
subpeliculares
Acidocalcisoma
Núcleo
Flagelo
Bolsa flagelar
Kinetoplasto
Microtúbulos
subpeliculares
Acidocalcisoma
Núcleo
Amastigote
Forma redonda u ovalada
Es intracelular (excepto en T. rangelis)
2-3 micras diámetro
NO posee flagelo libre (rudimentario llamado
Rizonema)
Kinetoplasto en barra (porción central)
Capacidad replicativa
NO posee capacidad invasiva
Resistente a fagocitosis macrofágica
Resistente a lisis mediada por el complemento

10. Morfología T. cruzi
10
• 3. Amastigote
• 4. Tripomastigotes
Sanguíneos
• 2. Tripomastigotes
metacíclicos
• 1.
Epimastigotes
Estómago
Orina y
ampolla
rectal
Células
Sangre
periférica

11. Morfología T. cruzi
11
Epimastigote Tripomastigote
Amastigote

12. Ciclo Evolutivo T. cruzi
12
Tripomastigote
metacíclico
Tripomastigote
sanguíneo
Epimastigote
Amastigote

13. 13
Trypanosoma rangeli
No es patógeno para el hombre
La forma tripomastigote de T. rangeli es más grande
25-35 µm
En T. rangeli no existe forma amastigote en los tejidos del hospedador
vertebrado pero sí en la hemolinfa del vector (Chipo)
La forma tripomastigote metacíclico en las glándulas salivales del vector
Mecanismo de transmisión por Inoculación
Vectores compartidos con T. cruzi

14. Ciclo Evolutivo T. rangeli
14
Epimastigotes
Tripomastigotes
sanguíneos
Tripomastigotes
metacíclicos
Los tripomastigotes metacíclicos no tienen capacidad invasiva y por lo tanto no
existen amastigotes intracelulares

15. 15
Patogenia T. cruzi
Lisis Celular
Liberación sustancias tóxicas
Autoinmunidad
Consenso Internacional de la Sociedad Argentina de Cardiología (SAC, 2011;
Roca Saumell y col., 2015)
Fases Clínicas de la ECh

16. 16
Patogenia T. cruzi
Fase aguda: no hay respuesta inmune bien instalada, pocos anticuerpos
Reacción inflamatoria difusa (PMN): lisis de células cardíacas de
manera difusa; atracción de PMN generando inflamación.
Parasitemia alta

17. 17
Patogenia T. cruzi
Fase crónica: ya hay anticuerpos, la inflamación no es difusa, el parásito
invade células cercanas
Focos de fibrosis
Hipertrofia células sanas
Pérdida capacidad contráctil del corazón
Alteración conducción impulso cardíaco
Parasitemia baja

18. 18
Patología y Sintomatología
Período de incubación: 15-30 días
Fase aguda:
Taquicardia, disminución presión arterial, pulso débil y
filiforme, fiebre, adenitis.
Chagoma de inoculación
Señal de Romanha

19. 19
Patología y Sintomatología
Fiebre, Hepatoesplenomegalia,
Edemas,
Exantemas
Chagoma inoculación
Señal Romanha

20. 20
Patología y Sintomatología
Fase crónica:
Corazón: miocardiopatía chagásica crónica, alteraciones
electrocardiográficas, edema miembros inferiores, disnea,
ACV.
Tracto gastrointestinal: megaesófago, megacolon,
megaduodeno.

