3. MORFOLOGÍA MACROSCÓPICA
• Hongo comestible
• Color es blanco
• Su carne es compacta en el sombrero y fibrosa y
blanca en el pie con sabor y olor agradable.
• El sombrerillo de esta seta es redondeado, con la
superficie lisa, abombada y convexa cuando es
joven, aplanándose luego poco a poco.
4. MORFOLOGÍA MICROSCÓPICA
• Presentan un micelio de color blanco,
una textura algodonosa, cantidad
regular de micelio aéreo en medio de
cultivo.
5. ENZIMA LACASA
• Es una glicoproteína dimérica o tetramérica, usualmente presenta cuatro
átomos de cobre.
• Son enzimas pertenecientes al grupo de las oxidasas de cobre azul.
• Catalizan la oxidación de un substrato orgánico o inorgánico y
la reducción de oxígeno molecular a agua, por medio de un mecanismo de
transferencia de un electrón.
6. IMPORTANCIA INDUSTRIAL
• Remover compuestos xenobióticos de residuales acuosos.
• Destoxificación de compuestos fenólicos en vinos.
• Obtención de hidrolizados de lignocelulosa antes de ser usados para la
fermentación alcohólica por S. cerevisae.
• Decoloración de colorantes textiles.
8. Tinción simple
de colonias
Evaluación cualitativa Producción de lacasas con
ABTS ( 3 etilbenzotiazolina-6 acido sulfónico)
Micrografía de micelios de Plerotus spp.
a) Dicariótico (con fibulas) y b) monocariótico (sin fibulas).
11. PURIFICACIÓN DE LA ENZIMA
El caldo de cultivo (100 litros) se centrifugó en
una centrífuga tubular marca Sharples Modelo
AS-16 a 15 000 RPM (13 200 g).
Posteriormente, el sobrenadante se concentró
por ultrafiltración en un equipo de fibra hueca
de 20 litros marca Amicon Modelo DC 10 L.
La primera filtración se realizó en un cartucho
de fibra hueca (H5 MP-43) con un corte de 0.1
Hm.
La segunda filtración y concentración se
realizó con un cartucho (H10 P10-20) con un
corte de 10 000 Da, obteniéndose un volumen
de 3.8 litros. Centrífuga tubular
12. La solución enzimática concentrada se sometió a un fraccionamiento por precipitación
con sulfato de amonio.
La primera precipitación se llevó a cabo con 50% de saturación a 4°C.
El precipitado se desechó y el sobrenadante se llevó al 100% de saturación de sulfato
de amonio.
El precipitado de esta segunda fracción se redisolvió en 900 mL de amortiguador 60
mM de fosfato de sodio, pH 6.0. La solución enzimática se dividió en volúmenes de 100
mL y dializó en una membrana de 12 000 Da contra 4 L de un amortiguador 10 mM de
fosfatos, pH 6.0, a 4°C.
El solvente de diálisis se cambió dos veces.
13. PURIFICACIÓN DE LA ENZIMA
La solución se sometió a una cromatografía de intercambio aniónico débil sobre DEAE-celulosa
(dietilaminoetilcelulosa) de Sigma-Aldrich Co, eluyendo con un gradiente de NaCl de 0 a 1 M
en un amortiguador 10 mM de fosfatos pH 6.0.
Las fracciones que presentaron actividad fueron colectadas y concentradas en una celda de
ultrafiltración con una membrana de 10 000 Da de corte.
Finalmente, la solución se sometió a una cromatografía de intercambio aniónico fuerte
utilizando resina High Q (Bio-Rad laboratorios) y eluyendo con un gradiente de NaCl de 0 a 1
M en un amortiguador 10 mM de fosfatos pH 6.0.
