Universidad de Carabobo - Facultad de Ciencias de la Salud sede Carabobo - Bioanálisis. Parasitología. Módulo V, Tema 13: Leishmanias. Aspectos diagnósticos de las leishmaniosis.

1. FACULTAD DE CIENCIAS
DE LA SALUD
ESCUELA DE
BIOANÁLISIS
Universidad de Carabobo
Facultad de Ciencias de la Salud
Escuela de Bioanálisis
Asignatura Parasitología

2. MSc. Diana Graterol
Leishmanias. Aspectos
diagnósticos de las leishmaniosis
 Leishmaniosis cutáneo, cutáneo-
mucosa, cutáneo-difusa y visceral.
 Taxonomía, Morfología y Ciclo
Evolutivo.
 Mecanismos Patogénicos, Patología
y Sintomatología.
 Diagnóstico clínico y de laboratorio.
 Epidemiología, Tratamiento y
Profilaxis.
 Caracteres morfológicos de
flebótomos.

3. 3
Leishmaniosis
Enfermedades
producidas por
protozoos del género
Leishmania que
parasitan al sistema
fagocítico
mononuclear
(macrófago).
1. Endémica en 88 países a nivel
mundial.
2. Población en riesgo: 350
millones de personas.
3. Prevalencia mundial: 12-14
millones de personas.
 Parásitos Eurixenos Antropozoonosis
 Ciclo Heteroxeno
Psychodidae
Vector Biológico
(Hospedador intermediario)
Orden Diptera

4. Clasificación Taxonómica
4
Leishmania sp.
Reino: Protista
Sub-reino: Protozoa
Phylum: Euglenozoa (motilidad por flagelos)
Clase: Kinetoplastea
Sub-clase: Metakinetoplastina
Orden: Trypanosomatida
Familia: Trypanosomatidae
Género: Leishmania sp.

5. Clasificación Taxonómica
5
Género: Leishmania
Subgénero Viannia (V)
Complejo Leishmania braziliensis
Subgénero Leishmania (L)
Complejo Leishmania mexicana
Complejo Leishmania donovani
Clasificación en géneros, subgéneros, especies por hallazgos
clínicos, serológicos, epidemiológicos, geográficos, cultivos,
estudios ADN

6. 6
Subgénero Viannia
Complejo Leishmania braziliensis
L. braziliensis Leishmaniosis cutáneo mucosa
L. guyanensis
L. panamensis
L. peruviana
Leishmaniosis cutánea
1. Amastigotes (2 – 4 μm) y escasos en
lesiones.
2. Difícil crecimiento medios cultivo.
3. Colonizan intestino anterior, medio y
posterior (hospedador invertebrado).
Características:

7. 7
Subgénero Leishmania
Complejo Leishmania mexicana
1. Amastigotes (3-6 μm) y abundantes.
2. Fácil crecimiento medios cultivo.
3. Colonizan intestino anterior y medio
(hospedador invertebrado).
L. mexicana
L. pifanoi
L. amazonensis
L. gharnani
L. venezuelensis
Leishmaniosis cutáneo
difusa
Leishmaniosis cutánea
Características:

8. 8
Subgénero Leishmania
Complejo Leishmania donovani
Características:
L. donovani
L. infantum
L. chagasi
Leishmaniosis visceral
(Kala-azar)
1. Amastigotes (menor 2 μm).
2. Temperatura óptima 37º C.
3. Tropismo vísceras (hígado, bazo, médula
ósea).
 Bordes bien delimitados
 Hiperémicos
 Fondo granuloso
 Material necrótico de aspecto limpio
 NO DOLOROSA
Característica
de las Úlceras

9. Clasificación Taxonómica
9
Predominan en Asia, África y Europa.
Leishmania tropica
Leishmania major
Leishmania aethiopica
Leishmaniosis cutáneas Viejo Mundo

10. Morfología Leishmania
10
Flagelo
Núcleo
Kinetoplasto
Extremidad
posterior
Extremidad
anterior
- Aspecto fusiforme
- Localización extracelular (Vector)
- 14 - 20 x 1.4 - 4 μm
- Kinetoplasto en barra (tercio
anterior)
- Flagelo libre (extremo anterior)
- Multiplicación asexual (división
binaria).
Promastigote