21. 21
Patología y Sintomatología
Cardiomegalia
Aneurisma en vértice
del corazón

22. 22
Patología y Sintomatología
Radiografía de
megaesófago
Megacolon

23. Diagnóstico
23
 Métodos de demostración del parásito:
Directos
Indirectos
 Métodos inmunológicos
 Nuevas metodologías (PCR)

24. Diagnóstico
24
Métodos de demostración del parásito
 Directos:
Examen de sangre al fresco
Extendido coloreado
Gota gruesa
Métodos de Concentración
Crema leucocitaria
Triple centrifugación
Técnica Strout
Silicón líquido
Punción-biopsia

25. Diagnóstico
25
Métodos de demostración del parásito
 Directos:
 Examen al Fresco
 Gota Gruesa  Extendido
Colorante Giemsa

26. Diagnóstico
26
Métodos de demostración del parásito
 Directos:
Examen de sangre al fresco

27. Diagnóstico
27
Métodos de demostración del parásito
 Directos:
Trypanosoma cruzi Trypanosoma rangeli
Kinetoplasto grande y posición terminal
Membrana ondulante poco visible
15-20 μm largo
Kinetoplasto pequeño y posición subterminal
Membrana ondulante bien visible
25-30 μm largo
Extendido coloreado

28. Diagnóstico
28
Métodos de demostración del parásito
 Directos:
Gota Gruesa

29. Métodos de Concentración
29
Crema Leucocitaria
Triple Centrifugación
Silicón Líquido
Técnica Strout
(S: 95%)

30. Diagnóstico
30
Métodos de demostración del parásito
 Directos:
Punción-biopsia

31. Diagnóstico
31
Métodos de demostración del parásito
 Indirectos:
Xenodiagnóstico:
Natural
Artificial (Medio TAU3AAG simula la orina del triatomino)
Hemocultivo:
Medio NNN (Novy, McNeal y Nicolle)
Medio LIT (Liver Infusion Tryptose)
Inoculación en animales sensibles

32. Diagnóstico
32
Métodos de demostración del parásito
 Indirectos:
Xenodiagnóstico
Mayor sensibilidad que los métodos de
demostración directos del parásito.
Se utilizan ninfas de 4to y 5to estadio.
Se examina la orina de los triatominos
a los 15, 30, 45 y 60 días posteriores a
la ingestión de la sangre del paciente
sospechoso.
La forma identificada en la orina
corresponde a los tripomastigotes
metacíclicos.

33. Diagnóstico
33
Métodos de demostración del parásito
 Indirectos:
Xenodiagnóstico
Alimentación del
insecto
Recolección orina

34. Diagnóstico
34
Métodos de demostración del parásito
 Indirectos:
Hemocultivo
Útil para la fase aguda y crónica de la
enfermedad.
Revisión del medio de cultivo a los 7, 14, 21
y 28 días.
Ocurre la transformación de tripomastigotes
sanguíneos hacia epimastigotes.
Se visualizan epimastigotes al fresco.
Medio NNN (Novy, McNeal y Nicolle)
Medio LIT (Liver Infusion Tryptose)
Ambos medios simulan el estómago del chipo

35. Diagnóstico
35
Métodos Inmunológicos
 Reacción Fijación Complemento (Machado Guerreiro)
 Reacción Indirecta Anticuerpos Fluorescentes (RIAF)
 Hemaglutinación Pasiva (HP)
 Ensayo inmunoenzimático (ELISA)
 Reacción Anticuerpos Líticos
 Aglutinación
 Inmunoblot

36. Diagnóstico
36
Métodos Inmunológicos
1. Incubación del Antígeno soluble + Suero paciente
2. Adición de suero de cobayo (complemento)
3. Adición de hemolisina + GR carnero
Reacción Positiva
(No hay hemólisis)
Reacción Negativa
(Hemólisis)
 Reacción Fijación de Complemento (Machado Guerreiro):

37. Diagnóstico
37
Métodos Inmunológicos
 Reacción Indirecta Anticuerpos Fluorescentes (RIAF):
1. Fijación de los parásitos a la lámina portaobjeto
2. Incubación con el suero del paciente
3. Lavado para eliminación de anticuerpos no fijados
4. Incubación con la antiinmunoglobulina marcada
5. Lavado para eliminación de antiinmunoglobulinas no enlazadas
6. Visualización al microscopio de fluorescencia

38. Diagnóstico
38
Métodos Inmunológicos
 Hemaglutinación Pasiva (HAI):
1. Sensibilización de glóbulos rojos carnero con antígeno T. cruzi
2. Incubación de GR sensibilizados con suero de paciente
Si existen anticuerpos específicos contra T. cruzi en el suero estos reaccionaran
contra el antígeno y se producirá una hemaglutinación visible.

39. Diagnóstico
39
Métodos Inmunológicos
 Inmunoblot:

40. Diagnóstico
40
Nuevas metodologías
 Antigenuria
 Hibridización molecular
 Anticuerpos monoclonales
 Reacción en Cadena de la Polimerasas (PCR)

41. Diagnóstico molecular T. cruzi
41
Minicírculos del kinetoplasto: (Wincker y col., 1994)
Minicírculos 1-3 kb 330 pb
30.000 copias x 4  120.000 copias/p
121 (cebador directo)
122 (cebador reverso)
ADN satélite: (Moser y col., 1989; Kirchhoff y col., 1996; Martins y col., 2008)
TCZ1 (cebador directo)
TCZ2 (cebador reverso)
ADN altamente repetitivo y agrupado
195 pb 120.000 copias (10% ADN)
PCR
PCR de ADNk tiene mayor sensibilidad que ADNs (Schijman y col., 2011)

42. Tipificación molecular T. cruzi
42
Región intergénica
Exón
Intrón
T. cruzi I
T. cruzi II
Región intergénica de Miniexón: (Souto y col., 1996; Brisse y col., 2001)
200 copias distribuidas
en secuencias repetidas
TC1 (cebador directo)
TC2 (cebador directo)
TC (cebador reverso)
Extremo 3’ de 24S ADNr
18S ADNr
D71
D72
24S
V1
V2
18S 24S
ADN codificante del ARN ribosomal (ADNr): (Souto y col., 1996; Brisse y col., 2001)
100 y 200 copias en el genoma
D71 (cebador directo)
D72 (cebador reverso)
V1 (cebador directo)
V2 (cebador reverso)

43. 43
Epidemiología
Brasil, Argentina, Chile, Paraguay, Bolivia, Perú,
Ecuador y Venezuela

44. 44
Epidemiología
Distribución enfermedad de Chagas
en Venezuela
Población expuesta: 6 millones
Índice seroprevalencia: 8,5%
(menores 10 años) (Año 2003)
Índice infección casas triatomino
(0,04% a 0,5%) (Año 2000)
Índice infección triatomino
infectado (0,3%) (Año 2003)
Brote infección Chagas oral
Municipio Chacao (Año 2007)
Brote infección Chagas oral
Chichiriviche Costa (Año 2008)
Cojedes, Carabobo, Guárico, Barinas,
Miranda, Lara y Portuguesa

45. 45
Cadena Epidemiológica
Reservorio: Rabipelado (Didelphis marsupialis)
Cachicamo (Dacypus novencinctus)
Fuente infección: Hombre y mamíferos infectados
Antropozoonosis

46. 46
Cadena Epidemiológica
1. Vectorial (80%)
Enfermedad metaxénica
2. Sanguínea (16%)
3. Congénita (2%)
Mecanismo de transmisión:
4. Oral

47. 47
Transmisión Vectorial
Reino: Animalia
Phylum: Arthropoda
Clase: Insecta
Orden: Hemiptera
Familia: Reduviidae
Subfamilia: Triatominae
Género: Rhodnius, Triatoma, Panstrongylus
Especie: en la actualidad más de 140
(alas mitad membranosa y mitad quitinosa)
(hematófagos estrictos)

48. 48
Transmisión Vectorial
Rhodnius prolixus Triatoma maculata Panstrongylus
geniculatus
Cuerpo achatado
dorsoventralmente, protórax
desarrollado,
cabeza, ojos, tórax y
abdomen segmentado, 3 pares
de patas, antenas y una
probóscide
color pardo
amarillento,
con manchas
marrón
color oscuro con
manchas
amarillentas o
naranjas
Amarillento con
manchas negras
Conexivo
Implantación antenal
Distal Media Proximal