11. Morfología Leishmania
11
Núcleo
Kinetoplasto
- Forma ovoide o fusiforme
- Localización intracelular
(Hospedador vertebrado)
- 2 - 6 x 1.5 - 3 μm
- Ausencia flagelo libre
- Kinetoplasto en barra
(porción central)
- Multiplicación asexual
(división binaria).
Amastigote

12. Morfología Leishmania
12
Promastigote
Amastigote

13. Morfología Leishmania
13
Amastigotes en el interior de una célula fagocítica
Promastigotes en cultivo
axénico

14. Ciclo Evolutivo Leishmania sp.
14
Inoculación promastigotes
por el insecto vector
Fagocitosis
promastigotes
Transformación
intracelular de promastigote
en amastigote
Multiplicación intracelular
amastigotes
Ingestión macrófagos
infectados con
amastigotes
Lisis macrófagos y
liberación amastigotes
Diferenciación promastigotes
Multiplicación
promastigotes y
migración a la
probóscide

15. 15
Cuadros clínicos Leishmanias
 Leishmaniosis cutánea
 Leishmaniosis cutáneo mucosa
 Leishmaniosis cutáneo difusa
 Leishmaniosis visceral
Especie involucrada – Condiciones del
paciente – Constitución genética

16. 16
Inmunidad en la Leishmaniosis
Las células dendríticas probablemente juegan un papel fundamental en la
presentación de antígenos de Leishmania y el inicio de una respuesta inmunológica
específica que determinará las consecuencias de la infección cutánea inicial
Tipo Th1 Linfocitos CD4+
Producción de
Interferón
Gamma
Activación de
Macrófagos
Tipo Th2
Síntesis de
Anticuerpos
Producción de
Interleuquina 10
Inhibición del
desarrollo de
una respuesta
eficaz de
activación
macrofágica
Si no hay respuesta inmunológica Th1 vigorosa, los macrófagos infectados son
diseminados por todo el cuerpo.

17. 17
Mecanismos Patogénicos
 Invasión de células del S.F.M.
 Destrucción celular
 Alteración funcionalismo del tejido

18. 18
Patogenia Leishmaniosis cutánea
1. Ingestión promastigotes células macrofágicas piel
(histiocitos).
2. Evasión digestión lisosomal Diferenciación
amastigotes.
3. Multiplicación intracelular amastigotes.
4. Lisis del macrófago y liberación amastigotes al
espacio extracelular.
5. Hiperplasia histiocitaria.
6. Lesiones mecánicas (obstrucción, compresión).
7. Zonas afectadas: brazos, piernas, cabeza.

19. 19
Patología Leishmaniosis cutánea
Período incubación: 2 – 3 meses.
Síntomas: úlceras (indoloras, bordes definidos, salientes,
hiperémicos, fondo granuloso y limpio, sin formación de
costras.
Lesiones: únicas, persistentes.

20. 20
Formas clínicas Leishmaniosis cutánea
1. Leishmaniosis cutánea no ulcerada:
- Papular: inicial, sitio picada insecto.
- Impetiginosa: lesiones vesículo-pustulosas generalmente recubiertas
de costras.
- Nodular o subcutánea.
- Tuberosa o lupoide: como respuesta exagerada a los antígenos
parasitarios.
- Vegetante: aspecto verrugoso o frambuesoide.
Tuberosa o
lupoide
Impetiginosa
Vegetante

21. 21
Formas clínicas Leishmaniosis cutánea
2. Leishmaniosis cutáneas ulceradas:
- Ectimoide: superficiales, abarcan epidermis y dermis.
- Ulcerosas francas: profundas, bordes salientes.
- Ulcero vegetantes.
Ectimoide Ulcerosa franca

22. 22
Patogenia Leishmaniosis cutáneo mucosa
1. Se inicia similar a la leishmaniosis cutánea.
2. Diseminación por vía linfática o hematógena hacia la
nariz, boca, faringe.
3. Ingestión amastigotes por células fagocíticas
(principalmente reticulocitos).
4. Se produce destrucción tabique o septo nasal.
5. Alteración procesos fonación y deglución.