49. 49
Transmisión Vectorial
Trypanosoma cruzi: Vector biológico contaminación
Trypanosoma rangeli: Vector biológico inoculación

50. 50
Transmisión Vectorial
Ciclo
doméstico
(R. prolixus)
Ciclo
peridoméstico
(T. maculata)
Ciclo
silvestre
(P. geniculatus)

51. 51
Transmisión Sanguínea
Ocurre en un 1% de los casos.
Se produce por transferencia de
tripomastigotas sanguíneos presentes en
sangre del donante al receptor.
Es obligatorio el descarte de enfermedad
de Chagas a todo donante (sintomático o
asintomático).

52. 52
Transmisión Congénita
Ocurre en un 1% de los casos.
Requiere formación de lesiones en la
placenta.
Su confirmación requiere la identificación
de anticuerpos IgM anti-T. cruzi.
La presencia de anticuerpos IgG en el
recién nacido NO es indicativo de Chagas
congénito.

53. Tratamiento
53
Fase Aguda:
Nifurtimox - Nitrofurfuriliden- amino (Lampit)
Genera productos de reducción de oxigeno que hacen susceptible al
tripanosoma al stress oxidativo
Benznidazol - Nitroinmidazolacetamina
Radanil- Argentina
Rochagan- Brasil
Uniones covalentes a los intermediarios de nitrorreducción con los
componentes del parásito, ADN, lípidos y proteínas
Fase Crónica:
Tratamiento de los trastornos cardiacos

54. Profilaxis
54
Tripanosomiasis
americana
Diagnóstico y
tratamiento de
personas infectadas
Control del
triatomino
mediante
fumigaciones
Educación
sanitaria

55. Conclusiones
55
 Ciclo monoxeno – heteroxeno..?
 Parásito eurixeno – estenoxeno..?
 F.P.I. (H.V.) 
 Mecanismo transmisión 
 Células diana 
 Forma reproducción y formas evolutivas
 Vector biológico – Hosp. Intermediario
 F.P.I. (H.I.)

56. Bibliografía
56
 Almeida Andrade HT, Serpa Filho A. (2021). Principios básicos de Entomología médica. Brasil: Kindle edition.
 Becerril M. (2008). Parasitología Médica. 2da Edición. México: Editorial McGraw-Hill Interamericana.
 Botero D, Restrepo M. (2012). Parasitosis humanas. 5ta Edición. Colombia: Corporación para Investigaciones Biológicas.
 Gállego Berenguer J. (2007). Manual de Parasitología: morfología y biología de los parásitos de interés sanitario.
España: Edicions de la Universitat de Barcelona.
 Hómez J, Soto R, De Soto S, Méndez H, Mármol P. (2004). Parasitología, Libro de Texto. 10ma Edición. Venezuela:
Editorial de la Universidad del Zulia (Ediluz).
 Incani RN. (2012). Guía de Parasitología. Venezuela: Escuela de Medicina, FCS- UC.
 Markell EK, John DT, Krotoski WA. (1999). Medical Parasitology. 8va Edición. USA: Editorial W.B. Saunders.
 Roca Saumell C, Soriano-Arandes A, Solsona Díaz L, Gascón Brustenga J. (2015). Documento de consenso sobre el
abordaje de la enfermedad de Chagas en atención primaria de salud de áreas no endémicas. Aten Primaria. 47(5): 308-1.
 Rey L. (2001). Parasitología. 3ra Edición. Brasil: Editorial Guanabara-Koogan.
 Rodríguez Pérez EG. (2013). Parasitología médica. 1ra Edición. México: Editorial El Manual Moderno.
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Cardiol. 79(6): 544-64.
 Todd A, Sanford L, Davidsohn P. (1988). Diagnóstico y tratamiento clínicos por el laboratorio. 8va Edición. Tomo I.