23. 23
Patogenia Leishmaniosis cutáneo mucosa
1.- Destrucción tabique o septo nasal
Caída punta nariz
Endurecimiento y deterioro
piel alrededor nariz
Aspecto “nariz de tapir”
2.- Extensión lesiones a los labios (superior,
inferior), paladar y paredes del esófago.

24. 24
Patogenia Leishmaniosis visceral
1. Lesión inicial constituida por una pápula
eritematosa.
2. Diseminación vía hematógena hacia órganos ricos
en células del sistema mononuclear fagocitario.
3. No suele producir lesiones cutáneas.
La condición de inmunosupresión del paciente lo hace
susceptible a complicaciones por infecciones secundarias

25. 25
Patología Leishmaniosis visceral
1. Bazo: esplenomegalia, aumento espesor capa Malpighi,
hiperesplenismo.
2. Hígado: hepatomegalia, aumento volumen células Von Kuppfer,
fibrosis, hipertensión portal, disminución protombina, disminución
albúmina, aumento gamma globulinas.
3. Riñón: síndrome nefrótico.
4. Médula ósea: anemia, trombocitopenia, neutropenia.
Período incubación: 2 – 4 meses.
Síntomas: fiebre (40 – 42 ºC), esplenomegalia,
hepatomegalia, lesiones renales, hemorragias, edema.

26. 26
Formas clínicas Leishmaniosis visceral
1. Forma asintomática o latente: ausencia síntomas, reacción
Montenegro positiva.
2. Forma aguda: evolución rápida y fatal (20-45 días). Inversión
relación albúmina/globulina, trombocitopenia, reacción
Montenegro (-). Muerte causada por septicemia y hemorragias.
3. Forma subaguda: 5 meses – 1 año.
4. Forma crónica: dura varios años. Más frecuente.
5. Leishmaniosis dérmica post kala-azar: aparición lesiones
cutáneas semanas o años posterior al tratamiento. Producida por
L. donovani.

27. 27
Características clínicas de las Leishmaniosis
Leishmaniosis Forma
Zona de
Afección
Manifestaciones clínicas
Cutánea
Localizada
Piel
 Lesiones generalmente individuales circunscritas al sitio
de inoculación
 La lesión cutánea típica es la úlcera
Difusa  Lesiones nodulares diseminadas por todo el cuerpo
Muco-cutánea Mucosa
 Lesiones muco-cutáneas que afectan la región
nasofaríngea
 Dificulta para respirar y deglutir
 Puede presentar disfonía, afonía e incluso asfixia
Visceral Aguda
Crónica
Hígado
Bazo
Ganglios
Afecta con menor
frecuencia:
Aparato Digestivo
SNC
 Fiebre irregular prolongada
 Esplenomegalia
 Anemia
 Pérdida de peso
 Nódulos subcutáneos
 Ulceraciones de la piel
 Cambios de color de la piel
 Cabello quebradizo
 Piel seca y escamosa de aspecto gris ceniciento

28. Diagnóstico Leishmaniosis cutánea,
cutáneo-mucosa y cutáneo-difusa
28
 Clínico-epidemiológico:
Residencia o procedencia área endémica
Picada flebótomos
Actividad laboral
Lesiones cutáneas
Lesiones deformantes mucosa
Diagnóstico diferencial: blastomicosis, sífilis, lepra.
 Laboratorio:
- Métodos parasitológicos
- Métodos inmunológicos

29. Diagnóstico Leishmaniosis cutánea,
cutáneo-mucosa y cutáneo-difusa
29
1. Métodos parasitológicos:
Biopsia cutánea
Frotis aposición
Cultivos axénicos
2. Métodos inmunológicos:
Reacción Intradérmica Montenegro
Inmunofluorescencia
ELISA

30. Diagnóstico Leishmaniosis cutánea,
cutáneo-mucosa y cutáneo-difusa
30
 Biopsia cutánea
Biopsia de lesión no ulcerosa
con sacabocados
Corte de piel con macrófagos
parasitados

31. Diagnóstico Leishmaniosis cutánea,
cutáneo-mucosa y cutáneo-difusa
31
Lesión ulcerosa
Puede estar contaminada con otros patógenos.
Pasos a realizar:
1. Limpieza de la zona (agua oxigenada, Furacin,
yodo, alcohol isopropílico).
2. Remover material costroso, tejidos necrotizados
y pus.
3. Tomar la muestra de los bordes de la lesión,
debido a que allí existe mayor posibilidad de
encontrar los parásitos.
4. Fijar las muestras obtenidas.
 Biopsia cutánea

32. Diagnóstico Leishmaniosis cutánea,
cutáneo-mucosa y cutáneo-difusa
32
Leishmaniosis cutáneo-mucosa
Puede estar contaminada con otros patógenos.
Pasos a realizar:
1. Limpieza de la zona (agua oxigenada, Furacin,
yodo, alcohol isopropílico).
2. Anestesiar la zona (Xylocaína 10%).
3. Obtener la muestra con bisturí.
4. Fijar las muestras.
 Biopsia cutánea

33. Diagnóstico Leishmaniosis cutánea,
cutáneo-mucosa y cutáneo-difusa
33
Presencia de amastigotes en el interior de
células macrofágicas en un frotis por aposición

34. Diagnóstico Leishmaniosis cutánea,
cutáneo-mucosa y cutáneo-difusa
34
 Cultivos axénicos
1. Monofásicos: simulan el estómago del flebótomo
Eagle
Medio Esencial Mínimo + 20% SFB
RPMI 1640
Medio Schneider
Medio LITB
2. Bifásicos (contiene agar):
Medio de Novy, NcNeall y Nicolle (NNN)
Agar Sangre USAMRU
Medio de Senekjie
Crecimiento de
promastigotes

35. Diagnóstico Leishmaniosis cutánea,
cutáneo-mucosa y cutáneo-difusa
35
1. Prueba de hipersensibilidad retardada mediada por células del
sistema inmune.
2. Se inyecta 0,1 a 0,2 ml de cultivo de promastigotes de
Leishmania braziliensis en la cara anterior del antebrazo.
3. Revisión a las 24-48 horas. Positiva Pápula > 5 mm
4. Resultados:
Negativa (-): No hay ninguna reacción.
Débilmente + (dudosa): pápula palpable (1-4 mm) pero no
visible.
Positiva (++): pápula visible (> 5 mm) y rodeada de un área
eritematosa.
Positiva fuerte (+++): pápula sobresaliente (> 10 mm) y
rodeada de un halo muy grande de área eritematosa.
Positiva intensa (++++): aparición de necrosis en el área
inoculada.
Muy útil para diagnóstico de leishmaniosis cutánea
 Reacción Intradérmica Montenegro (Prueba de la Leishmanina)

36. Leishmaniosis cutánea
36
Leishmaniosis cutánea (lesiones secas)
Agentes: L. braziliensis, L. guyanensis, L. panamensis,
L. peruviana, L. gharnani, L. venezuelensis

37. Leishmaniosis cutáneo-mucosa
37
Leishmaniosis cutánea-mucosa
(lesiones ulcerosas)
Agente: L. braziliensis

38. Leishmaniosis cutáneo-mucosa
38
Leishmaniosis cutánea-mucosa
(destrucción paladar y septo nasal)
Agente: L. braziliensis

39. Leishmaniosis cutáneo-difusa
39
Leishmaniosis cutáneo-difusa
Agentes: L. mexicana, L. pifanoi,
L. amazonensis
El parásito se difunde a través de la linfa

40. Leishmaniosis cutáneo-difusa
40
Leishmaniosis cutáneo-difusa
Agentes: L. mexicana, L. pifanoi,
L. amazonensis

41. Leishmaniosis visceral (Kala-azar)
41
Tropismo por vísceras (hígado, bazo, médula
ósea)
Agentes: L. donovani, L. infantum,
L. chagasi

42. Diagnóstico Leishmaniosis visceral
42
 Clínico-epidemiológico:
Residencia o procedencia área endémica
Picada flebótomos
Fiebre
Hepatomegalia
Esplenomegalia
Diagnóstico diferencial: malaria, Chagas, brucelosis.
 Laboratorio:
- Métodos parasitológicos
- Métodos inmunológicos
- Métodos auxiliares

43. Diagnóstico Leishmaniosis visceral
43
1. Métodos parasitológicos:
Punción vísceras (Hígado, bazo, médula ósea)
Láminas Giemsa
Cultivos axénicos
Búsqueda Sangre periférica
2. Métodos inmunológicos:
Reacción Intradérmica Montenegro (POCO ÚTIL)
Inmunofluorescencia
ELISA
Aglutinación
3. Métodos auxiliares: inversión relación albúmina/globulina.
Reacción formol-gel
Reacción Brahmachari

44. Diagnóstico Leishmaniosis visceral
44
Punción de las vísceras
Punción de bazo
Punción de médula ósea

45. Diagnóstico Leishmaniosis visceral
45
Punción médula ósea Sangre periférica

46. Diagnóstico Leishmaniosis visceral
46
Amastigotes de Leishmania donovani en el interior de macrófagos
obtenidos a partir de punción de médula ósea

47. Diagnóstico Leishmaniosis visceral
47
Métodos Inmunológicos
 Prueba de aglutinación directa (DAT): ampliamente utilizado
y con una gran sensibilidad.

48. Diagnóstico Leishmaniosis visceral
48
Métodos Inmunológicos
 Ensayo inmunoenzimático (ELISA): ampliamente utilizado y
con una gran sensibilidad.

49. Diagnóstico Leishmaniosis visceral
49
Métodos Inmunológicos
 Técnica inmunocromatográfica (tira reactiva): se basa en la
elaboración de tiras que contiene el péptido recombinante rK39 de
Leishmania donovani.

50. 50
Se basan en una
inversión de la
relación albúmina-
globulina debido a la
gran cantidad de IgG
producida por el
paciente infectado.
Métodos auxiliares
 Reacción formol-gel: Opacificación y coagulación
del suero, por inversión albúmina/globulina y presencia de
globulinas anómalas. Se añade una gota de formol al 30%
en un mL de suero y se lee a los 60 minutos.
Diagnóstico Leishmaniosis visceral

51. Diagnóstico Leishmaniosis visceral
51
Métodos auxiliares
 Reacción formol-gel:
Formol (40%)
- = Negativo, suero no alterado.
+ = Dudosa, coagulación sin opacificación.
++ = Positiva, coagulación y opacificación
discreta.
+++ = Positivo Fuerte, coagulación con
opacificación acentuada no total.
Son pruebas inespecíficas.

52. Diagnóstico Leishmaniosis visceral
52
Métodos auxiliares
 Reacción Brahmachari: se deja caer lentamente por la pared de
un tubo que contiene 1 mL de suero 2 mL de agua destilada.
Reacción +: formación de un anillo.

53. Leishmaniosis dérmica postkala-azar
53

54. Leishmaniosis dérmica postkala-azar
54
1. Aparición de lesiones cutáneas posterior
al tratamiento de leishmaniosis visceral.
2. Causada por Leishmania donovani.

55. Diagnóstico
55
Amastigotes de Leishmania sp.

56. Diagnóstico
56
Amastigotes de Leishmania sp.

57. Diagnóstico
57
Promastigotes de Leishmania sp.

58. 58
Ecología Leishmaniosis
Leishmania braziliensis: leishmaniosis cutáneo- mucosa (Ulcera Bauru ó
espundia). Brasil, en especial Amazonas y áreas adyacentes países vecinos
(Venezuela, Colombia, Ecuador, Perú, Bolivia, Paraguay, Norte Argentina)
Venezuela: Zona montañosa (Costa, Andes, Llanos), Depresión
Yaracuy, Zonas boscosas Turén.
Leishmania guyanensis: leishmaniosis cutánea (pian-bois). Guayana.
Leishmania panamensis: leishmaniosis cutánea.
Panamá, Costa Rica, Venezuela, Colombia.
Leishmania peruviana: leishmaniosis cutánea (uta).
Cordillera Andina (Venezuela, Colombia, Ecuador, Perú, Bolivia).
500 – 3000 mts altitud.

59. 59
Ecología Leishmaniosis
Leishmania mexicana: leishmaniosis cutáneo difusa (úlcera de los
chicleros). México, Guatemala, Belice.
Leishmania amazonensis: leishmaniosis cutáneo- mucosa.
Bahía amazónica Brasil.
Leishmania pifanoi: leishmaniosis cutáneo-difusa.
Venezuela.
Leishmania gharnani y Leishmania venezuelensis: leishmaniosis cutánea.
Venezuela (Estado Lara).
Leishmania infantum
Leishmania chagasi
Leishmania donovani: India, Pakistán, Bangladesh, África Oriental
Sur México al
Norte Argentina

60. 60
Epidemiología Leishmaniosis
1. Reservorio o fuente infección: Antropozoonosis
L. braziliensis: roedores, perro, caballos.
L. peruviana: perro.
L. guyanensis: pereza, oso hormiguero.
L. panamensis: pereza.
L. mexicana: roedores silvestres.
L. amazonensis: roedores, rabipelados.
L. chagasi: perro, zorro, hombre.
L. infantum: perro, zorro, hombre.
Leishmaniosis canina

61. 61
Epidemiología Leishmaniosis
2. Mecanismo transmisión:
Picada Vector Biológico Enfermedad Metaxénica
Lutzomyia panamensis
Lutzomyia youngi
Lutzomyia gomezi
Lutzomyia ovallesi
Leishmaniosis cutánea, cutáneo-
mucosa, cutáneo-difusa.
Lutzomyia longipalpis: leishmaniosis visceral
Phlebotomus (Asia, África, Europa)
Hombre, animales silvestres y domésticos.
3. Hospedador susceptible:

62. Epidemiología Leishmaniosis
62
Flebótomos
Orden Diptera (1 par de alas membranosas)
Suborden Nematocera (Antenas largas)
Familia Psychodidae (Flebótomos)
Género Lutzomyia
Lutzomyia longipalpis
Lutzomyia panamensis
1. Aspecto jorobado
2. Antenas largas
3. Alas lanceoladas
4. Cubierto vellos
(Metamorfosis completa)
Actividad crepuscular

63. Epidemiología Leishmaniosis
63
Adulto de Lutzomyia sp.
Hembra Lutzomyia sp.
Espermateca
Genitalia
Macho Lutzomyia sp.
Gonapófisis
superior
Gonapófisis
media
Gonapófisis
inferior Lamela
Genitalia
(ejemplar macho)

64. Tratamiento
64
 Antimoniales pentavalentes
Glucantime
Interfiere con el metabolismo del amastigote
 Antibióticos
Anfotericina B:
Alteración de la permeabilidad de la membrana
Lisis celular
 Vacuna (en estudio)

65. Profilaxis
65
Leishmaniosis
Diagnóstico y
tratamiento de
personas
infectadas
Control del
reservorio
Control del
flebótomo
mediante
fumigaciones
Uso de repelente
en cremas o
aerosoles de
aplicación tópica
Uso de
mosquiteros o
mallas
protectoras
Saneamiento
ambiental
Educación
sanitaria

66. Bibliografía
66
 Almeida Andrade HT, Serpa Filho A. (2021). Principios básicos de Entomología médica. Brasil: Kindle edition.
 Becerril M. (2008). Parasitología Médica. 2da Edición. México: Editorial McGraw-Hill Interamericana.
 Botero D, Restrepo M. (2012). Parasitosis humanas. 5ta Edición. Colombia: Corporación para Investigaciones
Biológicas.
 Gállego Berenguer J. (2007). Manual de Parasitología: morfología y biología de los parásitos de interés
sanitario. España: Edicions de la Universitat de Barcelona.
 Hómez J, Soto R, De Soto S, Méndez H, Mármol P. (2004). Parasitología, Libro de Texto. 10ma Edición.
Venezuela: Editorial de la Universidad del Zulia (Ediluz).
 Incani RN. (2012). Guía de Parasitología. Venezuela: Escuela de Medicina, FCS- UC.
 Markell EK, John DT, Krotoski WA. (1999). Medical Parasitology. 8va Edición. USA: Editorial W.B. Saunders.
 Rey L. (2001). Parasitología. 3ra Edición. Brasil: Editorial Guanabara-Koogan.
 Rodríguez Pérez EG. (2013). Parasitología médica. 1ra Edición. México: Editorial El Manual Moderno.
 Todd A, Sanford L, Davidsohn P. (1988). Diagnóstico y tratamiento clínicos por el laboratorio. 8va Edición.
Tomo I.